導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇土壤滅菌方法，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

關(guān)鍵詞 腐霉利；微生物；降解

中圖分類號(hào) X503 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-5739（2012）22-0209-02

腐霉利（procymidone）又名速克靈、殺霉利、二甲菌核利，屬于低毒性殺菌劑，主要是抑制菌體內(nèi)甘油三酯的合成，具有保護(hù)和治療的雙重作用。適用于果樹(shù)、蔬菜、花卉等菌核病、灰霉病、黑星病、褐腐病、大斑病的防治[1-2]。它作為高效殺菌劑被廣泛使用的同時(shí)，殘留問(wèn)題也日益突出。為了評(píng)估其對(duì)土壤環(huán)境的危害，了解其在土壤中的降解速率以及與土壤微生物間的相互關(guān)系，選擇廈門市具有代表性的土壤作為供試土壤，在實(shí)驗(yàn)室控制其他因素的條件下，開(kāi)展腐霉利在滅菌及不滅菌土壤中的降解研究。

進(jìn)入土壤中的農(nóng)藥主要來(lái)自直接施用或葉面噴施，為了評(píng)估其對(duì)環(huán)境的危害，了解其在土壤中的降解規(guī)律是非常重要的。農(nóng)藥在土壤中同時(shí)存在生物和非生物2種類型的降解和轉(zhuǎn)化[3]。影響其降解速率的因素有土壤特性、溫度、濕度及農(nóng)藥特性等[4]。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)儀器。Agilent-7890N型氣相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）、恒溫振蕩器（國(guó)華企業(yè)）旋渦混合器（上海琪特分析儀器有限公司）、氮吹儀（廣州智真生物科技有限公司）、美國(guó)centurion K220型多功能高速離心機(jī)等常用實(shí)驗(yàn)儀器。

1.1.2 試驗(yàn)試劑。弗羅里矽柱（1 000 mg/6 mL，安捷倫公司）、腐霉利標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所）。乙腈、甲醇、丙酮、正己烷為色譜純，其余試劑均為分析純。

1.1.3 供試土壤樣品的采集、處理和性質(zhì)。采集廈門市具有代表性的無(wú)腐霉利殘留的土壤。將耕層（0～20 cm）土壤樣品研碎，風(fēng)干過(guò)2 mm篩后備用。

1.2 腐霉利在土壤中的降解試驗(yàn)

1.2.1 土壤的活化培養(yǎng)。試驗(yàn)前將土樣分別置于搪瓷盆中，含水量添加到土壤飽和持水量的60%，用薄膜覆蓋盆口，放在25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行微生物活化培養(yǎng)1周。

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)。設(shè)4個(gè)處理，分別為添加腐霉利滅菌土、空白滅菌土、添加腐霉利未滅菌土、空白未滅菌土。每個(gè)處理3次重復(fù)，處理土樣置于25 ℃培養(yǎng)箱中恒溫培養(yǎng)。土壤中腐霉利的添加濃度為4 mg/kg。添加農(nóng)藥后1、3、5、8、14、21、28、42、56 d采樣測(cè)定腐霉利殘留量及土壤含水量。

1.3 腐霉利殘留分析方法

1.3.1 樣品處理[5-6]。稱取勻漿試樣5.0 g，加入乙腈25.0 mL，旋渦混勻后，在恒溫振蕩器上振蕩提取30 min。高速離心（8 000 r/min）5 min后，取乙腈5.0 mL提取液于離心管，緩緩?fù)ㄈ氲獨(dú)?，將乙腈吹近干，加入正己?.0 mL溶解殘留，待凈化。

將弗羅里矽柱用丙酮5.0 mL+正己烷（10+90）、正己烷5.0 mL預(yù)淋洗，條件化，當(dāng)溶劑液面到達(dá)柱吸附表面時(shí)，立即加入上述待凈化液，用15.0 mL離心管收集洗脫液，再用丙酮5.0 mL+正己烷（10+90）沖洗燒杯后淋洗弗羅里矽柱，重復(fù)1次。把收集液的離心管置于氮吹儀，水浴溫度50 ℃，氮吹蒸發(fā)至近干，用正己烷定容到合適的濃度，在混合器中混勻后，待測(cè)。

1.3.2 色譜條件。色譜柱：100%聚甲基硅氧柱（DB-1MS）30 m×250 μm×0.25 μm；柱溫：80 ℃（保持1 min） 230 ℃（保持1 min） 270 ℃（保持10 min）；進(jìn)樣口及溫度：毛細(xì)管進(jìn)樣口，240 ℃；檢測(cè)器及溫度：u-ECD，320 ℃；分流模式：不分流；進(jìn)樣量1 μL；載氣：高純氮?dú)?.2 mL/min，恒流；尾吹：高純氮?dú)?0.0 mL/min。

1.4 方法的準(zhǔn)確度、精密度與最低檢測(cè)濃度

取空白土樣5.0 g，分別添加質(zhì)量濃度為0.10、0.50、1.00 mg/kg腐霉利，按照上述方法對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行處理和測(cè)定，每個(gè)處理有3個(gè)平行，計(jì)算加標(biāo)回收率，結(jié)果見(jiàn)表1?？煽闯?，土樣中腐霉利加標(biāo)回收率為78.3％～91.1％，RSD值為2.2％～3.9％。該方法土壤中腐霉利的測(cè)定下限為0.01 mg/kg。表明該分析方法符合農(nóng)藥殘留試驗(yàn)的要求。

2 結(jié)果與分析

（1）空白滅菌與未滅菌土壤都未檢出氯氰菊酯殘留。

（2）在試驗(yàn)過(guò)程中，添加腐霉利后經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng)，按不同的時(shí)間間隔取樣分析。結(jié)果表明，無(wú)論滅菌與否，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，添加到土壤中的腐霉利含量均逐漸降低，兩者之間具有一定的相關(guān)性，這和胡瑞蘭等的研究結(jié)果是一致的[7]（表2、圖1、）。施藥56 d后，腐霉利在滅菌土和未滅菌土中的降解率均達(dá)到90％以上，表明腐霉利在土壤中的消解速度較快，屬易消解農(nóng)藥。

（3）添加試驗(yàn)中，土壤中腐霉利的殘留量與腐霉利施用后的取樣時(shí)間之間呈較明顯的負(fù)指數(shù)函數(shù)關(guān)系，可以用一級(jí)化學(xué)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程式來(lái)擬合試驗(yàn)數(shù)據(jù)[5，7-8]（圖1）。按照動(dòng)力學(xué)一級(jí)方程式計(jì)算半衰期（T1/2）。Y（滅菌土）=3.516 3exp（-0.049 1）x（R2=0.987 4），T1/2=14.1 d。Y（未滅菌土）=2.682 8exp（-0.073 7）x（R2=0.970 3），T1/2=9.4 d。滅菌土壤中腐霉利降解速率要小于未滅菌土壤（表2），未滅菌土中腐霉利的降解半衰期低于滅菌土的半衰期（圖1、2）。土壤滅菌處理，主要?dú)缌送寥乐械奈⑸?，也就是說(shuō)，腐霉利在有微生物存在的土壤中降解較快，說(shuō)明腐霉利在土壤中的降解過(guò)程，微生物參與的生物降解起了很大作用。

3 結(jié)論與討論

(1）建立了一套用于測(cè)定腐霉利在土壤中的殘留量的氣相色譜分析方法，乙腈溶劑超聲提取，固相萃取凈化，操作簡(jiǎn)便快捷，且節(jié)省溶劑和時(shí)間，添加回收率、精密度及最低檢測(cè)濃度試驗(yàn)結(jié)果均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。

（2）腐霉利在土壤中的降解動(dòng)態(tài)規(guī)律符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。無(wú)論滅菌與否，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，添加到土壤中的腐霉利含量均逐漸降低，兩者之間具有一定的相關(guān)性。微生物參與的生物降解有利于腐霉利在土壤中的降解。

4 參考文獻(xiàn)

[1] 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.農(nóng)藥殘留量實(shí)用檢測(cè)方法手冊(cè)：第3卷[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2005.

[2] 沃解明.新型農(nóng)用殺菌劑—腐霉利[J].上?；?，2000，22（2）：5-7.

[3] 喬雄梧.農(nóng)藥在土壤中的環(huán)境行為[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，1999（S1）：12-16.

[4] 薛琦.土壤微生物和農(nóng)藥[J].農(nóng)藥譯叢，1994，16（4）：51-54.

[5] 樊曉青，陸貽通，汪傳炳.腐霉利在生萊和土壤中的殘留動(dòng)態(tài)研究[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，25（6）：570-573.

[6] 農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（天津），農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所.NY/T 761-2008蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007.

