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篇1

【摘要】目的 評(píng)價(jià)貝克曼全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)甲狀腺激素的效果。方法 測(cè)定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分別計(jì)算批內(nèi)精密度、批間精密度、回收率和線性范圍。結(jié)果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批內(nèi)精密度分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批間精密度分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,線性范圍分別為0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。結(jié)論 貝克曼全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)測(cè)定甲狀腺功能具有重復(fù)性好、準(zhǔn)確度高、可報(bào)告范圍寬、測(cè)定速度快等優(yōu)點(diǎn),適合于臨床應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光免疫分析法;甲狀腺激素

化學(xué)發(fā)光免疫分析法是20世紀(jì)80年代以來(lái)發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新的標(biāo)記免疫技術(shù),在臨床上有廣泛的應(yīng)用,包括內(nèi)分泌激素、腫瘤標(biāo)志物、血藥濃度、傳染病、心血管疾病標(biāo)志物、貧血及過(guò)敏原等,特別是在甲狀腺激素檢測(cè)中應(yīng)用更為廣泛[1]。本文采用貝克曼全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)T3、T4、FT3、FT4、TSH,對(duì)其方法學(xué)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器貝克曼全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。

1.2 試劑發(fā)光試劑、質(zhì)控品、標(biāo)準(zhǔn)品由貝克曼公司提供。

1.3 血清來(lái)源試驗(yàn)所需血清樣本采自本院門診和住院患者,每例取3ml血,離心3000 r/min,10分鐘,取血清-70℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 檢測(cè)方法利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測(cè)定方法,其反應(yīng)原理與放免和酶免中的雙抗夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法相似,嚴(yán)格按試劑盒操作說(shuō)明書操作。

1.5 評(píng)價(jià)指標(biāo)

1.5.1 批內(nèi)精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本,每種濃度同批平行測(cè)定10次,計(jì)算平均變異系數(shù)(CV)。

1.5.2 批間精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本各10份,每天各測(cè)定1次,共測(cè)定10天,計(jì)算平均變異系數(shù)(CV)。

1.5.3回收率:由貝克曼公司提供原裝3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,分別測(cè)定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每個(gè)濃度平行測(cè)定3次,計(jì)算平均回收率。

1.5.4 線性范圍收集患者血清標(biāo)本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH濃度高于廠家提供線性范圍上限作為高值濃度水平(H),廠家提供稀釋液作為低值濃度水平(L),用稀釋液稀釋高值濃度血清,形成如下系列濃度檢測(cè)標(biāo)本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列濃度標(biāo)本平行測(cè)定各項(xiàng)指標(biāo)含量,取平均值作圖,取在坐標(biāo)紙上呈明顯直線趨勢(shì)的各點(diǎn)值進(jìn)行直線回歸統(tǒng)計(jì),取回歸系數(shù)r大于0.9的濃度范圍為可報(bào)告的濃度線性范圍。

2 結(jié) 果

2.1 批內(nèi)精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。

2.2批間精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數(shù)分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。

2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。

2.4 線性范圍T3所測(cè)結(jié)果得到回歸方程為y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距經(jīng)t檢驗(yàn),ta=1.36,0.95,截距經(jīng)t檢驗(yàn),ta=0.36,

3 討 論

血清中三碘甲狀原腺氨酸(T3)、四碘甲狀原腺氨酸(T4)、游離三碘甲狀原腺氨酸(FT3)、游離四碘甲狀原腺氨酸(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)的測(cè)定對(duì)甲狀腺疾病的診斷具有重要價(jià)值。以往國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室多采用RIA、MIRA檢測(cè)血清甲狀腺激素水平,此法雖較準(zhǔn)確,儀器與試劑也較為低廉,但對(duì)操作人員水平要求較高,對(duì)實(shí)驗(yàn)條件及環(huán)境有較多要求,且隨著標(biāo)記抗原的放射性衰減,而使計(jì)數(shù)不穩(wěn)定及曲線失真,導(dǎo)致結(jié)果偏離,結(jié)果重復(fù)性差,且可產(chǎn)生放射性污染[2,4]。

近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是利用化學(xué)發(fā)光技術(shù)和磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的測(cè)定方法,其反應(yīng)原理與放免和酶免中的雙抗體夾心法、競(jìng)爭(zhēng)法相似。其優(yōu)點(diǎn)是[3,5]:(1)成熟的單克隆抗體技術(shù)或獨(dú)特的磁性微粒子技術(shù),保證了反應(yīng)的高特異性;(2)檢測(cè)范圍寬,具有良好的稀釋線性;(3)試劑穩(wěn)定性好,不需酶促反應(yīng),有效期可長(zhǎng)達(dá)半年;(4)操作簡(jiǎn)便,分析過(guò)程采用全自動(dòng)化,減少了人工操作誤差,重復(fù)性好;(5)試劑及標(biāo)本均采用無(wú)吸附材料,故相互間的交叉污染率低,干擾因素少;(6)真正的隨機(jī)連續(xù)檢測(cè),樣本隨到隨測(cè),具有急診優(yōu)先插入功能。因此全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)是目前檢測(cè)甲狀腺激素等指標(biāo)的較好方法。

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篇2

doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.17.168

工作人員英語(yǔ)水平及業(yè)務(wù)素質(zhì)的要求

人員的因素是保證生化檢驗(yàn)質(zhì)量的前提。醫(yī)院各級(jí)領(lǐng)導(dǎo)要提高認(rèn)識(shí),引起重視。進(jìn)口全自動(dòng)生化分析儀的操作界面大都是英文,對(duì)工作人員的英語(yǔ)水平就要有一定的要求,以適應(yīng)工作的需要,科室領(lǐng)導(dǎo)要能合理安排工作人員;經(jīng)過(guò)專門的技術(shù)培訓(xùn),應(yīng)掌握儀器的性能工作原理,儀器的參數(shù)設(shè)置和試劑的準(zhǔn)備,熟悉儀器各部件結(jié)構(gòu),儀器的保養(yǎng)與維護(hù)及一般故障的排除,培訓(xùn)完畢考核合格后才能上崗。近兩年,我國(guó)正在逐步實(shí)行大型儀器使用培訓(xùn)的上崗考核制度,這也能進(jìn)一步提高我們工作人員的業(yè)務(wù)素質(zhì)。

為全自動(dòng)生化分析儀提供良好的工作環(huán)境

全自動(dòng)生化分析儀的運(yùn)行必須要有一個(gè)好的工作環(huán)境。包括穩(wěn)定的電流、電壓和接地保護(hù)的電源系統(tǒng)。適應(yīng)儀器工作范圍的溫度和濕度,實(shí)驗(yàn)室的潔凈度等。應(yīng)當(dāng)配置UPS保護(hù)電源,用來(lái)應(yīng)對(duì)突然斷電的情況。要有一個(gè)相對(duì)獨(dú)立穩(wěn)定的工作環(huán)境。任何環(huán)境的變化都有可能影響到儀器的穩(wěn)定性,從而影響到檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度,因此要及時(shí)觀察做好記錄以便出現(xiàn)問(wèn)題及時(shí)得到糾正。

全自動(dòng)生化分析儀的維護(hù)與保養(yǎng)

全自動(dòng)生化分析儀的維護(hù)與保養(yǎng)包括儀器的清潔、清洗液的配制、每天光度計(jì)的檢測(cè),杯空白的測(cè)定、每天開機(jī)、關(guān)機(jī)對(duì)石英比色杯的清洗,加樣針頭的定期徹底清理等。工作人員應(yīng)有高度的責(zé)任心,嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作。儀器在使用間隔一段時(shí)間后,要為其工作軸承元件抹油,保護(hù)工作元件的正常運(yùn)行。建議在每隔一年使用期限與供應(yīng)商取得聯(lián)系,派專職的工程師為儀器做一個(gè)全面的保養(yǎng)以維護(hù)儀器的性能穩(wěn)定及延長(zhǎng)儀器的使用壽命。同時(shí)每年定期對(duì)儀器進(jìn)行了校準(zhǔn),以保證其靈敏度達(dá)到試驗(yàn)的要求。

標(biāo)準(zhǔn)品的正確選擇和使用

由于生化試劑存在批間差異,在使用不同批次的試劑時(shí),應(yīng)及時(shí)校準(zhǔn)儀器。實(shí)踐證明,使用定值洪凍干標(biāo)準(zhǔn)血清比使用水溶液標(biāo)準(zhǔn)要好,原因可能是定值凍干血清與樣品(血清)成分更接近,水溶液標(biāo)準(zhǔn)不具有血清的黏稠性,在吸樣針吸樣時(shí)血清與水溶液在吸樣針的黏度不一樣會(huì)造成誤差;另一方面反應(yīng)速度不同,水溶液反應(yīng)速度比血清快,而造成誤差。在使用定值凍干標(biāo)準(zhǔn)血清時(shí),準(zhǔn)確吸取重蒸水稀釋復(fù)溶,輕輕顛倒混勻,避光放置30～60分鐘使用。

試劑的管理

目前試劑種類較多,儀器配套試劑、進(jìn)口試劑、國(guó)家試劑等等,不同的生產(chǎn)廠家、不同型號(hào)的全自動(dòng)生化分析儀對(duì)試劑的要求不完全相同。原則是建議使用儀器配套的系列試劑產(chǎn)品。使用其他試劑,應(yīng)先進(jìn)行樣準(zhǔn),使儀器性能做到最佳?？偟膩?lái)講,進(jìn)口試劑優(yōu)于國(guó)家試劑,表現(xiàn)在試劑的穩(wěn)定性、線性,儲(chǔ)存使用前配置等。試劑的存放要有專用冰箱,建立冰箱溫度每日登記制度,以保證試劑的貯存條件達(dá)到要求,對(duì)試劑要定期清理,及時(shí)處理過(guò)期試劑。

