導(dǎo)語(yǔ)：如何才能寫(xiě)好一篇老頑童爺爺，這就需要搜集整理更多的資料和文獻(xiàn)，歡迎閱讀由公務(wù)員之家整理的十篇范文，供你借鑒。

篇1

爺爺是個(gè)老頑童，長(zhǎng)得又高又大，看上去像個(gè)“粗人”，但是做起事來(lái)卻是細(xì)致入微，有一丁點(diǎn)兒的差錯(cuò)都不行。在我的心目中爺爺是那么可親、可敬而又可愛(ài)。

記得去年國(guó)慶長(zhǎng)假，我和爺爺、奶奶去旅游?；貋?lái)的路上，我突然得了感冒，上吐下瀉，當(dāng)時(shí)吐得渾身盡是贓物。爺爺趕忙拿出衛(wèi)生紙和衣服，小心翼翼的幫我把嘔吐的贓物一點(diǎn)一點(diǎn)地擦掉，然后又給我換上干凈的衣服，拿來(lái)水讓我一遍一遍的漱口，嘴里還不停地說(shuō)：“小乖乖，別著急，一會(huì)兒就好！”緊接著讓我躺在他的腿上，輕輕地拍著我讓我靜靜地入睡。一路上，爺爺總是用他的大手握著我熱乎乎的小手。對(duì)我真是百般的呵護(hù)！回到家中，爺爺?shù)睦贤炔∮址噶耍_上還磨起了大血泡，他渾然不顧，拿起體溫表就給我量體溫，爺爺這樣無(wú)微不至的關(guān)懷，我不止一次的熱淚盈眶！

爺爺平時(shí)很幽默，很滑稽，也很天真，奶奶總管他叫老頑童。我也覺(jué)得爺爺這個(gè)雅號(hào)是再合適不過(guò)了。

記得有一次，我和爺爺一起看電視，正好是上演《西游記》。爺爺見(jiàn)屏幕上出現(xiàn)了孫悟空就從沙發(fā)上跳起來(lái)，抄起拖把桿，一邊揮舞，一邊大喊：“看俺老孫來(lái)也……”我和奶奶笑得前仰后合，我仔細(xì)一看奶奶的眼淚都笑出來(lái)了。

篇2

我的爺爺今年七十多歲，中等個(gè)子，白白的頭發(fā)，最有特色的是他那又肥又大的鼻子和他那雙細(xì)長(zhǎng)的眼睛。爺爺待人和善，常和我們說(shuō)笑，因此，我們幾個(gè)孫子和他在一起就像朋友一樣隨便，光這一點(diǎn)我就很喜歡他了。

爺爺吃飯?zhí)貏e慢。餐桌上，我們都吃完半碗了，爺爺?shù)娘堖€沒(méi)動(dòng)，我催他時(shí)，他卻悠閑地喝著酒，故意瞇著眼睛向我做鬼臉，并對(duì)一旁的奶奶努努嘴，意思是別讓奶奶知道。一杯酒喝完了，他對(duì)奶奶嚷道：“我的杯子里怎么沒(méi)酒呀？快給我倒一杯吧！”奶奶不滿意爺爺光喝酒，不吃飯，于是不但沒(méi)給他倒酒，反而給他換了一碗熱飯。這時(shí)的爺爺像小孩似的嘟著嘴，不說(shuō)話，嘴上可以掛一個(gè)油瓶了！我呢，則在一旁擠眉弄眼，笑話怕奶奶的爺爺。

平日里，如果我和哥哥們有什么好吃的，爺爺見(jiàn)了，總會(huì)故意擺出一副可憐兮兮的模樣，張著嘴伸出手討好地說(shuō)：“給我嘗嘗吧？”有時(shí)我們故意逗爺爺，他就會(huì)纏著我們，我們走到哪兒，他就跟到哪兒，不分給他一點(diǎn)，他決不“撤兵”。給他了，他卻舍不得吃，總會(huì)想辦法加倍補(bǔ)償給我們。