篇2

【關(guān)鍵詞】復(fù)合微生物肥料；虹源；苦瓜栽培；施肥效應(yīng)

當(dāng)前的蔬菜種植多采用化肥施肥為主的速效功利性種植，為求早上市，見(jiàn)產(chǎn)量，品質(zhì)要求難以兼容，對(duì)土壤的掠奪性種植導(dǎo)致地力失調(diào)，造成土壤酸化、板結(jié)，病蟲(chóng)害發(fā)生泛濫，當(dāng)前通過(guò)增加土壤有機(jī)質(zhì)，利用特定功能微生物促進(jìn)土壤有機(jī)質(zhì)和養(yǎng)分的釋放與分解，使得益生菌群落占據(jù)優(yōu)勢(shì)地位，達(dá)到改善土壤理性，調(diào)節(jié)土壤酸堿度，降低土壤病害發(fā)生的危害是農(nóng)業(yè)技術(shù)人員重點(diǎn)研究和推廣的土壤改良及施肥方法，研究和推廣優(yōu)質(zhì)復(fù)合微生物肥料是其中方式之一。復(fù)合微生物肥料是運(yùn)用特定微生物與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)復(fù)合而成，能提供、保持或改善植物營(yíng)養(yǎng)，是一種提高農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量或改善農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)的活體微生物制品（國(guó)家農(nóng)業(yè)部門關(guān)于復(fù)合微生物肥料標(biāo)準(zhǔn)的釋義），博羅縣農(nóng)技部門通過(guò)運(yùn)用復(fù)合微生物肥料開(kāi)展蔬菜生產(chǎn)試驗(yàn)，獲得復(fù)合微生物肥料的田間使用數(shù)據(jù)，為大面積引進(jìn)和推廣復(fù)合微生物肥料提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試肥料：山東省魯西化工集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)的“魯西”牌尿素（46%）；深圳市芭田生態(tài)工程股份有限公司生產(chǎn)的“芭田”牌復(fù)合肥（氮∶磷∶鉀=15∶15∶15）；中山市祥源環(huán)保有限公司生產(chǎn)的“虹源”牌復(fù)合微生物肥[登記證號(hào)：微生物肥（2012）臨字（1559）號(hào)]（總養(yǎng)分≥6% ，有效活菌總數(shù)≥5千萬(wàn)/g）。

供試苦瓜品種：廣州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院研育的“碧豐2號(hào)”豐產(chǎn)型油青苦瓜

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)處理

本試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理，各處理施肥量見(jiàn)表1。

T1：空白試驗(yàn)

T2：常規(guī)施肥（CK對(duì)照）

T3：復(fù)合微生物肥（N、P、K總養(yǎng)分≥6%），滅菌后的生物肥；膨大期少量補(bǔ)充復(fù)合肥（補(bǔ)充P、K養(yǎng)分）

T4：復(fù)合微生物肥（N，P，K總養(yǎng)分≥6%）；膨大期少量補(bǔ)充復(fù)合肥（補(bǔ)充P，K養(yǎng)分）

1.2.2 試驗(yàn)地與田間設(shè)計(jì)

試驗(yàn)地屬砂壤土，肥力中等，地力均勻，排灌方便，前茬作物菜心。試驗(yàn)地設(shè)計(jì)采取隨機(jī)區(qū)組排列，三次重復(fù)，小區(qū)面積20m2，區(qū)內(nèi)設(shè)置兩畦一溝，畦長(zhǎng)10m，雙畦加溝寬2m（即單畦寬80cm，溝寬40cm），本試驗(yàn)采用棚架（平棚）疏植栽培方式，搭架雙行對(duì)向“品”字型栽培。種植規(guī)格株行距120cm×150cm，小區(qū)植株16株，小區(qū)四周設(shè)置保護(hù)行。

1.2.3 栽培管理

2月6日大棚育苗，注意防寒管理。2月15日瓜苗兩葉一心移栽前第一次施肥，薄施0.1%比例水肥；2月16日整地起畦，第二次施肥為均勻撒施基肥，耙平畦面，劃分小區(qū)，下午移植定苗，淋足定根水；2月24日幼苗開(kāi)始抽蔓時(shí)進(jìn)行第三次撒施追肥；3月6日搭架引蔓初花后進(jìn)行第四次撒施追肥；3月18日盛花期（不同處理存在差異，見(jiàn)表二）進(jìn)行第五次撒施覆土追肥；4月3日進(jìn)行統(tǒng)一采收，以后每采收兩次（10d左右）按第六次施肥量進(jìn)行追肥（每次施肥量見(jiàn)表一）；5月17日統(tǒng)一清園結(jié)束生產(chǎn)。全生育期進(jìn)行水分管理和病蟲(chóng)害防治等常規(guī)管理，及時(shí)采收商品瓜。

2 結(jié)果與分析

2.1 田間表格及調(diào)查數(shù)據(jù)

注：根據(jù)采購(gòu)價(jià)格，采用與化肥成本約相等的復(fù)合微生物肥料進(jìn)行施肥，以相同的投入成本來(lái)進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)。復(fù)合肥價(jià)格約為復(fù)合微生物肥料的3.5倍，尿素價(jià)格稍高于復(fù)合微生物肥料，可視作為與其價(jià)格相等，但仍具有有力的說(shuō)服力。

2.2 產(chǎn)量結(jié)果分析

參加本次試驗(yàn)的苦瓜處理T1空白試驗(yàn)折畝產(chǎn)1470.7kg（空白仍具一定產(chǎn)量，為前作之后，土中仍殘留一定底肥，而該品種苦瓜屬豐產(chǎn)型品種，根系吸收能力較強(qiáng)），較對(duì)照處理T2減產(chǎn)1971.0kg，減產(chǎn)57.3%，減產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，在本實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)量排名第四；處理T3（滅菌后的復(fù)合微生物肥料試驗(yàn)）折畝產(chǎn)3545.1kg，較對(duì)照處理常規(guī)施肥增產(chǎn)103.4kg，增產(chǎn)率3.0%，增產(chǎn)未達(dá)到顯著水平，本實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)量排名第二；處理四（復(fù)合微生物肥料試驗(yàn)）折畝產(chǎn)4355.5kg，較對(duì)照處理T2畝增產(chǎn)913.8kg，增產(chǎn)率26.6%，增產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，比處理T3（滅菌后的復(fù)合微生物肥料試驗(yàn)）增產(chǎn)810.4kg，增產(chǎn)率22.9%，增產(chǎn)達(dá)到極顯著水平，產(chǎn)量在本實(shí)驗(yàn)中排名第一。

3 結(jié)論

本次肥料試驗(yàn)旨在試驗(yàn)“虹源”牌復(fù)合微生物肥料的肥效和對(duì)苦瓜產(chǎn)量、品質(zhì)及抗性的影響，從田間調(diào)查表表3可以看出其對(duì)苦瓜的生長(zhǎng)勢(shì)和田間抗性影響效果不明顯，但根據(jù)表4總產(chǎn)量及方差分析表明滅菌前復(fù)合微生物肥料增產(chǎn)效果達(dá)到顯著水品，與滅菌后產(chǎn)量對(duì)比，增產(chǎn)亦達(dá)到明顯效果，得出結(jié)論：“虹源”牌復(fù)合微生物肥料在本地區(qū)對(duì)苦瓜的產(chǎn)量有明顯的增產(chǎn)效應(yīng)，復(fù)合微生物肥料中的微生物有效促進(jìn)土壤肥份分解釋放，加強(qiáng)吸收，對(duì)苦瓜的產(chǎn)量上升和質(zhì)量改善有著顯著的促進(jìn)作用。

參考文獻(xiàn)

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關(guān)鍵詞 土壤微生物 分解作用 涂布平板法

中圖分類號(hào) G633.91 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B

“土壤微生物的分解作用”是人教版高中生物必修內(nèi)容中的探究實(shí)驗(yàn)之一，旨在讓學(xué)生通過(guò)宏觀的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象了解微觀的實(shí)驗(yàn)原理，明白微生物在生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)循環(huán)中的重要作用。然而由于實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象較不明顯，開(kāi)展該實(shí)驗(yàn)的學(xué)校寥寥無(wú)幾。

1 教材分析與實(shí)驗(yàn)條件選擇

在人教版“土壤微生物分解作用”的實(shí)驗(yàn)中，教材提出了2個(gè)參考案例。第一個(gè)案例，使用落葉為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，設(shè)置滅菌土壤為對(duì)照組，對(duì)比得出土壤微生物具有分解作用;第二個(gè)案例：使用淀粉為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)斐林試劑和碘液的顯色反應(yīng)，得出土壤微生物具有分解作用。對(duì)比發(fā)現(xiàn)，第二個(gè)案例實(shí)驗(yàn)時(shí)間適中，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象較為明顯;同時(shí)復(fù)習(xí)了斐林試劑的使用方法，較適合開(kāi)展實(shí)驗(yàn)教學(xué)。因此，筆者選用第二個(gè)案例（土壤微生物對(duì)淀粉的分解作用），對(duì)“土壤微生物的分解作用”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

溫度、淀粉糊濃度和反應(yīng)時(shí)間是影響土壤微生物分解作用的主要因素。筆者選取了15°C、20°C、25°C、30°C和室溫等5個(gè)溫度，2%、4%、6%和8%等4個(gè)淀粉糊濃度以及5 d、7 d和9 d等3個(gè)反應(yīng)時(shí)間，探究它們對(duì)土壤微生物分解作用的影響。

特定土壤的pH是確定值，而pH的變化會(huì)影響土壤微生物的分解作用。在確定適宜的溫度、淀粉糊濃度和反應(yīng)時(shí)間之后，以pH為變量，繼續(xù)探究pH對(duì)土壤微生物分解作用的影響。

為了使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更具科學(xué)性，需要設(shè)置對(duì)照組。筆者在教材的基礎(chǔ)上增加了滅菌土壤浸出液作為第二對(duì)照組，排除了土壤浸出液中其他非生物因素的干擾，增加了實(shí)驗(yàn)的嚴(yán)謹(jǐn)性。

在教學(xué)研究中，有學(xué)者使用不同種類的土壤進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以確定哪種土壤微生物的分解能力最強(qiáng)。土壤微生物分解能力的強(qiáng)弱，主要受微生物種類和數(shù)量的影響。因此，為了揭示土壤微生物數(shù)量對(duì)分解作用的影響，筆者根據(jù)《微生物實(shí)驗(yàn)》的相關(guān)內(nèi)容，采用涂布平板法，對(duì)實(shí)驗(yàn)的土壤微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)，初步確定土壤微生物的分解能力。

綜上所述，“土壤微生物的分解作用”實(shí)驗(yàn)可劃分為三個(gè)小實(shí)驗(yàn)，分別是：（1） 土壤微生物對(duì)淀粉分解作用實(shí)驗(yàn);（2） pH對(duì)土壤微生物分解作用的影響實(shí)驗(yàn);（3） 土壤微生物計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)。其中第一個(gè)小實(shí)驗(yàn)為主實(shí)驗(yàn)，第二、第三個(gè)小實(shí)驗(yàn)為擴(kuò)展實(shí)驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1 實(shí)驗(yàn)器材