完善室內(nèi)質(zhì)控制度

室內(nèi)質(zhì)控是各實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)本室工作質(zhì)量,以決定常規(guī)檢測(cè)報(bào)告能否發(fā)出所采取的一系列檢查、控制手段。旨在檢測(cè)和控制本室常規(guī)工作的精密度,并檢測(cè)其準(zhǔn)確度的改變,提高本室常規(guī)工作中批間和日間標(biāo)本檢測(cè)的一致性。因此,室內(nèi)質(zhì)控工作每天必不可少。一段時(shí)間內(nèi)必需選擇同一廠家性能穩(wěn)定的質(zhì)控品。質(zhì)控品的穩(wěn)定性受到多種因素影響,比如質(zhì)控品的運(yùn)輸條件、貯存條件、檢測(cè)條件等。在試劑質(zhì)量和標(biāo)準(zhǔn)品得到保證的前提下,對(duì)每一批質(zhì)控品多次檢測(cè),獲得本室的檢測(cè)均值作為其靶值,建立本室的質(zhì)量控制體系,廠家經(jīng)出的靶值可作為參考。為了避免有些標(biāo)本結(jié)果偏離線性范圍而導(dǎo)致失控,應(yīng)采用高、低不同濃度的質(zhì)控血清。在完善室內(nèi)質(zhì)控的基礎(chǔ)上積極參加室間質(zhì)評(píng),只有認(rèn)真做好室內(nèi)質(zhì)控才能保證獲得好的室間質(zhì)評(píng)成績(jī)。

正確對(duì)待室間質(zhì)量工作及反饋的信息

目前在我國(guó)的醫(yī)院等級(jí)評(píng)審制度中將檢驗(yàn)科室間質(zhì)評(píng)成績(jī)作為醫(yī)院達(dá)標(biāo)的指標(biāo)之一。室間質(zhì)量評(píng)價(jià)由第三方機(jī)構(gòu)采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評(píng)價(jià)各實(shí)驗(yàn)室的試驗(yàn)結(jié)果,并發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室本身不易發(fā)現(xiàn)的不準(zhǔn)確性,了解各實(shí)驗(yàn)室之間結(jié)果的差異,幫助其校正,使其結(jié)果具有可比性。我們?cè)谡J(rèn)真做好室內(nèi)質(zhì)控的同時(shí)[1],一定要正確對(duì)待室間質(zhì)評(píng)工作及反饋的信息。每次室間質(zhì)都要由科室認(rèn)真獨(dú)立完成,并如實(shí)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。當(dāng)收到反饋單后要認(rèn)真分析反饋單中所反映出的問(wèn)題,積極查找原因,采取措施提高測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性,提高不同實(shí)驗(yàn)室之間測(cè)定結(jié)果的可比性。

標(biāo)本分析前的質(zhì)量管理

標(biāo)本分析前的工作由各科醫(yī)師、護(hù)士及檢驗(yàn)科人員等共同完成。因環(huán)節(jié)較多是很容易出問(wèn)題的,也是全面質(zhì)量控制工作中最難控制的環(huán)節(jié),我們要主動(dòng)與臨床溝通,包括患者的準(zhǔn)備、標(biāo)本采集的方法、數(shù)量,特殊樣品的留取、按時(shí)送檢等。當(dāng)檢驗(yàn)科工作人員接到標(biāo)本時(shí)要認(rèn)真核對(duì),不合格的標(biāo)本要重新采集。發(fā)現(xiàn)標(biāo)本有黃疸、脂血、溶血等對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響的情況,應(yīng)注明在報(bào)告單上,以便醫(yī)師在分析報(bào)告時(shí)可結(jié)合標(biāo)本信息去分析。

建立檢測(cè)結(jié)果審核制度

在審核報(bào)告單之前,要認(rèn)真分析室內(nèi)質(zhì)控情況,對(duì)當(dāng)天檢測(cè)結(jié)果的可信度作出判斷,對(duì)報(bào)告單逐一審核,檢查數(shù)據(jù)有無(wú)不合理的情況。符合復(fù)查條件的一定要進(jìn)行復(fù)查后再發(fā)報(bào)告。遇到特殊情況,應(yīng)與臨床及時(shí)溝通,查找原因,確保結(jié)果的可靠性。

以上幾個(gè)方面是一個(gè)整體,分析前、中、后環(huán)環(huán)相扣,缺一不可,只有全面做好各環(huán)節(jié)的質(zhì)量管理,才能為患者發(fā)出真實(shí)可靠的報(bào)告[2]。

參考文獻(xiàn)

篇3

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篇4

【關(guān)鍵詞】胰島素（IRI）；光量子數(shù)；前胰島素原；胰島素原；化學(xué)發(fā)光免疫法

【Abstract】ObjectiveToexploreareliablemethodforthedeterminationofinsulin.MethodsGatherfastingagglutinatingblood,centrifugalizethemrespectivelytogettheserum,whichweredirectlysetoninstrumenttodetermine.ResultsLinearrang:0～335.0mIU/L，senitivity:themeanquantumof0mIU/LIRI,10.1mIU/LIRI,152.0mIU/LIRIand335.0mIU/LIRIwere3808,30350,357399and684567.Specificity:whenthecontrolserumwasdetermined,themeasurevlaluewaswithinthestandarddeviation（SD）,95%-105%.Precision:N=60CV≤5%.ConclusionChemiluminescenceisareliable,stablemeasurementmethodfordeterminationofinsulinwithhighsensitivity,precisionandspecificity.

【Keywords】insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質(zhì)激素，這是由胰島中的β細(xì)胞所合成、儲(chǔ)存和分泌的。IRI的功能是調(diào)節(jié)血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細(xì)胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個(gè)氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRIA鏈?zhǔn)怯?1個(gè)氨基酸組成，B鏈?zhǔn)怯?0個(gè)氨基酸組成；而C-肽是由31個(gè)氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產(chǎn)生應(yīng)答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規(guī)診斷方法，但是IRI水平的檢測(cè)對(duì)于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細(xì)胞分泌功能異?；颊叩囊饬x非常大［2，3］。

1材料與方法

1.1原理IRI的測(cè)定是一種直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和雙抗體兩點(diǎn)夾心免疫分析法相結(jié)合的測(cè)定方法。第一種抗體稱為標(biāo)識(shí)抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標(biāo)記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價(jià)鍵的方式與順磁性顆粒相結(jié)合形成的。血清中的胰島素與相應(yīng)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生光量子，其光量子數(shù)的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2儀器與試劑儀器：BAERACS-180型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標(biāo)準(zhǔn)液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3方法取血清于樣品杯中，置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，調(diào)整好檢測(cè)參數(shù)：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對(duì)反應(yīng)杯進(jìn)行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)發(fā)光，讀取光量子數(shù)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出結(jié)果。

1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線制備采用兩點(diǎn)定標(biāo)法，將標(biāo)準(zhǔn)血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標(biāo)位置上，編入測(cè)定程序，上機(jī)測(cè)定自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2結(jié)果

2.1精密度取混合血清分成兩份，一份當(dāng)天測(cè)定60次，結(jié)果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為1.8%；另一份做批間試驗(yàn)，測(cè)定10次，測(cè)定統(tǒng)計(jì)值為21±1.2mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為2.8%。

2.2靈敏度0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。IRI測(cè)定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3回收試驗(yàn)在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進(jìn)行回收試驗(yàn),分別測(cè)得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4線性分析對(duì)一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測(cè)定體系光量子數(shù)的變化量，即為IRI與光量子數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：IRI在本法的測(cè)定范圍是0～335.0mIU/L。當(dāng)IRI大于335.0mIU/L時(shí)，開始偏離線性。因此對(duì)濃度高的標(biāo)本必須先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專缓鬁y(cè)定。

2.5干擾試驗(yàn)當(dāng)溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時(shí),對(duì)結(jié)果干擾甚微。

2.6正常參考值取100份經(jīng)我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測(cè)結(jié)果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

3討論

目前定量測(cè)定IRI的方法不多，過(guò)去一般用放射免疫法，該法測(cè)定步驟繁瑣，為半自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)達(dá)3天，測(cè)定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對(duì)操作人員造成身體傷害及對(duì)周圍環(huán)境形成污染。現(xiàn)在基本已被化學(xué)發(fā)光免疫法所代替，該法測(cè)定步驟簡(jiǎn)單，為全自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間短，全過(guò)程最短為半小時(shí)即可完成，而它使用的試劑安全無(wú)放射性，為一般化學(xué)試劑，對(duì)操作人員無(wú)傷害，對(duì)周圍環(huán)境污染甚微。不過(guò)它也有缺點(diǎn)：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標(biāo)周期短，一般為2周。在試劑的有效期內(nèi)和定標(biāo)周期內(nèi)，對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果非常準(zhǔn)確可靠。綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

【參考文獻(xiàn)】

1康格非,巫向前.臨床生物化學(xué)和生物化學(xué)檢驗(yàn)，第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2001，256.