篇3

內(nèi)容摘要:競(jìng)業(yè)禁止作為保護(hù)用人單位商業(yè)秘密的重要手段為越來(lái)越多的用人單位所采用。但這一制度在保護(hù)用人單位利益的同時(shí),也在一定程度上限制了勞動(dòng)者的擇業(yè)自由權(quán)乃至生存權(quán)?！吨腥A人民共和國(guó)勞動(dòng)合同法》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《勞動(dòng)合同法》)于2008年1月1日實(shí)施,該法首次在法律中規(guī)定了競(jìng)業(yè)禁止的內(nèi)容,但這些條款過(guò)于原則,不能滿足實(shí)際的需要,由此產(chǎn)生了大量糾紛?；诖?本文探討了競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)主體的規(guī)定,以及經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償問(wèn)題,以期更全面、細(xì)致的構(gòu)建競(jìng)業(yè)禁止制度,從而既保護(hù)用人單位的利益,也保護(hù)勞動(dòng)者的合法權(quán)益。

關(guān)鍵詞:勞動(dòng)合同法 競(jìng)業(yè)禁止 主體 經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償 期限

競(jìng)業(yè)禁止又稱(chēng)為競(jìng)業(yè)限制和競(jìng)業(yè)避止,最早規(guī)定在民法的人制度中,作為一種法律制度,旨在用法律防止人對(duì)被人利益的侵害。競(jìng)業(yè)禁止從概念上可分為廣義的競(jìng)業(yè)禁止和狹義的競(jìng)業(yè)禁止。廣義的競(jìng)業(yè)禁止是指對(duì)特定的營(yíng)業(yè)具有競(jìng)爭(zhēng)性之特定行為加以禁止,而狹義的競(jìng)業(yè)禁止,則僅指對(duì)于特定營(yíng)業(yè)具有特定關(guān)系的特定人之特定行為加以禁止(劉清波,1996)。我國(guó)對(duì)競(jìng)業(yè)禁止的規(guī)定主要散見(jiàn)于《中華人民共和國(guó)公司法》(以下簡(jiǎn)稱(chēng)《公司法》)、《中華人民共和國(guó)合伙企業(yè)法》、《中華人民共和國(guó)個(gè)人獨(dú)資企業(yè)法》、《勞動(dòng)合同法》、部門(mén)規(guī)章、地方性法規(guī)及地方政府規(guī)章中。從我國(guó)現(xiàn)行立法上看,競(jìng)業(yè)禁止按其效力來(lái)源可分為兩類(lèi):一是法定競(jìng)業(yè)禁止,其義務(wù)的產(chǎn)生是由法律明確規(guī)定的,其適用主體主要是董事、高級(jí)管理人員以及合伙企業(yè)的合伙人,其與公司或合伙企業(yè)之間建立的本質(zhì)仍是一種勞動(dòng)法律關(guān)系。二是約定的競(jìng)業(yè)禁止,是通過(guò)勞動(dòng)者與用人單位之間簽訂的競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議來(lái)實(shí)現(xiàn)的。由此可以認(rèn)為競(jìng)業(yè)禁止制度主要存在于勞動(dòng)法律關(guān)系中,是調(diào)整用人單位與勞動(dòng)者之間利益關(guān)系的產(chǎn)物(黎建飛、丁廣宇,2006)。競(jìng)業(yè)禁止一方面可以遏制無(wú)序競(jìng)爭(zhēng),保護(hù)雇主的商業(yè)秘密,另一方面也限制了勞動(dòng)者的自由擇業(yè)權(quán),甚至影響其生存權(quán)。