實(shí)驗(yàn)器具：小燒杯、試管、三角瓶、玻璃棒、pH計(jì)、恒溫光照培養(yǎng)箱、牛皮紙、紗布。

材料和試劑：土壤、淀粉、斐林試劑、碘液、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、稀HCl、稀NaOH、無(wú)菌水。

2.2 實(shí)驗(yàn)步驟

2.2.1 土壤微生物對(duì)淀粉的分解作用

（1） 土壤浸出液的制備：按照課本介紹的方法制備。

（2） 淀粉糊的制作：分別稱取10 g、20 g、30 g和40 g淀粉，溶于500 mL開(kāi)水中，充分?jǐn)嚢瑁瞥珊隣?，得到濃度分別為2%、4%、6%和8%的淀粉糊。

（3） 滅菌：將蒸餾水、部分土壤浸出液、各濃度淀粉糊、實(shí)驗(yàn)所用的燒杯和試管等器皿放入滅菌鍋中滅菌。

（4） 加樣培養(yǎng)：按照課本介紹的方法，在無(wú)菌環(huán)境中操作加樣，并將實(shí)驗(yàn)溶液分別放入15°C、20°C、25°C和30°C的培養(yǎng)箱及室溫中培養(yǎng)

（5） 顯色反應(yīng)：按照課本介紹的方法取出實(shí)驗(yàn)溶液進(jìn)行顯色反應(yīng)。

2.2.2 pH對(duì)土壤微生物分解作用的影響

（1） 土壤浸出液pH的測(cè)定和調(diào)節(jié)：使用北京哈納HI8424NEW型pH計(jì)測(cè)出土壤浸出液的原始pH值為8.12;使用稀HCl和稀NaOH溶液，將土壤浸出液的pH上下各調(diào)節(jié)1.5和3.0個(gè)pH單位，選擇5.12、6.62、8.12、9.62和11.12等5個(gè)pH作為實(shí)驗(yàn)pH。

（2） 制作淀粉糊、滅菌、加樣、培養(yǎng)與顯色反應(yīng)操作同2.2.1。

2.2.3 土壤微生物的計(jì)數(shù)（涂布平板法）

計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)包括配制細(xì)菌培養(yǎng)基、倒平板、制備土壤稀釋液、涂布和培養(yǎng)等五個(gè)步驟，具體操作同《微生物實(shí)驗(yàn)》教材。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 土壤微生物對(duì)淀粉的分解作用

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，土壤微生物對(duì)淀粉的分解作用與溫度、淀粉糊濃度和分解作用的時(shí)間有關(guān)。30°C下，土壤微生物的分解作用最強(qiáng)烈，室溫（25°C～30°C）下次之，25°C、20°C和15°C下的分解作用依次減弱。土壤微生物對(duì)4%淀粉糊的分解作用最強(qiáng)，其次是2%、6%和8%。隨著時(shí)間的推移，土壤微生物對(duì)淀粉的分解作用逐漸增強(qiáng);培養(yǎng)的第5 d，已有顯色現(xiàn)象;第7 d顯色現(xiàn)象顯著;第9 d和第7 d的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象相差無(wú)幾。從顯色劑的顯色效果看，加入斐林試劑的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象更直觀明顯。淀粉被分解后，產(chǎn)生的葡萄糖與斐林試劑作用，生成很明顯的磚紅色沉淀;加入碘液后，實(shí)驗(yàn)溶液依舊變藍(lán)，只是顏色較對(duì)照組淺。這說(shuō)明，一方面斐林試劑的顯色效果較顯著;另一方面，短時(shí)間里淀粉不能被分解殆盡。

3.2 pH對(duì)土壤微生物分解作用的影響

pH為8.12的原始土壤浸出液中，微生物對(duì)淀粉糊的分解作用結(jié)果最明顯，出現(xiàn)最多的磚紅色沉淀;弱酸（pH6.62）和弱堿（pH9.62）性的土壤浸出液中，微生物對(duì)淀粉糊的分解作用結(jié)果出現(xiàn)較多的磚紅色沉淀，但均少于原始pH的土壤浸出液;強(qiáng)堿性（pH11.12）的土壤浸出液中，微生物對(duì)淀粉糊的分解作用結(jié)果產(chǎn)生較少的磚紅色沉淀;強(qiáng)酸性（pH5.12）的土壤浸出液中，微生物對(duì)淀粉糊的分解作用結(jié)果產(chǎn)生最少的磚紅色沉淀。碘液的顯色反應(yīng)結(jié)果并沒(méi)有明顯的差別，說(shuō)明只有部分淀粉被分解。

3.3 土壤微生物的計(jì)數(shù)

涂布平板結(jié)果顯示，土壤浸出液中微生物的含量約為668 889個(gè)/mL;根據(jù)之前的實(shí)驗(yàn)步驟得知，實(shí)驗(yàn)土壤浸出液濃度為0.1 g/mL，因此土壤中微生物的含量約為6 688 890個(gè)/g（表1）。有教學(xué)條件的學(xué)校可設(shè)計(jì)該實(shí)驗(yàn)，分析不同土壤微生物具有不同分解作用的原因，讓學(xué)生更深入地理解和掌握知識(shí)，培養(yǎng)學(xué)生的科學(xué)素養(yǎng)和探究精神。

4 討論

“土壤微生物的分解作用”實(shí)驗(yàn)中，材料易得，操作簡(jiǎn)單，可以在教學(xué)活動(dòng)中順利實(shí)施。許多學(xué)校由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，影響教學(xué)安排，而很少開(kāi)展這一探究活動(dòng)。但筆者發(fā)現(xiàn)，該實(shí)驗(yàn)不但可以在短時(shí)間內(nèi)完成，而且能開(kāi)發(fā)出與之相關(guān)的教學(xué)實(shí)驗(yàn)，如pH對(duì)土壤微生物分解作用的影響、土壤微生物計(jì)數(shù)等，這對(duì)學(xué)生創(chuàng)新思維的培養(yǎng)大有裨益。如果學(xué)校教學(xué)條件有限，無(wú)法順利開(kāi)展該實(shí)驗(yàn)，可由教師演示或者播放實(shí)驗(yàn)錄像，以取得一定的教學(xué)效果。

在本實(shí)驗(yàn)中，筆者并未以土壤類型為實(shí)驗(yàn)變量，探究不同土壤中微生物分解作用和微生物數(shù)量的異同。但學(xué)校在安排教學(xué)活動(dòng)時(shí)，可以將學(xué)生分組，不同小組以不同的土壤為研究對(duì)象開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。這樣既節(jié)約了時(shí)間，又可以達(dá)到很好的實(shí)驗(yàn)效果。

本研究確定的適宜實(shí)驗(yàn)條件，可以為廣大師生提供參考。各學(xué)校也可以借鑒筆者的思路，開(kāi)展類似實(shí)驗(yàn)，并安排不同學(xué)生完成不同條件下的實(shí)驗(yàn)，最后匯總結(jié)果，探討比較。這不僅能幫助學(xué)生培養(yǎng)團(tuán)隊(duì)合作精神和創(chuàng)新實(shí)踐能力，也能激發(fā)學(xué)生對(duì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的熱情，進(jìn)一步培養(yǎng)學(xué)生對(duì)生物學(xué)科的興趣。

參考文獻(xiàn)：

篇4

關(guān)鍵詞：克菌丹；蘋果；農(nóng)藥殘留；氣相色譜分析

中圖分類號(hào)：TQ457.2+5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2017）05-0951-02

DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2017.05.041

Degradation Dynamics and Residues of Captan 80% WG in Apple and Soil

GE Qian， LI Zhen-yong， NIU Yan， GOU Chun-lin

（Quality Standards and Testing Institute of Agricultural Technology， Yinchuan 750001， China）

Abstract： The dynamic degradation and final residues were tested in 3 sites during 2 years，to study the degradation of captan 80% WG in apple and soil. The captan residues in apple and soil were determined by GC. The results showed that the degradation rate of captan in apple and soil in the dynamic tests was fast，and all accorded with the first-order dynamics equation. The half-lives of captan in apples and soil were 7.3～12.6 d and 9.8～17.8 d respectively，the final captan residues were all less than the maximum residue limit of 15 mg/kg. In apple planting， it should be safe and reliable to apply captan （80% WG，800×，a. i. 4 000 mg/kg） with the recommended dose 3 times at most.

Key words： captan； apple； pesticide residue； gas chromatography

克菌丹是一種保護(hù)性殺菌劑，有一定的保護(hù)作用和光譜治療作用[1]，化學(xué)名稱為N-三氯-甲硫基-1，2，3，6-四氫苯鄰二甲酰亞胺，主要用于防治白粉病等，可與大多數(shù)常規(guī)農(nóng)藥混合使用[2]。克菌丹常用的測(cè)定方法主要有氣相色譜-質(zhì)聯(lián)用法[3]、液相色譜分析法[4]、薄層色譜法[5]和氣相色譜分析法[6，7]。

試驗(yàn)選擇寧夏、安徽和北京3地，進(jìn)行了80%克菌丹水分散粒劑在蘋果和土壤上的殘留試驗(yàn)，為評(píng)價(jià)80%克菌丹水分散粒劑在蘋果上使用后的環(huán)境安全性，為農(nóng)藥的合理使用準(zhǔn)則和農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

試驗(yàn)作物：富士蘋果。

供試試劑：克菌丹標(biāo)準(zhǔn)品，純度98.5%（德國(guó)DR公司）；乙腈、正己烷、丙酮、氯化鈉（分析純，將氯化鈉于140 ℃烘箱中烘烤4 h）。

試驗(yàn)設(shè)備：16型B普蕾噴霧器；Agilent 6890N型氣相色譜儀（ECD檢測(cè)器）；RE-301型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；TG20-WS型臺(tái)式高速離心機(jī)；XH-D型上海比朗旋渦混合器；Vitamix 6300型破壁調(diào)理料理機(jī)。