篇5

關(guān)鍵詞：維生素D；鈣代謝；25.羥基維生素D；全自動(dòng)生化

中圖分類號(hào)：R446.112 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A 文章編號(hào)：1008―2409（2016）04―0171―06

維生素D是人體必需的營(yíng)養(yǎng)素，其營(yíng)養(yǎng)狀況影響著人體鈣和磷的正常代謝，與人體健康密切相關(guān)，因此，準(zhǔn)確測(cè)量維生素D水平對(duì)于多種鈣代謝相關(guān)疾病的預(yù)防和治療有重要意義。維生素D在血液中主要以25-羥基維生素D[25-（OH）D]的形式運(yùn)輸，是評(píng)價(jià)體內(nèi)維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況最為有效的指標(biāo)。高效液相色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、放射免疫法、酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光免疫法、電化學(xué)發(fā)光免疫法、全自動(dòng)生化法等方法均可檢測(cè)血清25-（OH）D濃度，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果對(duì)人體維生素D的營(yíng)養(yǎng)狀況做出評(píng)價(jià)。筆者就常用的血清25-（OH）D濃度的檢測(cè)方法和各自特點(diǎn)作一綜述。

1維生素D概述

維生素D是人體必需的營(yíng)養(yǎng)素，在自然狀態(tài)下，日光照射或植物性食物是維生素D的重要來(lái)源。維生素D是類固醇衍生物，其家族最重要的成員是維生素D2和維生素D3。維生素D2多含于植物性食物中，它是由植物的麥角固醇經(jīng)陽(yáng)光照射而合成的，維生素D3可由人體皮膚和脂肪組織在7-脫氫膽固醇經(jīng)過(guò)陽(yáng)光照射合成，這兩種形式的維生素D均無(wú)生物活性，必須在體內(nèi)經(jīng)過(guò)兩次羥化后方能發(fā)揮生物效應(yīng)。維生素D屬脂溶性維生素，來(lái)自食物中的維生素D2與脂肪一起經(jīng)小腸吸收，在膽汁協(xié)助下形成乳糜微粒，由淋巴管進(jìn)入血液，與陽(yáng)光照射合成的維生素D，一起轉(zhuǎn)運(yùn)入肝臟。維生素D在肝臟中經(jīng)干細(xì)胞微粒體中的25-羥化酶作用下，轉(zhuǎn)化為25-羥基維生素D_[25-（OH）D]，再經(jīng)過(guò)腎臟中線粒體1α羥化酶系統(tǒng)的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩锘钚缘?，25-羥基維生素D[1，25-（OH）2D]。維生素D、25-（OH）D、1，25-（OH）：D在人體內(nèi)的半衰期分別為24 h、2周和4h。維生素D在血液中主要以25-（OH）D的形式運(yùn)輸，其濃度最高，最穩(wěn)定，而且半衰期最長(zhǎng)，能反映食物攝入和日光照射合成的維生素D總量，因此，血清25-（OH）D濃度是評(píng)價(jià)體內(nèi)維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況最為有效的指標(biāo)。通常將維生素D缺乏定義為血清25-（OH）D水平低于20ng/ml，不足為20～30ng/ml，充足為30ng/ml以上。

維持正常的維生素D水平對(duì)調(diào)節(jié)鈣磷代謝至關(guān)重要。具有生物活性的1，25-（OH）2D可以促進(jìn)腸道鈣結(jié)合蛋白的合成，通過(guò)下述3個(gè)方面使血清鈣、磷含量增高；首先，促進(jìn)腸道內(nèi)鈣、磷的吸收和運(yùn)轉(zhuǎn)，增加在體內(nèi)的留存；其次，提高腎小管對(duì)鈣、磷離子的再吸收，使尿鈣、磷排出減少；最后，當(dāng)?shù)脱}膳食中缺鈣時(shí)，在甲狀旁腺素（PTH）的作用下促進(jìn)鈣、磷的吸收，動(dòng)員骨中鈣、磷釋出。在維生素D缺乏的情況下，食物中的鈣只有10%―15%能夠被吸收，磷只有60%能夠被吸收。1，25-（OH）2d通過(guò)與維生素受體結(jié)合，可提高腸道對(duì)鈣磷的吸收效率，使鈣吸收增加至30%～40%，磷增加至80%左右。眾所周知，維生素D具有傳統(tǒng)意義上的骨骼效應(yīng)，近年來(lái)研究顯示，維生素D不僅能夠調(diào)節(jié)鈣磷平衡和骨骼代謝，還具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、調(diào)控細(xì)胞增殖、防治代謝綜合征、抗炎、保護(hù)心血管健康等多種生物學(xué)功能。

然而，維生素D缺乏或不足的狀況在全球范圍內(nèi)普遍存在，按照國(guó)際上對(duì)維生素D狀態(tài)評(píng)價(jià)的普遍標(biāo)準(zhǔn)，全球已有50%的人口存在維生素D缺乏的風(fēng)險(xiǎn)。維生素D缺乏可能導(dǎo)致兒童佝僂病、新生兒低血鈣、甲狀腺功能減退、中老年人骨質(zhì)疏松、骨軟化癥等多種鈣代謝異常疾病，而且可使患高血壓、冠心病的危險(xiǎn)性增加。但長(zhǎng)期或大劑量過(guò)多使用維生素D也會(huì)發(fā)生中毒，過(guò)量維生素D可導(dǎo)致高鈣血癥及多種衰老相關(guān)疾病，因此，有必要探索建立可靠、高效的測(cè)定方法，為維生素D的檢測(cè)、相關(guān)疾病的診斷和預(yù)防提供有力的科學(xué)依據(jù)。

2維生素D的檢測(cè)方法

現(xiàn)有多種方法用于測(cè)定血清25-（OH）D濃度來(lái)評(píng)價(jià)機(jī)體維生素D的營(yíng)養(yǎng)狀況，根據(jù)方法原理不同，可分為色譜分析法和免疫分析法。色譜分析法包括高效液相色譜法（HPLC）和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS），可分離并檢測(cè)不同的分析物，能區(qū)分并分別定量25-（OH）D2和25-（OH）D5。免疫分析法包括放射免疫法（RIA）、酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法（CLIA）、電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法（ECLIA）、全自動(dòng)生化分析法等，由于所有的維生素D羥化物都能發(fā)生抗體抗原結(jié)合反應(yīng)，因此，只能測(cè)定25-（OH）D總量，無(wú)法同時(shí)測(cè)定25-（OH）D2和25-（OH）D3的濃度。

2.1高效液相色譜法（HPLC）

高效液相色譜法（HPLC）是早期應(yīng)用較多的色譜法之一，可以同時(shí)檢測(cè)25-（OH）D2和25-（OH）D3，其靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性都較高，與LC-MS/MS法的結(jié)果一致性較好。與免疫法相比，HPLC的相對(duì)不確定度小，分析操作省時(shí)省力，具有分離效能高、分析速度快、重復(fù)性好、節(jié)約成本、精確度高、可自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。但是HPLC的不足之處是設(shè)備較貴，檢測(cè)通量小，所需樣品量大，標(biāo)本前處理過(guò)程復(fù)雜，對(duì)操作人員要求較高等，目前臨床使用較少。而且，HPLC雖然能夠分開25-（OH）D2和25-（OH）D3，但25-（OH）D2濃度太低，HPLC檢測(cè)限達(dá)不到要求。隨著監(jiān)測(cè)技術(shù)及精度的發(fā)展，F(xiàn)IPLC逐步被LC-MS/MS法所替代。

王劍建立HPLC法測(cè)定正常兒童血清25-（OH）D3含量并評(píng)價(jià)其應(yīng)用。樣品用甲醇沉淀蛋白，以10%二氯甲烷-正己烷提??；甲醇―水（88：12）為流動(dòng)相，選用DiamonsilTm（250 min×4.6 mm，5μm）色譜柱進(jìn)行分離，流速為1 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為265 mm，柱溫30℃。以25-（OH）D3標(biāo)準(zhǔn)品外標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該方法在10～200μg/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系好（r=0.9971），方法回收率為93.4%～106.2%，提取回收率為88.8%～94.1%。同時(shí)也獲得了較好的精度，日內(nèi)變異系數(shù)（CV）為3.5%～4.4%，日間CV為3.9%～4.7%，最小檢測(cè)范圍為5 μg/L。劉怡欣利用HPLC法測(cè)定健康成年人血清25-（OH）D3含量，建立方法學(xué)與上一研究類似，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，25-（OH）D，在線性范圍8～160μg/L內(nèi)與其響應(yīng)值線性關(guān)系良好（r=0.9999），平均回收率為92.5%～109.5%，日內(nèi)精密度（RSD）為2.0%～4.6%，日間RSD為2.9%～5.2%，最小檢測(cè)范圍為4μg/L。此方法檢測(cè)25-（0H）D具有較高的回收率、較好的精密度和準(zhǔn)確性，可用于臨床實(shí)驗(yàn)室開展血清25-（OH）D含量測(cè)定。

2.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）

液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）是色譜法中最為常用的25-（OH）D檢測(cè)方法，樣品經(jīng)處理后采用液相色譜分離，檢測(cè)器為串聯(lián)質(zhì)譜儀，在多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式下，實(shí)現(xiàn)分子離子和碎片離子2次質(zhì)量選擇，可同時(shí)檢測(cè)25-（OH）D2和25-（OH）D3，具有非常高的靈敏度、特異性和準(zhǔn)確性，被國(guó)際公認(rèn)為檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。雖然LC-MS/MS在25-（OH）D檢測(cè)特異性具有明顯的優(yōu)勢(shì)，但需要樣品量較大，樣品前處理復(fù)雜耗時(shí)長(zhǎng)，儀器操作較復(fù)雜，對(duì)操作人員的要求較高，儀器昂貴，而且需要自己開發(fā)方法等，一定程度上限制了LC-MS/MS的臨床推廣使用。

Tai等采用液-液萃取反相LC-MS/MS法檢測(cè)已知濃度的25-（OH）D標(biāo)本，考察和評(píng)價(jià)方法學(xué)。結(jié)果顯示，25-（OH）D2和25-（OH）D3的回收率為99.0%～101.0%，絕對(duì)回收率分別為92%和97%。而且，研究顯示方法的精度非常高，當(dāng)25-（OH）D>1ng/g時(shí)的CV為0.2%～0.6%；25-（OH）D

2.3放射免疫法（RIA）

放射免疫法（RIA）是最為經(jīng)典的測(cè)定血清25-（OH）D的方法。目前應(yīng)用較廣泛的試劑盒采用125I-25-（OH）D3作為示蹤物，與待測(cè)樣品中25-（OH）D競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗25-（OH）D山羊抗體，用兩步抗原抗體反應(yīng)以實(shí)現(xiàn)固液分離，并用Gamma計(jì)數(shù)器檢測(cè)沉淀中125I的放射量以計(jì)算樣品中25-（OH）D的濃度。該方法不需要復(fù)雜的樣品預(yù)處理純化過(guò)程，操作簡(jiǎn)單，解決了HPLC法操作復(fù)雜不適于臨床檢測(cè)應(yīng)用的問(wèn)題。RIA試劑盒目前應(yīng)用比較廣泛、方便，靈敏度高，特異性強(qiáng)，精密度好，所需要的儀器要求較低，是基層單位對(duì)超微量物質(zhì)測(cè)定的主要手段。但是RIA法不能區(qū)分檢測(cè)25-（OH）D2和25-（OH）D3，還具有放射性污染的潛在風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境都有損害，放射性廢物的處理也比較復(fù)雜。而且測(cè)量需要設(shè)立平行樣，花費(fèi)較多，每次檢測(cè)的數(shù)量有限。