1.2 方法

1.2.1 儀器條件 色譜柱DB-35MS色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm），載氣N2，加熱器300 ℃，壓力189.0 kPa，總流量105 mL/min，流量3.6 mL/min，平均線速度62 cm/s，柱箱溫度60～280 ℃，尾吹氮?dú)饬髁?5 mL/min，進(jìn)樣量1.0 μL。

1.2.2 動(dòng)態(tài)殘留試驗(yàn) 蘋果：消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)設(shè)3個(gè)重復(fù)，處理間應(yīng)設(shè)置保護(hù)隔離區(qū)。選無(wú)農(nóng)藥污染處為清水空白對(duì)照。施藥劑量為200倍稀釋（制劑用量），分別施藥2 h和1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d后采集蘋果樣品。每個(gè)處理重復(fù)3次。

土壤：以制劑用量2.0 g/m2施藥，對(duì)單獨(dú)選擇的30 m2的地塊進(jìn)行施藥。分別在施藥后2 h和1、2、3、5、7、10、14、21、30、45 d采樣。每個(gè)處理重復(fù)3次。

1.2.3 最終殘留試驗(yàn) 設(shè)低劑量和高劑量。低劑量按800倍稀釋（制劑用量），高劑量按533倍稀釋（制劑用量）。每小區(qū)選2棵樹(shù)，共低劑量施藥3次、高劑量施藥3次、低劑量施藥4次、高劑量施藥4次4個(gè)處理，每個(gè)處理重復(fù)3次，每次施藥間隔10 d，末次施藥后14、21、28 d采集蘋果及土壤樣品。

1.2.4 檢測(cè)方法 將樣品于破壁調(diào)理料理機(jī)中勻漿后稱取10.00 g，放入50 mL離心管中，加入20 mL乙腈，振蕩器中振蕩1 h，加入已高溫烘干的5 g氯化鈉。振搖1 min后，4 000 r/min離心3 min，取5.0 mL上清液于饉跗恐校旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后，用5 mL丙酮-正己烷（體積比1∶9）預(yù)淋洗弗羅里硅柱層析柱中，用12.0 mL丙酮-正己烷（體積比1∶9）分4次洗脫，每次3.0 mL，洗脫并收集濃縮瓶中的克菌丹提取液。最后將收集液于35 ℃，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，2.5 mL正己烷定容，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘋果中克菌丹消解動(dòng)態(tài)

2013年克菌丹在安徽、北京、寧夏3地中蘋果的半衰期分別為10.8、8.5、8.5 d，原始沉積量C0分別為5.0、2.7、4.4 mg/kg；2014年克菌丹在安徽、北京、寧夏蘋果中的半衰期分別為7.3、12.2、12.6 d，原始沉積量C0分別為4.7、7.6、3.5 mg/kg。2年3地施藥10 d后，3地消解率均達(dá)到50%，施藥21 d后消解率達(dá)到78%～92%。根據(jù)《GB 2763-2014》（食品中農(nóng)藥最大殘留限量）規(guī)定，蘋果中克菌丹MRL值為15 mg/kg，由以上結(jié)果可知，克菌丹在蘋果上降解速率較快，且克菌丹殘留量均低于最大殘留限量15 mg/kg，其結(jié)果見(jiàn)圖1、表1。

2.2 土壤中克菌丹消解動(dòng)態(tài)

2013年克菌丹在安徽、北京、寧夏土壤中的半衰期分別為17.8、11.6、16.9 d，原始沉積量分別為5.0、4.7、3.3 mg/kg；2014年克菌丹在安徽、北京、寧夏土壤中的半衰期分別為9.8、12.6、13.4 d，原始沉積量分別為6.7、4.5、4.7 mg/kg；2年3地施藥10 d后，3地消解率均達(dá)到50%，施藥35 d后消解率達(dá)到77%～96%。由此可知，克菌丹在土壤中降解速率較快，其結(jié)果見(jiàn)表2、圖2。

2.3 克菌丹在蘋果和土壤中的最終殘留量

2013-2014年在寧夏回族自治區(qū)銀川市、安徽省宿州市和北京市2年3地殘留試驗(yàn)結(jié)果（表3），80%克菌丹水分散粒劑，用藥量533～800倍液（制劑用量），分3次和4次施藥，間隔期為10 d。施藥后間隔14、21、28 d采樣，蘋果中克菌丹的殘留量分別為0.70～5.0 mg/kg、0.17～2.9 mg/kg、

3 結(jié)論

根據(jù)GB 2763-2014，克菌丹在蘋果中最大殘留限量值（MRL）15 mg/kg。由上述結(jié)果可知，克菌丹在蘋果和土壤中降解動(dòng)態(tài)符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)模型。在所有蘋果和土壤樣品中，克菌丹殘留量均小于最大殘留限量值，且相對(duì)于蘋果生長(zhǎng)周期，克菌丹降解速率較快。在蘋果種植中，以推薦劑量800倍稀釋（有效成分4 000 mg/kg），最多施藥3次，使用該農(nóng)藥對(duì)蘋果及土壤環(huán)境安全可信。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李智文.克菌丹在蘋果及土壤中的殘留動(dòng)態(tài)及最終殘留研究[D].陜西楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2003.

[2] 李友順，范騰飛，馬 超，等.80%克菌丹分散粒劑高效液相色譜分析[J].農(nóng)藥，2010（3）：184-185.

[3] 秦冬梅.克菌丹50%可濕性粉劑在草莓和土壤中的殘留動(dòng)態(tài)研究[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào)，2008（5）：2048-2051.

[4] 周 欣，臧曉歡，王東躍，等.分散液相微萃取-氣相色譜聯(lián)用測(cè)定葡萄中百菌清、克菌丹和滅菌丹殘留[J].分析化學(xué)，2009（1）：41-45.

[5] 周艷明，關(guān) 麗，牛 森，等.氣相色譜法測(cè)定蔬菜中克菌丹、滅菌丹、敵菌丹殘留量的研究[J].食品科學(xué)，2009（12）：187-189.

篇5

關(guān)鍵詞木霉;黃瓜枯萎病菌;生防

木霉(Trichodermaspp.)屬真菌界、雙核菌門、半知菌亞門、絲孢綱、叢梗孢目、叢梗孢科、真菌屬,是迄今為止研究和應(yīng)用最多的一類生防菌[1]。木霉的生防機(jī)制復(fù)雜,主要包括競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、抗生、溶菌等[2]。研究木霉對(duì)病原菌的作用機(jī)制及防治效果,可以優(yōu)選木霉菌株,從而提高生防效率。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

以病株上分離的黃瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.cucumerinum)為拮抗對(duì)象,土壤中分離的木霉菌株為拮抗菌。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1競(jìng)爭(zhēng)作用。采用對(duì)峙培養(yǎng)法[3],在直徑為9cm的PDA平板一側(cè)接種直徑為5mm的病原真菌菌絲塊,在平板另一側(cè)接種拮抗菌,28℃共培養(yǎng),觀察兩菌的生長(zhǎng)情況。

1.2.2重寄生作用。在PDA培養(yǎng)基中央放置1塊20mm×20mm無(wú)菌蓋玻片,在左側(cè)距蓋玻片40mm處接種木霉,右側(cè)距蓋玻片20mm處接種黃瓜枯萎病菌,28℃恒溫培養(yǎng)。取下蓋玻片,于顯微鏡下觀察菌絲體的作用方式。

1.2.3抗生作用。在裝有100mLPDB的三角瓶中接入直徑5mm的木霉菌塊,28℃、150rpm培養(yǎng)6d,取濾液離心后過(guò)0.22μm細(xì)菌濾器。在90mL、45℃的PDA中加入10mL上述濾液,搖勻倒成平板,接種直徑為5mm的黃瓜枯萎病菌菌塊。28℃恒溫培養(yǎng),觀察生長(zhǎng)情況。

1.2.4溶菌作用。將培養(yǎng)4d的木霉發(fā)酵液8000rpm離心10min。取15mL上清液倒入培養(yǎng)皿中,接入黃瓜枯萎病菌菌塊。淺層培養(yǎng)5d后觀察生長(zhǎng)情況。以高溫滅菌的木霉上清液中培養(yǎng)的病菌菌塊為對(duì)照。

1.2.5盆栽試驗(yàn)。將黃瓜種子經(jīng)70%乙醇消毒1min,2%NaClO消毒5min,55℃溫水浸15~20min,25℃浸泡2~3h,無(wú)菌水沖洗3次,25~30℃下催芽1~2d。將黃瓜枯萎病菌接種到麩皮∶玉米粉為3∶1的培養(yǎng)基中,28℃恒溫箱中培養(yǎng)至長(zhǎng)滿整個(gè)三角瓶。將催芽基本一致的黃瓜苗在木霉菌懸液(約1×108cfu/mL)中浸1h,取出于滅菌濾紙片上干燥1h后,播種于拌有黃瓜枯萎病菌制劑的土壤中。以無(wú)菌水浸種處理為對(duì)照。2結(jié)果與分析中國(guó)編輯。

2.1競(jìng)爭(zhēng)作用

平皿對(duì)峙試驗(yàn)顯示,木霉生長(zhǎng)迅速,可快速占據(jù)空間,有很強(qiáng)的生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì),能有效抑制黃瓜枯萎病菌的生長(zhǎng)。

2.2重寄生作用

顯微鏡下觀察到木霉菌絲體纏繞著黃瓜枯萎菌絲生長(zhǎng),并在病菌菌絲上產(chǎn)生大量分枝,產(chǎn)生寄生作用。

2.3抗生作用

在PDA培養(yǎng)基中加入10%的木霉發(fā)酵液后,黃瓜枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)不旺盛,與對(duì)照有顯著的差異。

2.4溶菌作用

在未滅菌的木霉上清液中培養(yǎng)的黃瓜枯萎菌塊,僅有細(xì)小菌絲的生長(zhǎng),數(shù)量較少;而在滅菌后的上清液中,黃瓜枯萎菌生長(zhǎng)旺盛,形成大塊菌絲團(tuán)。

2.5盆栽防效試驗(yàn)

盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,與對(duì)照相比,木霉浸種處理的黃瓜幼苗死亡率為25.0%,顯著低于對(duì)照的66.7%。

3結(jié)論與討論

作為安全而環(huán)境友好的生防因子,木霉在田間的施用可有效地防治作物病害,從而避免大量使用農(nóng)藥導(dǎo)致病原菌抗藥性的產(chǎn)生、作物農(nóng)藥含量超標(biāo)及環(huán)境污染等問(wèn)題[4-6]。因此,對(duì)木霉生防機(jī)制深入而全面的研究,將對(duì)綠色農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展產(chǎn)生重要的推動(dòng)作用。

4參考文獻(xiàn)

[1]辛雅芬,商金杰,高克詳.拮抗木霉菌的生防機(jī)制研究進(jìn)展[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,33(4):88-91.

[2]HARMANG,HOWELLCR,VITERBOA,etal.Trichodermaspecies-opportunistic,avirulentplantsymbionts[J].Nature,2004(2):43-56.

[3]蒲金基,曾會(huì)才.綠色木霉LTR12-1對(duì)黃瓜枯萎病菌防治作用機(jī)制的初步研究[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2002,22(4):22-25.

[4]呂天曉,徐鳳花,李世貴,等.生防木霉菌原生質(zhì)體的制備及再生研究[J].生物技術(shù)通報(bào),2009(4):130-134.

篇6

關(guān)鍵詞 祁連山 植物根際 放線菌 功能酶

0前言

胞外水解酶諸如淀粉酶、蛋白酶、脂酶等在食品業(yè)、飼料添加劑、生物醫(yī)學(xué)科學(xué)及化工工業(yè)等行業(yè)具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。工業(yè)生產(chǎn)一般是在特殊的物理化學(xué)條件下進(jìn)行的，而在這個(gè)過(guò)程中起重要作用的酶制劑需要合適的反應(yīng)條件才能達(dá)到最佳酶活，然而通常情況下這種最佳反應(yīng)條件很難達(dá)到。因此尋找能夠適應(yīng)特殊環(huán)境條件的酶制劑是關(guān)鍵。放線菌是一類能夠產(chǎn)生多N生物活性物質(zhì)的微生物資源，如酶、抗生素、氨基酸、維生素、有機(jī)酸、生物堿等均由其產(chǎn)生。

植物根際是指生物和物理特性受到植物根系影響的緊密環(huán)繞根部的區(qū)域。在植物根際區(qū)域內(nèi)生長(zhǎng)的微生物稱為根際微生物。因此，植物根際微生物是一類值得深入研究與開(kāi)發(fā)的微生物資源，從根際微生物的代謝產(chǎn)物中尋找各種生物活性物質(zhì)是改善工業(yè)生產(chǎn)條件的又一重要途徑。

目前，還沒(méi)有針對(duì)我國(guó)祁連山地區(qū)藥用植物根際放線菌資源的研究報(bào)道，本文采用了稀有放線菌資源選擇性分離方法，對(duì)采自祁連山地區(qū)不同海拔梯度、不通植被類型的不同藥用植物根系土壤放線菌進(jìn)行分離，并對(duì)所得菌株做了部分生理活性測(cè)定，對(duì)功能酶產(chǎn)生菌做了篩選。

1 材料與方法

1.1土樣來(lái)源及處理

2010年7月下旬從祁連山地區(qū)選取7個(gè)不同植被類型、不同海拔梯度的樣區(qū)，采集到29份代表性植物的根際土，各約100g，分裝于自封袋中，貼上標(biāo)簽后帶回實(shí)驗(yàn)室，以供分離放線菌之用。土樣概況及藥用植物的藥理功能見(jiàn)表1。

1.2 菌種分離

1.2.1 分離培養(yǎng)基

培養(yǎng)基采用甘油精氨酸瓊脂：精氨酸2.0g；NaCl 50g；甘油 12.5g； FeSO4 7H2O 0.01g；MgSO4 7H2O 0.5g；K2HPO4 1g；CuSO4 5H2O 0.0001g；ZnSO4 7 H2O 0.0001g；MnSO4 H2O 0.0001g蒸餾水1000mL；瓊脂20g；調(diào)節(jié)pH至8.0以上。

1.2.2 分離方法

稱取3g土樣于120℃干熱處理1h，用27mL6%的酵母提取物溶液和270ul5%的SDS溶液的混合液作為土樣提取液。采用稀釋涂布平板法進(jìn)行分離。

1.3 代謝產(chǎn)物測(cè)定

1.3.1 MR實(shí)驗(yàn)

培養(yǎng)基：蛋白胨5g，葡萄糖5g，K2HPO4 5g，蒸餾水1000ml。

1.3.2 硫化氫的產(chǎn)生

柴斯納培養(yǎng)基：蛋白胨10g，檸檬酸鐵0.5g，蒸餾水1000ml，pH7.2，121℃滅菌20min。

1.4 功能酶產(chǎn)生菌的篩選

1.4.1 色氨酸酶

培養(yǎng)基：1%胰胨水溶液，調(diào)pH7.2～7.6，分裝1/4～1/3試管；115℃滅菌30min。

試劑：對(duì)二甲基氨基苯甲醛8g，乙醇（95%）760ml，濃HCl160ml。

1.4.2 過(guò)氧化氫酶

試劑：配3%～10%過(guò)氧化氫溶液

1.4.3 脲酶

培養(yǎng)基：蛋白胨1g，NaCl5g，葡萄糖1g，KH2PO4 2g，酚紅0.012g，瓊脂15g，蒸餾水1000ml，pH6.8～6.9（微黃）。121℃滅菌20min。

試劑：30%的尿素，用乙醚消毒。待培養(yǎng)基冷至55℃時(shí)將無(wú)菌尿素加入，使尿素終濃度為2%。

1.4.4 脂酶

培養(yǎng)基：蛋白胨1g，NaCl 5g，CaCl2 ?7H2O 0.1g，瓊脂9g，蒸餾水1000ml，pH7.4，于121℃滅菌20min。

底物：吐溫-20、吐溫-40、吐溫-80分別于121℃滅菌20min。

1.4.5 蛋白酶

培養(yǎng)基：蛋白胨5g，葡萄糖20g，明膠200g，蒸餾水1000ml。

1.4.6 淀粉酶

淀粉水解培養(yǎng)基：可溶性淀粉10g，K2HPO4 0.3g，MgCO3 1g，NaCl 0.5g，KNO3 1g瓊脂粉20g；蒸餾水1000ml；pH7.2～7.4。

1.4.7 纖維素酶

纖維素水解培養(yǎng)基（pH7.2）：MgSO4 0.5g，NaCl 0.5g， K2HPO4 0.5g， KNO3 1g；蒸餾水1000ml，濾紙條。

2 結(jié)果

2.1 代謝產(chǎn)物測(cè)定結(jié)果

01、16 兩株菌產(chǎn)生硫化氫，所有菌株MR實(shí)驗(yàn)皆為陰性。

2.2 功能酶產(chǎn)生菌篩選結(jié)果

3 結(jié)論

本研究對(duì)祁連山地區(qū)8種藥用植物根際土壤中分離到的18株形態(tài)各異的放線菌做了代謝產(chǎn)物測(cè)定和功能酶菌株篩選，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)18株放線菌中有10株放線菌產(chǎn)淀粉酶，14株產(chǎn)蛋白酶，14株產(chǎn)脲酶，18株產(chǎn)過(guò)氧化氫酶，4株產(chǎn)聚氧乙烯山梨酸醇單月桂酸酯酶，8株產(chǎn)聚氧乙烯山梨酸醇單油酸酯酶，15株產(chǎn)聚氧乙烯山梨酸醇脂肪酸酯酶，0株產(chǎn)色氨酸酶，0株產(chǎn)纖維素酶。其中菌株QL15除不產(chǎn)纖維素酶和色氨酸酶外，同時(shí)產(chǎn)其他7種酶。有兩株菌產(chǎn)H2S，18株放線菌在糖代謝過(guò)程中均無(wú)有機(jī)酸產(chǎn)生。

項(xiàng)目來(lái)源：西北民族大學(xué)2016年本科生科研創(chuàng)新項(xiàng)目，項(xiàng)目編號(hào)：UPIP16222。

參考文獻(xiàn)

[1] 司美茹，薛泉宏，來(lái)航線.放線菌分離培養(yǎng)基篩選及雜菌抑制方法研究[J].微生物學(xué)通報(bào)，2004，31（2）：61-65.

[2] Rao et al.1998.Kulkarni et al.1999；Niehaus et al.1999；Pandey et al. 1999；2000.