多項(xiàng)研究報(bào)道，對(duì)于血清25-（OH）D的測(cè)定，RIA法與LC-MS/MS法測(cè)定結(jié)果的相關(guān)性較好。Van denOuweland等比較了Diasorin RIA法與LC-MS/MS法檢測(cè)來(lái)自國(guó)際維生素D室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃（DEQAS）的室間質(zhì)控標(biāo)本，同時(shí)也分析比較了其他使用LC-MS/MS方法的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，RIA法與LC-MS/MS法結(jié)果符合度高，相關(guān)系數(shù)，r2=0.90，平均偏差為1.61nmol/L。Farrell等對(duì)170例隨機(jī)選取的患者標(biāo)本分別采用RIA法和LC-MS/MS法檢測(cè)，連續(xù)5 d取2份血清重復(fù)測(cè)量5次，以評(píng)估批內(nèi)及批外的精密度，結(jié)果顯示，LC-MS/MS法的一致相關(guān)性（CCC）為0.99，平均偏差為1.4 nmol/L，RIA法與LC-MS/MS，法相當(dāng)，其CCC為0.97，平均偏差為2.7 nmol/L。鄭曉艷對(duì)53例血清樣本分別采用RIA法和LC-MS/MS法檢測(cè)25-（0H）D，結(jié)果顯示兩者相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)，為0.883。RIA法與金標(biāo)準(zhǔn)LC-MS/MS法檢測(cè)的相關(guān)性好，使用方便，適合于常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室開展。

2.4酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）

酶聯(lián)免疫口及附法（ELISA）是早期維生素D測(cè)定的主流方法，是將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法：ELISA法在自動(dòng)化操作、節(jié)省人力、無(wú)污染等方面具有一定的優(yōu)勢(shì)，適合于常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室開展.但是該法只能用于檢測(cè)25-（OH）D總的含量，當(dāng)受試者服用維生素D2時(shí)，ELISA法測(cè)定會(huì)存在偏差，可能造成臨床決策的失誤，使維生素D中毒風(fēng)險(xiǎn)增大

另外，ELISA法的主要缺陷是對(duì)基質(zhì)敏感，容易與其他非目標(biāo)化合物發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致方法特異性不足。而且，酶促反應(yīng)受反應(yīng)溫度、時(shí)間、加樣準(zhǔn)確性、洗板等因素影響.批內(nèi)和批間的變異系數(shù)相對(duì)較大

高玲娟采用ELISA試劑盒檢測(cè)25-（OH）D水平，對(duì)ELISA方法學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ELISA測(cè)定25-（OH）D的批內(nèi)CV為2.13%～4.32%，批間CV

2.5化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法（CLIA）

化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定試劑盒使用連接有異魯米諾衍生物的25-（OH）D與樣品中25-（OH）D競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合包被了25-（OH）D特異性抗體的磁珠，反應(yīng)終止后加入激發(fā)劑，使用光電倍增管檢測(cè)產(chǎn)生的化學(xué)熒光信號(hào)。CLIA法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、快速，無(wú)同位素污染，而且容易自動(dòng)化，現(xiàn)已有多家廠商開發(fā)出相關(guān)自動(dòng)免疫分析儀；缺點(diǎn)是儀器價(jià)格高、只能用于檢測(cè)25-（0H）D總的含量。

單詠梅對(duì)LIAISON全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定25-（OH）D的檢測(cè)性能進(jìn)行驗(yàn)證和評(píng)估，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明線性范圍為6～131 ng/ml，批內(nèi)RSD為5.23%，批間RSD為1.06%，總RSD為6.57%，分析靈敏度為2.5 ng/ml，功能靈敏度為3.0 ng/ml，可以滿足臨床使用需要，F(xiàn)renzel等。對(duì)比了LIAISON CLIA法與Dia RIA法和LC-MS/MS測(cè)定25-（0H）D的結(jié)果相關(guān)性，CLIA法測(cè)定的結(jié)果與RIA檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)為0.94，與LC-MS/MS的相關(guān)系數(shù)為0.95。CLIA測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確性和特異性高，自動(dòng)化、可控性強(qiáng)，適合大規(guī)模維生素D營(yíng)養(yǎng)狀況監(jiān)測(cè)。

2.6電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法（ECLIA）

電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定試劑盒使用生物素標(biāo)記的25-（OH）D與樣品中25-（0H）D競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合釘標(biāo)記的維生素D結(jié)合蛋白（DBP）后，用包被r鏈霉親和素的磁珠將生物素標(biāo)記的25-（0H）D-釕標(biāo)記的維生素D結(jié)合蛋白復(fù)合體固定，光電倍增管檢測(cè)釘?shù)碾姲l(fā)光信號(hào)強(qiáng)度回算樣品中的25-（OH）D濃度。該法具有高靈敏度，且所受影響因素較少，能自動(dòng)化批量操作÷

何國(guó)堅(jiān)應(yīng)用羅氏CS E170分析儀采用ECLIA法檢測(cè)維生素D，結(jié)果顯示，其線性范圍為3～70 ng/ml（r=0.9881，檢出限為3.0 ng/ml；2種不同濃度的定值質(zhì)控血清在準(zhǔn)確度評(píng)估中相對(duì)偏差均

2.7全自動(dòng)生化分析法

全自動(dòng)生化分析法利用全自動(dòng)生化儀，根據(jù)光電比色原理來(lái)測(cè)量血液中25-（OH）D的總含量。由于其操作簡(jiǎn)單、測(cè)量速度快、準(zhǔn)確性較高、消耗試劑量小，在各級(jí)醫(yī)院得到廣泛應(yīng)用。其缺點(diǎn)是僅能檢測(cè)25-（OH）D的總含量，精密度和特異性稍差，儀器間的性能差異大，容易造成樣品間交叉污染。

篇6

結(jié)果顯示在儀器廠商聲明的測(cè)試范圍內(nèi), cTnI、Myo、CK-MB的相關(guān)系數(shù)r均優(yōu)于判斷標(biāo)準(zhǔn), 符合要求。見(jiàn)表2。

表2 線性范圍試驗(yàn)結(jié)果

2.3 M16磁敏免疫分析儀的正確度評(píng)價(jià)結(jié)果

儀器正確度測(cè)試結(jié)果如表3所示, 可知M16磁敏免疫分析儀測(cè)試的cTnI、Myo、CK-MB參考物質(zhì)指定值均包含在測(cè)試結(jié)果95%置信區(qū)間內(nèi), 且相對(duì)偏倚均低于15%, 其檢測(cè)的準(zhǔn)確性符合廠商聲明標(biāo)準(zhǔn)。見(jiàn)表3。

表3 M16磁敏免疫分析儀準(zhǔn)確度測(cè)試結(jié)果

2.4 對(duì)比試驗(yàn)

由于Roche Cobas E602全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光分析檢測(cè)儀檢測(cè)指標(biāo)為Myo、CK-MB, 因此本研究?jī)H采用了Myo、CK-MB進(jìn)行對(duì)比分析。M16磁敏免疫分析儀和Roche Cobas E602電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀分別測(cè)定30份臨床樣品結(jié)果對(duì)比見(jiàn)圖1。圖1A和圖1C顯示兩種方法測(cè)量的結(jié)果相關(guān)性良好, 其中, Myo的R2=0.984;CK-MB的R2=0.986。殘差圖波動(dòng)范圍穩(wěn)定, 說(shuō)明殘差方差齊性, 線性擬合結(jié)果可靠, 見(jiàn)圖1B和圖1D。

圖1 M16磁敏免疫分析儀和Roche Cobas E602電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定Myo和CK-MB的相關(guān)性分析

注:A為Myo線性擬合曲線;B為Myo殘差圖;C為CK-MB線性擬合曲線;D為CK-MB殘差圖

3 討論

臨床POCT產(chǎn)品的檢測(cè)性能直接關(guān)系到患者的診斷、治療和預(yù)后, 因此POCT產(chǎn)品進(jìn)入臨床前必須對(duì)其檢測(cè)性能進(jìn)行評(píng)估[5]。筆者實(shí)驗(yàn)室自行設(shè)計(jì)試驗(yàn), 對(duì)第3代全定量POCT產(chǎn)品M16磁敏免疫分析儀的檢測(cè)性能進(jìn)行獨(dú)立評(píng)價(jià)。為驗(yàn)證儀器的檢測(cè)性能, 本研究以cTnI、Myo、CK-MB心肌梗死標(biāo)志物測(cè)試為例進(jìn)行評(píng)價(jià)。精密度試驗(yàn)顯示, cTnI、Myo、CK-MB的CV15%, 均在儀器廠商聲明的測(cè)試范圍內(nèi), 3種指標(biāo)的測(cè)量值和理論值密切相關(guān), 相關(guān)系數(shù)r正確度評(píng)估試驗(yàn)顯示質(zhì)控液指定值均在cT-nI、Myo、CK-MB檢測(cè)結(jié)果的95%置信區(qū)間內(nèi), 且相對(duì)偏倚15%, 結(jié)果均符合儀器廠商的聲明性能。同時(shí), M16磁敏免疫分析儀檢測(cè)性能指標(biāo)均優(yōu)于其他文獻(xiàn)報(bào)道第2代心肌損傷標(biāo)志物檢測(cè)POCT[6,7,8]。在心肌損傷蛋白標(biāo)志物臨床檢測(cè)中, 電化學(xué)發(fā)光法被認(rèn)為是檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)[9]。本研究對(duì)30份臨床患者外周血液標(biāo)本的Myo、CK-MB濃度分別進(jìn)行M16磁敏免疫分析儀和Roche Cobas E602電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀測(cè)定, 結(jié)果顯示兩者結(jié)果間具有良好的相關(guān)性, 且相關(guān)性能優(yōu)于文獻(xiàn)[6,7,8]報(bào)道的第2代POCT產(chǎn)品。

人血漿中cTnI、Myo、CK-MB蛋白水平測(cè)量在臨床上已廣泛用于心肌梗死輔助診斷[10,11]。相比中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) (如全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀) , POCT產(chǎn)品應(yīng)用直接縮短樣品周轉(zhuǎn)周期 (TAT) , 極大地提高心肌梗死的臨床診斷效率和急救成功率[12]。目前, 市場(chǎng)上cTnI、Myo、CK-MB檢測(cè)POCT產(chǎn)品主要基于側(cè)向流層析技術(shù), 結(jié)合熒光、膠體金標(biāo)記和讀數(shù)儀系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)對(duì)蛋白標(biāo)志物水平的定性或半定量檢測(cè)[13,14]。盡管基于側(cè)向流層析技術(shù)的POCT產(chǎn)品價(jià)格便宜、操作簡(jiǎn)單且應(yīng)用廣泛, 但存在重復(fù)性差 (CV為20%～40%) 、缺少精確定量的多項(xiàng)檢測(cè)能力和自動(dòng)化的文件編制[15]。M16磁敏免疫分析儀是一款基于巨磁電阻生物傳感器的臨床POCT分析裝置。其檢測(cè)原理采用雙抗體夾心免疫反應(yīng), 其檢測(cè)主要流程如下:首先將檢測(cè)一抗包被在傳感芯片上, 進(jìn)行檢測(cè)一抗-待測(cè)抗原-表位二抗的夾心反應(yīng)。表位二抗上連接有生物素標(biāo)記物, 能夠通過(guò)鏈霉親和素/生物素體系將修飾有鏈霉親和素的磁顆粒固定在傳感芯片上, 進(jìn)而通過(guò)GMP傳感器對(duì)芯片上的磁信號(hào)檢測(cè)實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中待測(cè)抗原水平的定量測(cè)定。此外, 為方便臨床進(jìn)行POCT和提高檢測(cè)精確度, 檢測(cè)試劑盒采用檢測(cè)卡樣式, 通過(guò)集成微通道、閥和泵完成對(duì)免疫夾心反應(yīng)的全自動(dòng)控制, 減少人為操作誤差, 克服側(cè)向流層析技術(shù)的批間差異大的缺陷, 最大程度上提高測(cè)試可重復(fù)性。兼具全定量巨磁電阻生物傳感器陣列和主動(dòng)式微流控芯片技術(shù)賦予了M16磁敏免疫分析儀第3代全定量POCT的典型特征。

綜上所述, 本文以cTnI、Myo、CK-MB心肌損傷蛋白標(biāo)志物測(cè)定為例, 對(duì)M16磁敏免疫分析儀的精密度、線性和正確度進(jìn)行評(píng)價(jià), 結(jié)果與廠商聲明的性能參數(shù)相符;通過(guò)對(duì)比試驗(yàn)證實(shí)了其測(cè)定結(jié)果與中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果間具有較好的一致性。此外, M16磁敏免疫分析儀總體設(shè)計(jì)新穎合理, 操作簡(jiǎn)便, 質(zhì)量控制方式完善, 測(cè)量速度快 (15min) , 溯源性好, 是一款值得臨床推廣使用的第3代全定量POCT產(chǎn)品。產(chǎn)品不足之處在于檢測(cè)成本相比第1代和第2代POCT產(chǎn)品的檢測(cè)成本高, 如何讓醫(yī)療機(jī)構(gòu)和患者接受存在一定程度的挑戰(zhàn)。同時(shí), 在產(chǎn)品精密度、加樣自動(dòng)化和數(shù)據(jù)云端化應(yīng)用等方面還存有一定提升空間。

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篇7

【關(guān)鍵詞】 胰島素（IRI）；光量子數(shù)；前胰島素原；胰島素原；化學(xué)發(fā)光免疫法

【Abstract】 Objective To explore a reliable method for the determination of insulin.Methods Gather fasting agglutinating blood， centrifugalize them respectively to get the serum，which were directly set on instrument to determine.Results Linear rang: 0～335.0mIU/L，senitivity: the mean quantum of 0mIU/L IRI，10.1mIU/L IRI， 152.0mIU/L IRI and 335.0 mIU/L IRI were 3808，30350，357399 and 684567.Specificity:when the control serum was determined，the measure vlalue was within the standard deviation （SD），95%-105%.Precision:N=60 CV≤5%.Conclusion Chemiluminescence is a reliable，stable measurement method for determination of insulin with high sensitivity，precision and specificity.

【Key words】 insulin;quantum;preproinsulin;proinsulin;chemiluminescence

胰島素（IRI）是一種蛋白質(zhì)激素，這是由胰島中的β細(xì)胞所合成、儲(chǔ)存和分泌的。IRI的功能是調(diào)節(jié)血液中葡萄糖的濃度水平。IRI初期是在β細(xì)胞中，以一種大分子量（分子量為1200）前胰島素原的形式存在。前胰島素原是一條由110氨基酸組成的單鏈前體。前胰島素原被切除掉24個(gè)氨基酸序列后形成胰島素原（分子量為9000），胰島素原是胰島素和C-肽的前體［1］。IRI是由兩條氨基酸鏈組成的。最初，IRI A鏈?zhǔn)怯?1個(gè)氨基酸組成，B鏈?zhǔn)怯?0個(gè)氨基酸組成；而C-肽是由31個(gè)氨基酸組成。IRI是隨餐后血液中葡萄糖的濃度高低而產(chǎn)生應(yīng)答的。

IRI水平雖然不是糖尿病患者常規(guī)診斷方法，但是IRI水平的檢測(cè)對(duì)于空腹低血糖患者、普通人群中的胰島素耐受患者、β細(xì)胞分泌功能異?；颊叩囊饬x非常大［2，3］。

1 材料與方法

1.1 原理

IRI的測(cè)定是一種直接化學(xué)發(fā)光技術(shù)和雙抗體兩點(diǎn)夾心免疫分析法相結(jié)合的測(cè)定方法。第一種抗體稱為標(biāo)識(shí)抗體，是由單克隆抗胰島素抗體標(biāo)記吖啶酯形成的；第二種抗體稱為固相化抗體，是由單克隆抗胰島素抗體以共價(jià)鍵的方式與順磁性顆粒相結(jié)合形成的。血清中的胰島素與相應(yīng)抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后產(chǎn)生光量子，其光量子數(shù)的多少與血清中胰島素的濃度成正比，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算即可求得血清IRI的濃度水平。

1.2 儀器與試劑 儀器：BAER ACS-180型全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀。試劑（雙試劑）及標(biāo)準(zhǔn)液由廣州寶迪有限公司提供。

1.3 方法 取血清于樣品杯中，置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上，調(diào)整好檢測(cè)參數(shù)：血清25μl+第一試劑50μl于37℃孵育5min，加第二試劑250μl于37℃孵育2.5min，用蒸餾水對(duì)反應(yīng)杯進(jìn)行分離、抽吸、清洗，最后分別加300μl酸試劑和堿試劑到反應(yīng)系統(tǒng)中進(jìn)行反應(yīng)發(fā)光，讀取光量子數(shù)，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出結(jié)果。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 采用兩點(diǎn)定標(biāo)法，將標(biāo)準(zhǔn)血清0.0mIU/L和138.0mIU/L安放于儀器的定標(biāo)位置上，編入測(cè)定程序，上機(jī)測(cè)定自動(dòng)打印出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果

2.1 精密度 取混合血清分成兩份，一份當(dāng)天測(cè)定60次，結(jié)果IRI的值為22±0.8mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為1.8%；另一份做批間試驗(yàn)，測(cè)定10次，測(cè)定統(tǒng)計(jì)值為21±1.2mIU/L，其對(duì)應(yīng)的CV值為2.8%。

2.2 靈敏度 0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為3808，10.1mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為30350，152.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為357399，335.0mIU/L的IRI，其平均光量子數(shù)為684567。IRI測(cè)定的范圍為0～335.0mIU/L。

2.3 回收試驗(yàn) 在IRI為25mIU/L的血清中分別加入濃度為1mg/L的胰島素原、濃度為500μg/L的C-肽、濃度為1mg/L的胃泌素、濃度為1mg/L的胰高血糖素、濃度為1mg/L的胰泌素進(jìn)行回收試驗(yàn)，分別測(cè)得其回收率為:100.8%，95.1%，96.6%，100.2%，101.6%。

2.4 線性分析 對(duì)一份定值血清稀釋不同濃度，觀察測(cè)定體系光量子數(shù)的變化量，即為IRI與光量子數(shù)的關(guān)系。結(jié)果顯示：IRI在本法的測(cè)定范圍是0～335.0mIU/L。當(dāng)IRI大于335.0mIU/L時(shí)，開始偏離線性。因此對(duì)濃度高的標(biāo)本必須先進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專缓鬁y(cè)定。

2.5 干擾試驗(yàn) 當(dāng)溶血（Hb>5g/L）、黃疸（膽紅素>0.2g/L）時(shí)，對(duì)結(jié)果干擾甚微。

2.6 正常參考值 取100份經(jīng)我院體檢合格者的血清，其中男50份，女50份，年齡19～55歲，平均37歲。檢測(cè)結(jié)果IRI：20.5±17.5mIU/L。男女之間差異無(wú)顯著性（P>0.05）。

3 討論

目前定量測(cè)定IRI的方法不多，過(guò)去一般用放射免疫法，該法測(cè)定步驟繁瑣，為半自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間長(zhǎng)達(dá)3天，測(cè)定范圍窄，且使用試劑具有放射性，對(duì)操作人員造成身體傷害及對(duì)周圍環(huán)境形成污染。現(xiàn)在基本已被化學(xué)發(fā)光免疫法所代替，該法測(cè)定步驟簡(jiǎn)單，為全自動(dòng)化操作，測(cè)定時(shí)間短，全過(guò)程最短為半小時(shí)即可完成，而它使用的試劑安全無(wú)放射性，為一般化學(xué)試劑，對(duì)操作人員無(wú)傷害，對(duì)周圍環(huán)境污染甚微。不過(guò)它也有缺點(diǎn)：其試劑為抗體試劑，有效期短，容易失效，定標(biāo)周期短，一般為2周。在試劑的有效期內(nèi)和定標(biāo)周期內(nèi)，對(duì)血清標(biāo)本進(jìn)行測(cè)定，其結(jié)果非常準(zhǔn)確可靠。綜上所述，化學(xué)發(fā)光免疫法測(cè)定胰島素（IRI）是目前首選的方法。