篇7

忽視苗床土壤的消毒。有的菜農(nóng)以為早春氣溫低，忽視苗床土壤的消毒處理，結(jié)果常會(huì)出現(xiàn)菜苗出苗后感染病害，造成生長(zhǎng)不良或死苗現(xiàn)象，有的甚至全軍覆沒(méi)。正確的方法是應(yīng)選擇經(jīng)過(guò)消毒滅菌后的無(wú)病苗床。為此，苗床宜選擇背風(fēng)向陽(yáng)、地勢(shì)高燥的地方；床土最好選擇使用比較肥沃的土壤，連續(xù)4～5年未種過(guò)茄果類、瓜類及十字花科蔬菜作物的大田土壤，土質(zhì)以砂壤為好，并且要注意選擇13～17厘米以內(nèi)的表層土，忌用園土作苗床土；為防止土壤帶菌傳病，一定要先對(duì)床土進(jìn)行消毒處理。常用的消毒方法有：①多菌靈滅菌。每1000克床土用50%多菌靈可濕性粉劑25～30克配制成水溶液，噴灑在床土上，拌勻后用塑料薄膜嚴(yán)密覆蓋，一般經(jīng)2～3天即可殺死土壤中枯萎病等多種病原菌。②福爾馬林滅菌。先將福爾馬林、水、腐土按1：100：4000～5000的比例噴拌均勻，然后堆起，上面覆蓋塑料薄膜，悶2～3天后再將薄膜揭開(kāi)，使藥劑散發(fā)。這樣經(jīng)1～2周即可使用。③蒸汽消毒。有條件的可采用蒸汽消毒，對(duì)苗床滅菌效果很好。即將蒸汽通入埋在苗床中的管道中，使30厘米深的土壤溫度保持在80℃，處理30分鐘。處理時(shí)土表要覆蓋嚴(yán)密，四周壓實(shí)，防止蒸汽漏跑，此方式對(duì)各種土傳病害，特別是青枯病的效果好。另外，為防止種子帶菌傳病，可用50%多菌靈或50%福美雙可濕性粉劑拌種，用藥量為種子量的0.3%。

苗床使用未經(jīng)腐熟的有機(jī)肥。施用未經(jīng)腐熟的有機(jī)肥料，易發(fā)生燒根、燒苗現(xiàn)象。菜苗燒根后，葉片邊緣發(fā)黃，葉片皺縮，如果到中后期出現(xiàn)燒根、燒苗現(xiàn)象，常給菜苗造成難以逆轉(zhuǎn)的損失，嚴(yán)重影響適期移植菜苗，延誤生產(chǎn)季節(jié)。一旦產(chǎn)生這種情況，可在廂內(nèi)灌水，降低肥料濃度，同時(shí)加大通風(fēng)排濕。另外，早春育苗在管理過(guò)程中還容易出現(xiàn)漚根現(xiàn)象，這是因?yàn)闇囟鹊?、濕度大時(shí)造成根系損傷，使菜苗葉片萎蔫發(fā)黃，菜苗停止生長(zhǎng)，遇上這種情況，要采取措施，如提高苗床濕度，減少澆水次數(shù)。及時(shí)對(duì)苗床中耕松土，通風(fēng)降低濕度，在配置苗床時(shí)，要施用充分腐熟的有機(jī)肥料，這種肥料施入苗床后，能增大土壤的保溫性能和保墑能力，有利于秧苗健壯生長(zhǎng)。

催芽的時(shí)間不夠或根本不催芽。如果不催芽或催芽時(shí)間不夠，種子在早春低溫、高濕的苗床土壤里存放時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，極易導(dǎo)致?tīng)€種、爛芽、爛根，使種子出苗的時(shí)間延遲，或出苗的量減少或根本不出苗。防止的辦法是，蔬菜種子在播前需用55℃溫水浸種15分鐘，不斷攪拌，至水溫降低到30℃左右為宜，在室溫下浸種、催芽。不同蔬菜浸種、催芽的時(shí)間有所不同，在適宜的條件下，黃瓜需36～48小時(shí)，白菜及甘藍(lán)36小時(shí)左右，茄子6～7天，辣椒5～6天，番茄2～4天，西葫蘆6～8天。催芽時(shí)，十字花科蔬菜（如甘藍(lán)、白菜、蘿卜等）種子小，以胚根突破種皮為宜；茄果類蔬菜（如茄子、辣椒、番茄等）以不超過(guò)種子長(zhǎng)度為宜；瓜類（如黃瓜、苦瓜、冬瓜等）種子可催短芽，也可催長(zhǎng)芽1～2厘米即可。

苗床溫度不夠，覆土過(guò)少或過(guò)厚。保持土壤濕潤(rùn)，出苗后要及時(shí)揭掉覆蓋地膜，防止菜苗徒長(zhǎng)和陽(yáng)光灼傷幼苗。一般蔬菜種子發(fā)芽的最低溫度為11～20℃，葉菜類為0～4℃。達(dá)不到這個(gè)要求會(huì)影響出苗進(jìn)程，導(dǎo)致?tīng)€種爛芽爛根。因此育苗最好在保溫條件好的溫室里進(jìn)行。沒(méi)有溫室的可在大棚、中棚、陽(yáng)廂里采用多層覆蓋。有條件的地方可在苗床下鋪設(shè)地?zé)峋€以提高地溫，一般白天加熱，晚上斷電。床土干、覆土過(guò)薄時(shí)，容易出現(xiàn)“戴帽苗”，即子葉出土?xí)r種皮不張開(kāi)或張開(kāi)不完全，像一頂帽子戴在子葉頂端，它不但影響子葉的正常發(fā)育，而且影響子葉的光合作用，導(dǎo)致徒長(zhǎng)。覆土過(guò)厚，幼苗出來(lái)比較晚，容易形成小老苗、老壯苗。苗床底水要澆足，覆土厚度要適當(dāng)，一般小粒種子覆土1～1.5厘米，中粒種子覆土1.5～2厘米，大粒種子覆土3～4厘米，播種至出苗前，床面覆細(xì)土。

苗床管理沒(méi)跟上。播種前澆透底墑水，撒種均勻，見(jiàn)露籽再撒些藥土，然后覆蓋稻草保濕促全苗，最后蓋上薄膜悶幾天，直至秧苗“露芽”；播種后、出苗前，保持土壤濕潤(rùn)；溫度控制在20～35℃，空氣相對(duì)濕度保持在85%～90%；出苗時(shí)出現(xiàn)“戴帽”苗，可先噴水，待種殼吸濕后，用毛刷輕輕將種殼刷掉；整個(gè)苗床都適當(dāng)控制澆水，土壤表土發(fā)白干燥時(shí)，可一次性澆透水；平時(shí)盡量減少澆水次數(shù)，以免秧苗徒長(zhǎng)；合理增施磷肥，提高秧苗的抗寒能力；注意通風(fēng)換氣，防止苗床內(nèi)空氣濕度過(guò)大和有害氣體危害蔬菜秧苗；在保證苗床溫度的情況下，盡量增加光照，使秧苗生長(zhǎng)健壯；適時(shí)早分苗，防止分苗過(guò)晚造成傷根死苗；對(duì)老化苗，每平方米苗床噴施0.2%噴施寶或300～500倍磷酸二氫鉀液，以刺激秧苗生長(zhǎng)。苗期易發(fā)生立枯病、猝倒病等。發(fā)病初期，先拔除病苗，及時(shí)噴藥保護(hù)，防止蔓延。常用的藥劑有：銅銨合劑（用硫酸銅2份，加碳酸銨11份，磨細(xì)混勻，密封24小時(shí)后即成）400～500倍液、50%多菌靈600倍液、75%百菌清或70%敵克松可濕性粉劑600～800倍液以及濃度為0.1%～0.2%的硫酸銅溶液等。施藥后為防止苗床濕度過(guò)大，可撒草木灰或細(xì)干土吸濕。

篇8

浙江云和縣地處浙西南山區(qū)，近年來(lái)，隨著“菜藍(lán)子工程”的實(shí)施，高山蔬菜發(fā)展迅速，尤其是大棚茄子在海拔700 m的高山小盆地發(fā)展尤為迅速。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2009-2011年全縣在黃源、沙鋪、大灣、云豐等高山鄉(xiāng)已發(fā)展大棚茄子300 hm2，取得了較高的經(jīng)濟(jì)效益。目前，茄子種植已成為云和縣高山蔬菜的主栽品種和農(nóng)民致富的一條新途徑。但隨著高山大棚茄子種植面積不斷擴(kuò)大，茄子綿疫病也逐年加重，已成為影響大棚茄子產(chǎn)量的主要病害之一。大棚茄子綿疫病為害一般減產(chǎn)10％，嚴(yán)重的減產(chǎn)30％。為此，必須加強(qiáng)對(duì)綿疫病的綜合防治，以獲得優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高效?，F(xiàn)將云和縣高山大棚茄子綿疫病的綜合防治技術(shù)介紹如下。

1 發(fā)病癥狀

茄子綿疫病是由真菌疫霉菌侵染所致，病菌以卵孢子在土壤中、病株殘?bào)w里越冬，病菌卵孢子隨水附在果實(shí)表皮萌發(fā)后侵入果實(shí)；病果上的孢子囊及游動(dòng)孢子通過(guò)水流傳播進(jìn)行再次侵染。茄子綿疫病為害癥狀，初期在果實(shí)表面產(chǎn)生水浸狀圓形病斑，隨后病情加重逐漸擴(kuò)大蔓延至整個(gè)果實(shí)，發(fā)病部位黃褐色或暗褐色，高濕條件下轉(zhuǎn)為白色綿狀菌絲體，果實(shí)變黑腐爛落果。嫩莖發(fā)病變褐縊縮腐爛，葉片病斑褐色，水漬狀，有明顯的輪紋，花為褐色水漬狀腐爛。

2 發(fā)病原因

茄子綿疫病發(fā)病、流行與溫、濕度有直接關(guān)系，特別是高溫、高濕氣候條件有利于病害發(fā)生和發(fā)展。一般氣溫在28～32℃，相對(duì)濕度在85％以上的條件下有利于綿疫病病害大發(fā)生。種植易感病品種、地勢(shì)低、排水不良、化肥使用過(guò)多、種植密度大、植株郁閉、結(jié)果期連續(xù)陰雨，均易發(fā)病。如未及時(shí)防治將造成病情蔓延，嚴(yán)重減產(chǎn)。

3 綜合防治方法

3.1 選用抗病良種

選擇耐濕、耐高溫、抗病、高產(chǎn)、熟期中等的品種，如杭豐一號(hào)、杭茄1號(hào)、引茄1號(hào)等。

3.2 實(shí)行輪作

避免連作地種植茄子，可采用水旱輪作或茄子與葉菜類或豆科類蔬菜輪作。

3.3 土壤消毒

育苗前苗床用25％甲霜靈可濕性粉劑消毒，茄苗移栽前大棚畦面用25％甲霜靈可濕性粉劑800倍液噴施或用75％百菌清600倍液消毒，均可達(dá)到一定的滅菌效果。

3.4 加強(qiáng)大棚管理

①科學(xué)施肥 移栽前土壤施足充分滅菌的廄肥，配施一定的磷鉀肥，深翻作成弓形高畦面。移植后施肥采用“控氮肥增磷、鉀肥”的方法，促進(jìn)植株健壯生長(zhǎng)。