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篇8

    隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,臨床生化、臨床免疫等亞專業(yè)學(xué)科都取得了長(zhǎng)足進(jìn)步,分子生物學(xué)等學(xué)科更是引起實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的革命性突破[2]。醫(yī)學(xué)院校對(duì)新興學(xué)科的重視不言而喻,與之相對(duì)的是臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)學(xué)科的教育逐漸薄弱。筆者在帶教工作中發(fā)現(xiàn),部分實(shí)習(xí)生對(duì)聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)比較熟悉,對(duì)牛鮑式血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理卻比較模糊。雖然當(dāng)前全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀已經(jīng)普及,但仍無(wú)法完全取代人工計(jì)數(shù),一些基礎(chǔ)技術(shù)是儀器分析的重要補(bǔ)充,在檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中仍占有相當(dāng)重要的地位[3]。在實(shí)習(xí)期間,帶教老師應(yīng)加強(qiáng)對(duì)基礎(chǔ)技術(shù)的指導(dǎo),避免實(shí)習(xí)生走入重高端、輕基礎(chǔ),重儀器、輕人工的誤區(qū)。

    2儀器設(shè)備自動(dòng)化導(dǎo)致實(shí)習(xí)內(nèi)容減少

    當(dāng)前,實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化程度越來(lái)越高,全自動(dòng)生化儀、血細(xì)胞分析儀、化學(xué)發(fā)光儀等先進(jìn)的自動(dòng)化設(shè)備承擔(dān)了檢驗(yàn)科的大部分日常工作,從而使實(shí)習(xí)內(nèi)容減少、技術(shù)趨向簡(jiǎn)單化。例如全自動(dòng)生化儀與化學(xué)發(fā)光儀雖然實(shí)驗(yàn)原理不同,但操作的步驟方法大致相同,實(shí)習(xí)生在單調(diào)重復(fù)的操作中可能會(huì)產(chǎn)生檢驗(yàn)工作簡(jiǎn)單、容易的錯(cuò)誤想法。針對(duì)這種情況,帶教老師應(yīng)該改變教學(xué)重點(diǎn)、豐富教學(xué)內(nèi)容,在實(shí)習(xí)生能夠熟練操作儀器后,轉(zhuǎn)為指導(dǎo)學(xué)生進(jìn)行儀器的設(shè)置維護(hù)工作。當(dāng)前,室內(nèi)質(zhì)量控制已經(jīng)成為實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證體系的重要組成部分,帶教老師還應(yīng)該帶領(lǐng)學(xué)生熟悉質(zhì)量控制程序,掌握Levey-Jennings質(zhì)控圖、即刻法質(zhì)控圖及Westgard多規(guī)則質(zhì)量控制方法等,為以后的質(zhì)量控制工作打好基礎(chǔ)。帶教老師還可以指導(dǎo)學(xué)生嘗試編寫SOP文件,制作簡(jiǎn)單的教學(xué)PPT,使實(shí)習(xí)內(nèi)容多元化。

    3檢驗(yàn)與臨床疏離對(duì)實(shí)習(xí)生帶教的影響

    衛(wèi)生部人事司2001年正式設(shè)立檢驗(yàn)醫(yī)師崗位,可參與臨床診療工作[4]。至今十余年過(guò)去了,檢驗(yàn)醫(yī)師在大部分三級(jí)醫(yī)院并沒(méi)有發(fā)揮預(yù)期的作用,他們很少參與查房、會(huì)診等臨床醫(yī)療活動(dòng),檢驗(yàn)科與臨床科室在醫(yī)療、教學(xué)、科研等方面的合作情況也不容樂(lè)觀。2004年姜梅杰等[5]提出的醫(yī)學(xué)院校檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)專業(yè)設(shè)置進(jìn)一步規(guī)范化,重點(diǎn)培養(yǎng)檢驗(yàn)醫(yī)師系列人才的設(shè)想依然任重道遠(yuǎn)。在這種背景下,實(shí)習(xí)生對(duì)檢驗(yàn)工作的理解偏向簡(jiǎn)單與狹隘,例如,對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋僅限于是否處于正常范圍,沒(méi)有結(jié)合臨床綜合判斷的意識(shí)。在實(shí)習(xí)生管理工作中,帶教老師除了指導(dǎo)學(xué)生操作實(shí)踐,還應(yīng)該指導(dǎo)學(xué)生根據(jù)不同的臨床狀況對(duì)實(shí)驗(yàn)報(bào)告進(jìn)行解讀,讓實(shí)習(xí)生樹立檢驗(yàn)必須結(jié)合臨床的正確理念。

    4工作任務(wù)與帶教任務(wù)的沖突

    目前中國(guó)醫(yī)療資源不足、醫(yī)護(hù)人員工作繁忙,工作任務(wù)的繁重易使帶教老師對(duì)實(shí)習(xí)生的管理產(chǎn)生不放手或過(guò)度放手的傾向。例如,免疫熒光技術(shù)等手工項(xiàng)目,操作繁瑣,易出現(xiàn)人為誤差,帶教老師需付出極大的精力指導(dǎo)和監(jiān)督才能使學(xué)生順利完成實(shí)驗(yàn),為了保證報(bào)告的按時(shí)發(fā)出,部分帶教老師會(huì)減少教學(xué)內(nèi)容,只讓學(xué)生了解、觀看實(shí)驗(yàn)而不放手學(xué)生進(jìn)行實(shí)踐;對(duì)于一些操作判定比較簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)技術(shù),如膠體金免疫技術(shù),有些帶教老師又會(huì)忽略監(jiān)督指導(dǎo),放手實(shí)習(xí)生獨(dú)立完成而不加審核,這些都是錯(cuò)誤的。不放手會(huì)使實(shí)習(xí)生喪失學(xué)習(xí)興趣,學(xué)無(wú)所得;過(guò)度放手則可能讓帶教老師失去糾正錯(cuò)誤的機(jī)會(huì),造成嚴(yán)重的后果。

    5忽視對(duì)實(shí)習(xí)生思想與情商的培養(yǎng)

    受社會(huì)上拜金主義錯(cuò)誤思想的影響,部分學(xué)生實(shí)習(xí)態(tài)度不端正,認(rèn)為實(shí)習(xí)不過(guò)是免費(fèi)為醫(yī)院打工,在工作中不積極、不主動(dòng),缺乏學(xué)習(xí)熱情。對(duì)于這種觀念帶教老師不能一笑置之,應(yīng)該及時(shí)批評(píng)教育。實(shí)習(xí)是學(xué)生進(jìn)入社會(huì)前的試練,正確的態(tài)度才能有正確的結(jié)果,認(rèn)真學(xué)習(xí)帶教老師教授的知識(shí)和經(jīng)驗(yàn),對(duì)自己、對(duì)社會(huì)都將有極大的幫助。除了操作技能的培訓(xùn),情商的培養(yǎng)也應(yīng)納入帶教老師的教學(xué)范疇。在教學(xué)工作中,帶教老師應(yīng)注重學(xué)生溝通能力、協(xié)作能力的培養(yǎng),指導(dǎo)學(xué)生如何與患者正確溝通交流,帶領(lǐng)學(xué)生處理簡(jiǎn)單的醫(yī)療糾紛。

篇9

關(guān)鍵詞：免疫學(xué)檢驗(yàn)；教學(xué)改革；項(xiàng)目教學(xué)法

《免疫學(xué)檢驗(yàn)》是三年制醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)專業(yè)主干課程之一，是研究免疫學(xué)技術(shù)及其在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的一門學(xué)科。免疫學(xué)發(fā)展非常迅速，在檢驗(yàn)上的應(yīng)用更是日新月異，其相關(guān)理論和技術(shù)已滲透到《寄生蟲學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》、《微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)》、《臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)》、《臨床血液學(xué)檢驗(yàn)》和《生物化學(xué)檢驗(yàn)》中。著名的教育學(xué)家陶行知先生說(shuō)過(guò)，"教、學(xué)、做"不是三件事，而是一件事，在做中學(xué)才是真正的學(xué)，在做中教才是真正的教。實(shí)驗(yàn)教學(xué)是免疫學(xué)檢驗(yàn)教學(xué)的重要環(huán)節(jié)，是理論聯(lián)系實(shí)際，培養(yǎng)學(xué)生實(shí)際操作技能、分析問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力的重要途徑。但是之前實(shí)驗(yàn)教學(xué)依然以傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)為主，學(xué)生實(shí)習(xí)后抱怨實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容與實(shí)際工作聯(lián)系不大。為了改變這種現(xiàn)象，筆者以項(xiàng)目為載體進(jìn)行《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革。

1實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的

免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的是通過(guò)實(shí)驗(yàn)教學(xué)環(huán)節(jié)，促進(jìn)學(xué)生對(duì)課堂理論知識(shí)的理解，在"動(dòng)手"操作專業(yè)基本技能之中培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度、分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力與創(chuàng)新思維。具備對(duì)免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的正確選擇與應(yīng)用評(píng)價(jià)的基本素質(zhì)，了解免疫學(xué)檢驗(yàn)學(xué)科的發(fā)展方向，為將來(lái)臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

傳統(tǒng)的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)模式，學(xué)生只是按照老師的思路進(jìn)行機(jī)械性操作，學(xué)生的學(xué)習(xí)是被動(dòng)的，沒(méi)有解決問(wèn)題的主動(dòng)性，違背了實(shí)驗(yàn)教學(xué)的目的。基于項(xiàng)目教學(xué)法的實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革就是將實(shí)驗(yàn)分為與臨床疾病相關(guān)的不同項(xiàng)目，學(xué)生完成項(xiàng)目檢測(cè)的同時(shí)掌握相關(guān)免疫學(xué)基礎(chǔ)知識(shí)和免疫學(xué)技術(shù)原理、方法學(xué)評(píng)價(jià)以及該項(xiàng)目與臨床疾病的關(guān)系。充分調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)積極性，綜合應(yīng)用各種實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理及方法，最大限度挖掘?qū)W習(xí)潛力。