②科學(xué)管理水 大棚內(nèi)水分管理，要做到既保證茄株生長(zhǎng)所需又使土壤不積水，保持土壤干濕交替，促進(jìn)根系生長(zhǎng)，提高抗病能力。

③及時(shí)通風(fēng)降濕 茄株開(kāi)花結(jié)果后要及時(shí)做好棚內(nèi)通風(fēng)降濕，降低病害發(fā)生。

④科學(xué)防蟲(chóng)治病 防蟲(chóng)治病要做到勤檢查早防治，把病蟲(chóng)害消滅在萌芽中。

篇9

[關(guān)鍵詞] 食用菌 高產(chǎn) 栽培技術(shù)

[中圖分類號(hào)] S646 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1003-1650 （2013）01-0114-01

食用菌生產(chǎn)的成敗、產(chǎn)量高低、質(zhì)量的優(yōu)劣，直接取決于生產(chǎn)制作過(guò)程中的每個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)。為提高食用菌成品率，降低成本，獲得較高質(zhì)量和產(chǎn)量的菇體，現(xiàn)將食用菌栽培技術(shù)總結(jié)如下。

一、培養(yǎng)料的選擇

培養(yǎng)料以樺木料的木屑為最好，配以棉子殼、黃豆桿、玉米心等，輔以麥麩皮、米糠，并添加微量元素。原材料新鮮、干燥、無(wú)霉?fàn)€變質(zhì)、結(jié)塊、蟲(chóng)蛀是成功的基礎(chǔ)。

二、培養(yǎng)料的配制

培養(yǎng)料的配制先按比例將所需原料（木屑、麥夫皮、石膏）干料充分混合拌均，添加的微量元素倒入水中化開(kāi)后加入料中，反復(fù)攪拌多次，使料干濕均勻，成團(tuán)料要打散開(kāi)。靈活掌握培養(yǎng)料的含水量，根據(jù)木屑質(zhì)地軟硬、粗細(xì)、含水量、空氣濕度的大小等配比的含水量予以相應(yīng)調(diào)整。培養(yǎng)料的含水量直接影響菌絲的正常生長(zhǎng)，含水量過(guò)低會(huì)嚴(yán)重影響出菇產(chǎn)量。

含水量過(guò)高會(huì)使下面菌絲體缺氧而停止吃料，造成原料的浪費(fèi)，同時(shí)還會(huì)導(dǎo)致雜菌污染。一般含水量達(dá)55～60%即可。

三、培養(yǎng)料的消毒

配制好的培養(yǎng)料最好在6～8h內(nèi)裝袋完成。裝好的菌袋要及時(shí)進(jìn)行滅菌，切忌過(guò)夜。裝好的料放入滅菌鍋內(nèi)，盡快猛火升溫到100℃，打開(kāi)冷氣閥排放冷氣。待溫度降至0℃關(guān)閉冷氣閥，重新升溫到100℃后保持10～12h，否則達(dá)不到滅菌效果。滅菌時(shí)要做到猛火升溫、穩(wěn)火保溫，經(jīng)常檢查鍋中溫度，以防漏氣、跑氣。滅菌徹底是提高成品率、降低成本、提高效益的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

四、優(yōu)質(zhì)菌種的選擇及接種

選擇適宜本地生長(zhǎng)的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、高抗的優(yōu)良菌株，嚴(yán)禁使用有雜質(zhì)菌污染和蟲(chóng)害跡象以及退化、老化的劣質(zhì)菌種。嚴(yán)格接種程序，確保接種成功率。接種室要求干凈、干燥、密閉、遠(yuǎn)離污染源。滅菌好的菌袋及時(shí)放入接種室內(nèi)，進(jìn)行室內(nèi)藥物消毒，3～4h后待料溫冷卻至30℃以下即可接種。接種工具、接種人員的雙手要用75%酒精消毒。接種要迅速準(zhǔn)確，接種量不宜太小。

五、發(fā)菌培養(yǎng)

接種后的菌袋放入培養(yǎng)室內(nèi)，調(diào)控好環(huán)境溫度，培養(yǎng)室要求干凈、通氣、干燥，室溫宜控制在20～25℃左右，濕度70%左右（視品種而定）。當(dāng)菌絲長(zhǎng)到5～10cm左右即可翻袋檢查，及時(shí)淘汰污染袋。食用菌要靠基質(zhì)內(nèi)有機(jī)物的氧化來(lái)提供其生長(zhǎng)發(fā)育所需的能量，基質(zhì)內(nèi)缺氧會(huì)使菌絲體的呼吸作用受到抑制，造成菌絲體生長(zhǎng)緩慢、衰弱，甚至停止生長(zhǎng)，嚴(yán)重的會(huì)因窒息而死亡，因此翻動(dòng)菌袋位置以利于換氣通風(fēng)是必不可少的環(huán)節(jié)。當(dāng)菌絲長(zhǎng)到1/2時(shí)，再翻袋檢查1次。整個(gè)發(fā)菌培養(yǎng)階段不需要光照。

六、出菇棚場(chǎng)地的選擇及建立

出菇棚要選擇在近河流，空氣流暢，四周寬闊，遠(yuǎn)離禽畜養(yǎng)殖場(chǎng)、釀造廠、生活區(qū)、醫(yī)院、垃圾場(chǎng)的場(chǎng)地。場(chǎng)地要采取翻土、曬土、灌水等措施取代農(nóng)藥消毒。水源水質(zhì)要求選清潔的井水、自來(lái)水，遠(yuǎn)離污水源。菇棚要求棚體牢固、地勢(shì)較高、排水暢通，棚內(nèi)不積水，覆蓋塑料薄膜和遮陽(yáng)網(wǎng)，防日曬雨淋。覆蓋物要厚一點(diǎn)，利于保溫，四周用草簾圍住，留通風(fēng)孔。

七、出菇階段的管理

菌袋經(jīng)數(shù)月的營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)后，轉(zhuǎn)入生殖生長(zhǎng)，當(dāng)菌絲扭結(jié)、瘤狀突起，達(dá)到生理成熟時(shí)，就要搬出發(fā)菌室進(jìn)入出菇棚，由于受環(huán)境條件、栽培時(shí)間、發(fā)菌溫度、品種等不同因素的影響，出菇時(shí)間也不相同，氣溫要在適宜的生長(zhǎng)溫度范圍內(nèi)才能出菇。入棚時(shí)間一般選擇在晴天早晚進(jìn)行，中午溫度高不宜進(jìn)行入棚，高溫易使菌皮損傷，會(huì)推遲或減少出菇；切不可雨天入棚，雨淋會(huì)使菌袋表層污染而爛袋。菌袋上架每層并列排放，袋與袋之間間隔5～6cm，以利于呼吸和散熱，要營(yíng)造出菇的環(huán)境條件才能保證順利出菇。

首先是空氣濕度?？諝鉂穸仁亲訉?shí)體生長(zhǎng)發(fā)育階段主要的影響因素之一，空氣濕度過(guò)低，會(huì)加速子實(shí)體表面的水分蒸發(fā)，導(dǎo)致基質(zhì)內(nèi)水分的大量流失而影響產(chǎn)量；空氣濕度過(guò)高，會(huì)使子實(shí)體表面水分停止蒸發(fā)，使?fàn)I養(yǎng)運(yùn)輸受阻，同時(shí)呼吸作用受到抑制，造成子實(shí)體停止生長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)期空氣濕度過(guò)高，還會(huì)造成子實(shí)體從空氣中倒吸水分，形成水浸樣腐爛，招致線蟲(chóng)及細(xì)菌的滋生和大范圍傳染。

其次是通風(fēng)。子實(shí)體發(fā)育需要充足的氧氣，和人類的呼吸一樣，食用菌的呼吸作用也是消耗空氣中的氧氣，放出二氧化碳。適量的二氧化碳濃度對(duì)某些種類的菌絲體生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，但是過(guò)多二氧化碳的積累會(huì)抑制菌絲體生長(zhǎng)，甚至完全停止生長(zhǎng)，高濃度二氧化碳長(zhǎng)時(shí)間作用還會(huì)導(dǎo)致菌絲體窒息死亡。因此，需要經(jīng)常對(duì)菇房空間進(jìn)行通風(fēng)換氣，排除二氧化碳，保持空氣新鮮。

最后是光照。大部分食用菌品種的出菇階段需要散射光刺激，少部分品種需要有較強(qiáng)的散射光，才能使子實(shí)體原基分化，極少部分品種在完全黑暗的環(huán)境中也能形成子實(shí)體。子實(shí)體的顏色也與光線強(qiáng)度有密切關(guān)系，一般來(lái)說(shuō)，光線強(qiáng)，子實(shí)體顏色較深；光線弱，子實(shí)體顏色較淺。這就需要根據(jù)品種的不同采取不同的光線調(diào)控方法，可以通過(guò)掛遮陽(yáng)網(wǎng)和拉、放草簾來(lái)調(diào)節(jié)溫室內(nèi)的光照。

八、食用菌生產(chǎn)中的有害生物及其防治

1.木霉

木霉又稱為綠霉菌，廣泛分布于各種植物殘?bào)w、土壤和空氣中。木霉靠孢子傳播，常常借助氣流、水滴、昆蟲(chóng)、原料、工具及操作人員的手、衣服等為媒介，侵入培養(yǎng)基內(nèi)，一旦條件適宜就萌發(fā)繁殖為害。當(dāng)生產(chǎn)環(huán)境不清潔、培養(yǎng)料滅菌不徹底、接種操作不嚴(yán)格，且處于高溫高濕條件時(shí)，就給木霉侵染造成良好機(jī)會(huì)，尤其是多年的菌場(chǎng)和老菇房，常是木霉猖獗為害的場(chǎng)所。木霉適應(yīng)性強(qiáng)，繁殖速度快，能分泌毒素。木霉是香菇生產(chǎn)的大敵，它抑制香菇菌絲生長(zhǎng)。唯一控制的辦法是創(chuàng)造適合香菇菌絲生長(zhǎng)而不利于木霉繁殖的生態(tài)環(huán)境。一旦發(fā)生木霉為害，要立即通風(fēng)降低濕度，以抑制木霉菌的擴(kuò)展。處于發(fā)菌階段的培養(yǎng)料感病后，可采用pH值為10的石灰水或石灰粉進(jìn)行防治。