2實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容安排

免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)發(fā)展迅速，新型免疫學(xué)技術(shù)不斷出現(xiàn)，是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)發(fā)展最活躍的一項(xiàng)技術(shù)和研究?jī)?nèi)容。臨床免疫學(xué)的應(yīng)用已涉及多種疾病的發(fā)病機(jī)制研究、疾病的診斷、治療選擇與治療效果的評(píng)估?，F(xiàn)在，應(yīng)關(guān)注臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)新技術(shù)、新方法與臨床的結(jié)合與應(yīng)用，不斷提高本專業(yè)人員的知識(shí)結(jié)構(gòu)與應(yīng)用能力，以便為臨床醫(yī)療和患者健康提供更好的服務(wù)[1]。但目前《免疫學(xué)檢驗(yàn)》的教學(xué)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容多數(shù)還停留在經(jīng)典免疫學(xué)技術(shù)，內(nèi)容陳舊，因此必須對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容進(jìn)行重新調(diào)整，淘汰臨床已經(jīng)不開展的項(xiàng)目，增添新內(nèi)容，開展臨床新項(xiàng)目。比如我們新增了免疫熒光抗體染色技術(shù)，淘汰了溶血空斑實(shí)驗(yàn)。檢驗(yàn)系學(xué)生進(jìn)入臨床工作任務(wù)主要是對(duì)各種臨床項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)，首先要求學(xué)生必須掌握好基本理論和基本操作，還要培養(yǎng)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目檢測(cè)的意識(shí)。因此基于項(xiàng)目教學(xué)法實(shí)驗(yàn)改革將教學(xué)內(nèi)容分為三個(gè)模塊：①基本技能模塊：內(nèi)容包括凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫電泳技術(shù)、ELISA、斑點(diǎn)金免疫層析技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、免疫細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)等各種免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)。②臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目模塊：內(nèi)容包括：免疫細(xì)胞檢測(cè)，感染性疾病的檢測(cè)如梅毒、乙肝、傷寒等，自身免疫病的檢測(cè)如SLE，腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，特種蛋白的檢測(cè)等[2]。③臨床見(jiàn)習(xí)內(nèi)容：大型自動(dòng)化儀器構(gòu)型、操作，實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有開展的臨床項(xiàng)目以及質(zhì)量控制的具體實(shí)施。

3項(xiàng)目教學(xué)法的實(shí)施

3.1優(yōu)化實(shí)驗(yàn)室配置 增添新內(nèi)容，開展臨床新項(xiàng)目必須加強(qiáng)軟件、硬件建設(shè)，購(gòu)置先進(jìn)儀器設(shè)備，同時(shí)避免重復(fù)建設(shè)，最大發(fā)揮儀器利用率，實(shí)現(xiàn)資源共享，為實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的開展創(chuàng)造充分的實(shí)驗(yàn)環(huán)境[3]。實(shí)驗(yàn)室的儀器設(shè)備大多是適合手工操作技術(shù)類實(shí)驗(yàn)，自動(dòng)化程度不高，適合培養(yǎng)學(xué)生掌握免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的基本操作技能，如酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡等。大型自動(dòng)化儀器適合于臨床批量檢測(cè)標(biāo)本，如化學(xué)發(fā)光自動(dòng)免疫分析、自動(dòng)化免疫比濁分析、流式細(xì)胞儀等，僅用于教學(xué)使用頻率低，造成資源浪費(fèi)，相關(guān)技術(shù)的教學(xué)可應(yīng)用多媒體課件及臨床見(jiàn)習(xí)。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中，多媒體教學(xué)可以讓學(xué)生直觀的觀察到先進(jìn)儀器的原理、構(gòu)造、操作等。運(yùn)用多媒體可以各種素材將實(shí)驗(yàn)原理、過(guò)程及結(jié)果觀察等生動(dòng)的展示給學(xué)生，加強(qiáng)學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)原理及過(guò)程的理解及掌握，節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間。因此必須完善多媒體教學(xué)資源庫(kù)。

3.2基本技能模塊項(xiàng)目實(shí)施方法 正確的實(shí)驗(yàn)技能操作是實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的保證，培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)，是以后工作的保障。在實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，要注重學(xué)生操作技能的培養(yǎng)，包括基本實(shí)驗(yàn)操作手法，基本儀器操作，維護(hù)以及生物安全意識(shí)等。項(xiàng)目包括凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、免疫電泳技術(shù)、ELISA、斑點(diǎn)金免疫層析技術(shù)、熒光免疫技術(shù)、免疫細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)。教學(xué)過(guò)程：老師提出項(xiàng)目，學(xué)生進(jìn)行實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目準(zhǔn)備包括實(shí)驗(yàn)器材準(zhǔn)備、試劑的配制，儀器的校準(zhǔn)等，這就要求學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容提前預(yù)習(xí)。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中保證人人動(dòng)手，老師隨時(shí)糾正錯(cuò)誤和解答問(wèn)題，實(shí)驗(yàn)結(jié)束前老師與學(xué)生一起進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析及實(shí)驗(yàn)方法評(píng)價(jià)。

3.3臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目模塊實(shí)施方法 依據(jù)臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)的工作任務(wù)設(shè)計(jì)了5個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)K：免疫細(xì)胞檢測(cè)，感染性疾病的檢測(cè)，自身免疫病的檢測(cè)，腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，特種蛋白的檢測(cè)。每個(gè)模塊又選取典型，臨床常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目7個(gè)教學(xué)項(xiàng)目，包括單個(gè)核細(xì)胞分析及檢測(cè)、IgG的檢測(cè)、梅毒血清學(xué)診斷、傷寒血清學(xué)診斷、乙肝血清標(biāo)志物檢測(cè)、自身抗體檢測(cè)等。教學(xué)實(shí)施過(guò)程：教師展示病例，提出問(wèn)題，發(fā)放臨床標(biāo)本；學(xué)生4人一組進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果。病例的選取要符合實(shí)踐性、針對(duì)性，更重要的是具有啟發(fā)性[4]。如：病例：患者李某某，女，18歲，主述"不規(guī)則發(fā)熱伴大小關(guān)節(jié)疼痛月余，伴面部蝶形紅斑1個(gè)月"。患者1個(gè)月前無(wú)明顯誘因出現(xiàn)乏力，發(fā)熱，體溫37～38℃，日光照射后出現(xiàn)皮疹。患病以來(lái)，精神飲食差，體重下降5kg。體溫37.8℃，脈搏100次/min，呼吸頻率20次/min，血壓120/90mmHg，口腔潰瘍。血清IgG 24.5g/L，IgA 3380mg/L，IgM 2960mg/L，C3補(bǔ)體 0.53g/L，C4補(bǔ)體0.08g/L，RF

3.4臨床見(jiàn)習(xí)模塊 實(shí)驗(yàn)室開展的實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容不可能包含所有臨床項(xiàng)目，為了盡量避免實(shí)驗(yàn)教學(xué)滯后于臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)發(fā)展的實(shí)際情況，在學(xué)習(xí)與臨床實(shí)驗(yàn)相關(guān)內(nèi)容時(shí)，組織學(xué)生去檢驗(yàn)科參觀學(xué)習(xí)和見(jiàn)習(xí)，以了解臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)的動(dòng)態(tài)及最新檢測(cè)方法和發(fā)展趨勢(shì)，既避免了實(shí)驗(yàn)教學(xué)和臨床脫節(jié)，又讓學(xué)生熟悉、了解臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)常用儀器的操作規(guī)程和實(shí)驗(yàn)步驟，同時(shí)在見(jiàn)習(xí)的過(guò)程當(dāng)中，還將臨床實(shí)驗(yàn)室控制內(nèi)容介紹給學(xué)生，為今后從事免疫學(xué)檢驗(yàn)方面的實(shí)習(xí)和工作奠定良好的基礎(chǔ)。

4教學(xué)效果

項(xiàng)目教學(xué)法在整個(gè)實(shí)施過(guò)程中達(dá)到了較好的教學(xué)效果，對(duì)學(xué)生多方面的能力進(jìn)行了培養(yǎng)。學(xué)生由傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中的被動(dòng)接受信息、機(jī)械性操作、不求甚解，到主動(dòng)查閱資料、思考問(wèn)題、討論問(wèn)題、解決問(wèn)題，自學(xué)能力、獨(dú)立思考問(wèn)題的能力得到了很大的提高。另外，學(xué)生四人一組來(lái)進(jìn)行一個(gè)項(xiàng)目的檢測(cè)，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，學(xué)生們必須分工合作，才能順利的在有限時(shí)間內(nèi)完成本次實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)了合作意識(shí)、團(tuán)隊(duì)精神。學(xué)生得到項(xiàng)目以后需要設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線，摸索實(shí)驗(yàn)條件，并且利用有限資源，合理安排實(shí)驗(yàn)，還需要嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度最終才能取得好的結(jié)果，培養(yǎng)了學(xué)生科學(xué)思維和實(shí)踐的能力。這些能力為學(xué)生走向臨床打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

項(xiàng)目教學(xué)法的實(shí)施促進(jìn)教師素質(zhì)提高。項(xiàng)目實(shí)施過(guò)程中，學(xué)生會(huì)查閱大量資料，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)路線，在試驗(yàn)過(guò)程中若發(fā)現(xiàn)問(wèn)題肯定會(huì)向老師請(qǐng)教，教師必須具備扎實(shí)的理論基礎(chǔ)，豐富的實(shí)驗(yàn)技能，有更高的水平的判斷力，對(duì)于實(shí)驗(yàn)中的問(wèn)題的均能給予解釋指導(dǎo)。另外，目前沒(méi)有適合的教材進(jìn)行項(xiàng)目教學(xué)，因此教師必須自己選擇合適的項(xiàng)目?jī)?nèi)容進(jìn)行實(shí)施，這要求教師選取具有臨床價(jià)值，難易程度適中，能激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣，并且能有效的將專業(yè)理論與實(shí)踐結(jié)合起來(lái)的內(nèi)容，這就要求教師必須有較高的綜合素質(zhì)。

總之，《免疫學(xué)檢驗(yàn)》實(shí)驗(yàn)實(shí)施項(xiàng)目教學(xué)法對(duì)于培養(yǎng)學(xué)生扎實(shí)的操作技能、創(chuàng)新能力、綜合能力及團(tuán)隊(duì)精神具有很大的作用。學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣得到很大提高。學(xué)生通過(guò)完成對(duì)項(xiàng)目的檢測(cè)過(guò)程，鍛煉多方面能力，如文獻(xiàn)檢索、查閱資料的能力，思考問(wèn)題、解決問(wèn)題的能力，主動(dòng)學(xué)習(xí)，終身學(xué)習(xí)的能力等。項(xiàng)目教學(xué)法選取教學(xué)內(nèi)容均是臨床常見(jiàn)檢測(cè)項(xiàng)目，接近臨床實(shí)際工作，為學(xué)生順利走上工作崗位做好了鋪墊，為臨床醫(yī)療和患者健康提供更好的服務(wù)。

參考文獻(xiàn)：

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[2]代林遠(yuǎn)，王利平.以檢驗(yàn)項(xiàng)目為載體實(shí)施免疫學(xué)檢驗(yàn)課程改革[J].衛(wèi)生職業(yè)教育，2011，29（12）：153-154.

篇10

關(guān)鍵詞：醫(yī)學(xué)監(jiān)測(cè)儀器，自動(dòng)化與集成化，模塊化，智能化，便攜化，環(huán)?；?，國(guó)產(chǎn)化

中圖分類號(hào)：R826.2+2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1005-0515（2013）4-138-02

引言：

隨著社會(huì)與科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)也有了質(zhì)的飛躍，由以往的純手工轉(zhuǎn)變?yōu)閮x器檢測(cè)。在電腦、微電子以及新型材料不斷更新引進(jìn)的情況下，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)儀器也在與時(shí)俱進(jìn)而且品種日漸增多，但多少都存在著一定的不足與局限性。隨著計(jì)算機(jī)、生物化學(xué)、電子技術(shù)、分子生物學(xué)、物理學(xué)以及儀器材料學(xué)等領(lǐng)域高科技、新技術(shù)的出現(xiàn)，醫(yī)學(xué)檢測(cè)儀器將向自動(dòng)化與集成化、模塊化、智能化、便攜化、環(huán)保化和國(guó)產(chǎn)化等方向發(fā)展。

檢測(cè)儀器自動(dòng)化與集成化

現(xiàn)如今國(guó)內(nèi)多數(shù)醫(yī)院的檢驗(yàn)科還在使用單機(jī)自動(dòng)化的各類分析儀器，而國(guó)外的檢測(cè)儀器均開始向集中化發(fā)展，也就是將相關(guān)的幾臺(tái)自動(dòng)化儀器進(jìn)行串聯(lián)，形成全實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化，特點(diǎn)是采用流水作業(yè)模式、規(guī)模大且整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程都屬于自動(dòng)化。它的組成部分主要有：前處理系統(tǒng)、運(yùn)送系統(tǒng)、分析系統(tǒng)、后處理系統(tǒng)和保存系統(tǒng)等。（見(jiàn)圖1）

相關(guān)人員采集樣本后，只需將其放到傳送帶上或由機(jī)器人代為傳送至檢驗(yàn)科便可，接下來(lái)的工作將由分析儀器按照之前設(shè)計(jì)好的程序自動(dòng)完成。它會(huì)將樣本通過(guò)條形碼進(jìn)行分類，然后再自動(dòng)分送到各檢測(cè)儀進(jìn)行分析，檢測(cè)結(jié)果出來(lái)后會(huì)經(jīng)儀器的接口送到本科的電腦進(jìn)行儲(chǔ)存并進(jìn)入全院的計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)進(jìn)而提供給臨床的科室。上世紀(jì)八十年代的日本就已經(jīng)出現(xiàn)全自動(dòng)化臨床試驗(yàn)技術(shù)，采用樣本傳送系統(tǒng)和自動(dòng)化控制技術(shù)，檢驗(yàn)人員將樣本放入傳送帶后就不再接觸樣本，儀器的系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)取樣、報(bào)告，使相關(guān)人員感染疾病的幾率大大降低，也在很大程度上節(jié)省了勞動(dòng)力、提高了工作效率。

隨著現(xiàn)代檢驗(yàn)學(xué)以及計(jì)算機(jī)技術(shù)的不斷發(fā)展，科研及臨床部門進(jìn)一步提高了對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室的要求，自動(dòng)化儀器也逐漸替代了人工檢驗(yàn)，從而大大提高了檢驗(yàn)項(xiàng)目的數(shù)量以及檢驗(yàn)速度。若檢驗(yàn)結(jié)果的計(jì)算、記錄與報(bào)告仍然采用人工方法來(lái)進(jìn)行，將很難適應(yīng)以及跟緊實(shí)驗(yàn)室的正常運(yùn)作，我們需要運(yùn)用計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)來(lái)解決這一問(wèn)題。但裝備全自動(dòng)檢驗(yàn)系統(tǒng)需要的費(fèi)用很高，因此在一些中小型醫(yī)院和經(jīng)濟(jì)欠發(fā)達(dá)地區(qū)基層醫(yī)院的發(fā)展被限制。

1、檢測(cè)儀器模塊化

根據(jù)醫(yī)院的資金以及用量有限等需求可將各任務(wù)模塊進(jìn)行組合式安裝使用，這些模塊既可以獨(dú)立工作也可以組合起來(lái)構(gòu)成全自動(dòng)系統(tǒng)。緊密結(jié)合的設(shè)計(jì)使其成為一個(gè)功能多、質(zhì)量高的檢驗(yàn)系統(tǒng)，基本達(dá)成了一臺(tái)儀器就可完成常規(guī)、特種蛋白、藥物治療、特殊生化、免疫、濫用藥物等多種項(xiàng)目的檢測(cè)，另外還可以通過(guò)增添各種部件達(dá)到擴(kuò)展其功能的目的。這種模塊化的儀器具有檢測(cè)項(xiàng)目多、節(jié)省資金、體積小、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，比較適合大中型的醫(yī)院使用。例如AdivaLabcell――是由Bayer診斷儀器公司所生產(chǎn)，既有可以獨(dú)立工作的系統(tǒng)單元也有全自動(dòng)系統(tǒng)，使用的工作人員在某一終端便可操作整臺(tái)儀器系統(tǒng)。HI-TACHI日立7600是一臺(tái)大型組合式的全自動(dòng)生化分析儀。它是在原有的日立生化分析儀的基礎(chǔ)上進(jìn)行開發(fā)的，采用了模塊化結(jié)構(gòu)和先進(jìn)的控制技術(shù)，而且擁有非常高的擴(kuò)展性和靈活性。用戶可以根據(jù)自己的需要來(lái)進(jìn)行自由組合，在此基礎(chǔ)上再配備上樣品投入部、輸入部、緩沖部和收納部等，由windowsNT enthernet網(wǎng)控制，可以隨意隨時(shí)地增減單元部。由中央計(jì)算機(jī)來(lái)智能多線程控制整個(gè)工作流程，通過(guò)合理分配實(shí)現(xiàn)高效與高速的測(cè)定。通過(guò)設(shè)定還可使儀器進(jìn)行無(wú)人狀態(tài)下的一體化程序控制和自動(dòng)關(guān)機(jī)、保養(yǎng)及清洗。7600型為多模塊化設(shè)計(jì)，當(dāng)其中的一塊模塊發(fā)生故障時(shí)，其余模塊不會(huì)受其影響仍可繼續(xù)運(yùn)行，在一天24小時(shí)當(dāng)中的任意時(shí)間可對(duì)模塊進(jìn)行交替保養(yǎng)與維護(hù)，不會(huì)影響到日常的工作。模塊式接入系統(tǒng)要比全自動(dòng)化的實(shí)驗(yàn)室投資小、經(jīng)濟(jì)適用，而且使用起來(lái)也更加方便靈活。

2、檢測(cè)儀器智能化與簡(jiǎn)約化

由儀器取代人工一次完成標(biāo)本的送入、輸入條碼、檢測(cè)完成到數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)、輸出以及連接網(wǎng)絡(luò)等工作，縮短了出報(bào)告的時(shí)間，便于查詢存儲(chǔ)的結(jié)果，提高了完成各項(xiàng)任務(wù)的準(zhǔn)確度與速度。而且儀器能夠定期地進(jìn)行自動(dòng)校檢，排除了非標(biāo)準(zhǔn)以及人為因素的干擾，從而減少誤差的情況出現(xiàn)。在設(shè)計(jì)上也逐漸（通常發(fā)生在有特殊體質(zhì)的人身上），其中表現(xiàn)最嚴(yán)重的是過(guò)敏性休克；出現(xiàn)毒副作用（表現(xiàn)為患者的神經(jīng)系統(tǒng)、血液循環(huán)系統(tǒng)、腎臟出現(xiàn)異常，最常見(jiàn)的是腎臟異常）。造成抗生素濫用的主要原因有患者本身的原因；政府機(jī)構(gòu)部門對(duì)抗生素管理及制度的不健全的原因；醫(yī)生臨床用藥的原因。針對(duì)我國(guó)濫用抗生素的現(xiàn)狀的原因，提出合理的措施以便日后科學(xué)使用抗生素藥物。濫用抗生素帶給人類較大的危害，科學(xué)使用抗生素是一項(xiàng)巨大的系統(tǒng)工程，需要政府機(jī)構(gòu)、醫(yī)療衛(wèi)生部門、廣大醫(yī)務(wù)工作者以及患者的重視[3]，再有就是政府做好宣傳；醫(yī)院直接做好監(jiān)控；改革醫(yī)療體制；做好樣本實(shí)驗(yàn)，為臨床藥師提供準(zhǔn)確數(shù)據(jù)，進(jìn)而充分發(fā)揮臨床藥師的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]呂勇.濫用抗生素產(chǎn)生的危害及濫用的原因[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，（09）：108―109.