2.鏈孢霉

鏈孢霉生長(zhǎng)初期呈絨毛狀，白色或灰色，生長(zhǎng)后期呈粉紅色、黃色。大量分生孢子堆集成團(tuán)時(shí)，外觀與猴頭菌子實(shí)體相似。鏈孢霉菌絲頑強(qiáng)有力，有快速繁殖的特有機(jī)食用菌栽培技術(shù)性，一旦大發(fā)生便是滅頂之災(zāi)，其后果是菌種、培養(yǎng)袋或培養(yǎng)塊成批報(bào)廢。防治鏈孢霉，溫度控制在20℃以下，這樣鏈孢霉生長(zhǎng)緩慢，可減少污染。

3.毛霉

毛霉又叫黑霉或長(zhǎng)毛霉，菌絲初期白色，后灰白色至黑色，說(shuō)明孢子囊大量成熟。該菌在土壤、糞便、禾草及空氣中到處存在。在溫度較高、濕度較大、通風(fēng)不良的條件下發(fā)生率高。發(fā)生的主要原因是基質(zhì)中使用了霉變的原料，接種環(huán)境含毛霉孢子多，在悶濕環(huán)境中進(jìn)行菌絲培養(yǎng)等。防治辦法同木霉。

4.螨類

螨類包括紅蜘蛛、菌虱。其發(fā)生環(huán)境主要潛藏在廄肥、飼料和培養(yǎng)料內(nèi)。雞窩畜舍、谷物倉(cāng)庫(kù)或環(huán)境條件差、腐殖質(zhì)豐富的場(chǎng)所，往往也有大量的螨類存在。培養(yǎng)基發(fā)生螨害后，接種部位的菌種塊不萌發(fā)或萌發(fā)后菌絲外觀稀疏暗淡，并逐漸萎縮，嚴(yán)重時(shí)培養(yǎng)料中的菌絲被全部吃光，造成栽培失敗。

參考文獻(xiàn)

[1]成群.食用菌高產(chǎn)栽培技術(shù)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009，（20）.

篇10

一、從微生物學(xué)教學(xué)目的來(lái)分析課程改革的必要性

職業(yè)學(xué)校藥學(xué)類專業(yè)學(xué)習(xí)微生物這門課程，總體有這樣幾個(gè)目標(biāo)：1.藥品生產(chǎn)各環(huán)節(jié)的消毒滅菌處理工作。2.GMP車間在環(huán)境和工作人員方面對(duì)微生物的要求。3.環(huán)境中微生物的檢查工作。4.一般微生物的培養(yǎng)，接種技術(shù)。5.顯微鏡觀察微生物，微生物的染色技術(shù)。6.一般微生物的鑒別方法。7.對(duì)于生物制藥專業(yè)來(lái)說(shuō)，為下一步學(xué)習(xí)發(fā)酵技術(shù)等專業(yè)課打下基礎(chǔ)；對(duì)藥物分析專業(yè)學(xué)生來(lái)說(shuō)，為下一步學(xué)習(xí)藥品生物檢定技術(shù)打下基礎(chǔ)。

總結(jié)這些生產(chǎn)中的實(shí)際要求，我們得出結(jié)論：微生物學(xué)的教學(xué)應(yīng)該以實(shí)際操作技術(shù)為主要與重點(diǎn)內(nèi)容。因此筆者對(duì)微生物學(xué)進(jìn)行分析總結(jié)，將上課地點(diǎn)搬進(jìn)了實(shí)驗(yàn)室，將實(shí)驗(yàn)歸納總結(jié)為一個(gè)個(gè)的項(xiàng)目，把理論知識(shí)也附著在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目之中。

二、將各個(gè)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)籌安排的必要性

在實(shí)驗(yàn)的時(shí)間先后上，如果沒(méi)有統(tǒng)籌的安排，將會(huì)有很大的材料浪費(fèi)和人力的浪費(fèi)。因此，我們將所有的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)籌規(guī)劃，將前一個(gè)實(shí)驗(yàn)制備的產(chǎn)品用于下一個(gè)實(shí)驗(yàn)，這樣既有連貫性，同時(shí)還有很大的節(jié)省。

三、課程改革內(nèi)容

將整個(gè)教材分為以下幾個(gè)試驗(yàn)?zāi)K：1.培養(yǎng)基的制備與滅菌；2.微生物的接種與培養(yǎng)；3.微生物菌苔菌落的觀察；4.微生物的染色技術(shù)與顯微鏡的使用方法；5.細(xì)菌大小與數(shù)目的測(cè)定；6.微生物在自然界的分布；7.體外抑菌試驗(yàn)；8.抗生素的效價(jià)測(cè)定。

四、具體模塊分析

(一)培養(yǎng)基的制備與滅菌。本模塊任務(wù)：1.配置培養(yǎng)基（通過(guò)實(shí)驗(yàn)操作掌握固體、液體、半固體培養(yǎng)基配置方法，同時(shí)掌握微生物生長(zhǎng)必需的條件），2.將培養(yǎng)基進(jìn)行包扎滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法，干熱滅菌法原理及操作方法，同時(shí)掌握徹底滅菌（包括芽孢）的方法及意義）。通過(guò)這個(gè)模塊的學(xué)習(xí)，學(xué)生不僅掌握了基本的配制、分裝、包扎、滅菌技術(shù)，還為下面的所有實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備了試管裝的斜面培養(yǎng)基和三角瓶裝固體，液體培養(yǎng)基。

（二）微生物的接種與培養(yǎng)。本模塊任務(wù)：1.試管的斜面接種，2.培養(yǎng)皿的分離劃線培養(yǎng)，3.三角瓶的液體接種培養(yǎng)。通過(guò)這個(gè)模塊的學(xué)習(xí)操作，學(xué)生能夠掌握的操作技術(shù)：使用酒精燈的無(wú)菌操作技術(shù)，固體、液體培養(yǎng)基的接種技術(shù)，如何分離得到純種細(xì)菌的技術(shù)；學(xué)習(xí)到的理論知識(shí)：菌落及菌苔的含義，微生物的培養(yǎng)方法；同時(shí)為下一步的實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備了大量的微生物培養(yǎng)物。

（三）微生物菌苔菌落的觀察。本模塊任務(wù)：觀察各類微生物的菌落菌苔特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)直接取上次實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)的微生物培養(yǎng)物進(jìn)行觀察，從而概括得出細(xì)菌、放線菌、真菌三大類微生物菌落各自的特點(diǎn)作為鑒別的依據(jù)。

（四）微生物的染色技術(shù)及顯微鏡的使用方法。本模塊任務(wù)：1.將微生物進(jìn)行單染色、革蘭氏染色，2.光學(xué)顯微鏡觀察微生物形態(tài)。為了進(jìn)行這兩項(xiàng)操作，學(xué)生會(huì)主動(dòng)學(xué)習(xí)染色原理，顯微鏡操作原理，油鏡使用原理，然后進(jìn)行實(shí)際操作。本模塊使用模塊二的培養(yǎng)物來(lái)進(jìn)行染色觀察。

（五）細(xì)菌大小與數(shù)目的測(cè)定。本模塊任務(wù)：使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板和測(cè)微尺進(jìn)行微生物數(shù)目和大小的測(cè)定。

（六）微生物在自然界的分布。本模塊任務(wù)：檢測(cè)微生物在土壤、水、空氣、人體表面的分布情況。本實(shí)驗(yàn)使用模塊――配制的固體培養(yǎng)基倒平板進(jìn)行檢測(cè)。

（七）體外抑菌實(shí)驗(yàn)。本模塊任務(wù)：使用瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行檢測(cè)幾種化學(xué)消毒劑的抑菌實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)使用模塊――實(shí)驗(yàn)中配制的培養(yǎng)基。

（八）抗生素的效價(jià)測(cè)定：本模塊的任務(wù)：使用二劑量法測(cè)定一種抗生素的效價(jià)。本實(shí)驗(yàn)使用模塊――實(shí)驗(yàn)中配制的培養(yǎng)基。

五、考試考核方法

根據(jù)教學(xué)過(guò)程的模塊化改革，考試考核方式也隨之進(jìn)行改革，由原來(lái)傳統(tǒng)的一張理論試卷定分?jǐn)?shù)的方式，改為以實(shí)驗(yàn)為主要考核方式。將模塊的結(jié)果進(jìn)行考評(píng)打分，在最終成績(jī)中占重要比例，然后學(xué)習(xí)結(jié)束時(shí)的考核分兩部分，一是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)現(xiàn)場(chǎng)操作考核：從八個(gè)教學(xué)模塊中選取一些重要的操作技術(shù)，比如染色技術(shù)、滅菌鍋的使用技術(shù)、培養(yǎng)基配制方法等等，學(xué)生抽題，抽到后現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行操作考核；二是抽取兩個(gè)理論題進(jìn)行回答。實(shí)踐證明，這種考核方式更與實(shí)踐相接近，更具有實(shí)際意義。

六、總結(jié)

實(shí)踐證明，以項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)為主體，理論輔助在其中，學(xué)生能夠很好地掌握實(shí)踐技術(shù)操作，能夠較好地適應(yīng)職業(yè)教育的要求，而且能夠?qū)蝹€(gè)獨(dú)立的項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)聯(lián)系起來(lái)，不僅教學(xué)效果好，還節(jié)約了很多實(shí)驗(yàn)材料。

參考文獻(xiàn)：