《勞動(dòng)合同法》中競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)主體的規(guī)定

《勞動(dòng)合同法》和《公司法》分別對(duì)競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)主體作了規(guī)定?！秳趧?dòng)合同法》第24條規(guī)定;“競(jìng)業(yè)限制人員限于用人單位的高級(jí)管理人員、高級(jí)技術(shù)人員和其他負(fù)有保密義務(wù)的人員”?！豆痉ā返?49條(五)規(guī)定:“董事、高級(jí)管理人員未經(jīng)股東會(huì)或者股東大會(huì)同意,不得自營(yíng)或?yàn)樗私?jīng)營(yíng)與所任職公司同類(lèi)業(yè)務(wù)”。這里需要指出,“董事、高級(jí)管理人員”根據(jù)《公司法》第217條(一)的規(guī)定,是指公司的經(jīng)理、副經(jīng)理、財(cái)務(wù)負(fù)責(zé)人,上市公司董事會(huì)秘書(shū)和公司章程規(guī)定的其他人員。就競(jìng)業(yè)禁止的人員限制來(lái)看,《勞動(dòng)合同法》中規(guī)定的競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)主體較《公司法》中的競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)主體的范圍廣,加上了“其他負(fù)有保密義務(wù)的人員”。也就是說(shuō),用人單位除了可與本單位的“高級(jí)管理人員”“高級(jí)技術(shù)人員”簽訂競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議外,還可以與“其他負(fù)有保密義務(wù)的人員”簽訂競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議,而《勞動(dòng)合同法》并未對(duì)“其他負(fù)有保密義務(wù)的人員”作出界定,這樣在實(shí)踐中容易導(dǎo)致競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議的“濫用”。

以競(jìng)業(yè)禁止的方式保護(hù)商業(yè)秘密應(yīng)當(dāng)以了解、掌握商業(yè)秘密為前提條件,一些企業(yè)不論員工從事何種崗位、也不管員工是何種文化程度以及是否接觸到商業(yè)秘密,都一律簽訂競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議。更有甚者許多企業(yè)的競(jìng)業(yè)限制協(xié)議都是以“合同范本”形式出現(xiàn),企業(yè)上至老總下至普通員工全都簽訂同一模式的合同。由于競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議與一般的民事合同存在著實(shí)質(zhì)的不同,普通員工與用人單位在簽訂競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議時(shí)處于弱勢(shì)地位,“訂立的合同很少是協(xié)商一致的產(chǎn)物,而是由對(duì)方一手操縱的”(姚輝,1999)。競(jìng)業(yè)禁止在客觀上限制了勞動(dòng)者的擇業(yè)權(quán),使勞動(dòng)者不能在自己擅長(zhǎng)的行業(yè)工作,進(jìn)而影響了勞動(dòng)者的生存權(quán)。盡管用人單位為此支付了一定的對(duì)價(jià),但該對(duì)價(jià)并不能完全彌補(bǔ)勞動(dòng)者因競(jìng)業(yè)限制而遭受的損失,因此,《勞動(dòng)合同法》應(yīng)明確規(guī)定競(jìng)業(yè)限制的義務(wù)主體應(yīng)是高層管理人員、高級(jí)技術(shù)人員以及可能接觸到商業(yè)秘密的人員,從而避免競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議被“濫用”。保守用人單位的商業(yè)秘密是每一個(gè)員工基于誠(chéng)信原則而應(yīng)承擔(dān)的義務(wù),對(duì)于雖在用人單位工作,但不掌握商業(yè)秘密的勞動(dòng)者,即使其利用自身的知識(shí)為新的用人單位工作,增強(qiáng)了新用人單位在市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力,也不應(yīng)將其列入競(jìng)業(yè)禁止的義務(wù)主體。

在國(guó)外,承擔(dān)競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)的主體一般限于由于業(yè)務(wù)關(guān)系或者其他關(guān)系有機(jī)會(huì)接觸商業(yè)秘密的人員,否則競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議無(wú)效。如瑞士《債務(wù)法》第340條規(guī)定:競(jìng)業(yè)禁止僅對(duì)于勞務(wù)關(guān)系中知悉雇傭人之客戶圈、技術(shù)秘密或交易秘密之受雇人,有拘束力。

《勞動(dòng)合同法》中競(jìng)業(yè)禁止的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償問(wèn)題

《勞動(dòng)合同法》第23條規(guī)定“用人單位與勞動(dòng)者可以在勞動(dòng)合同中約定保守用人單位的商業(yè)秘密和與知識(shí)產(chǎn)權(quán)相關(guān)的保密事項(xiàng)。對(duì)負(fù)有保密義務(wù)的勞動(dòng)者,用人單位可以在勞動(dòng)合同或者保密協(xié)議中與勞動(dòng)者約定競(jìng)業(yè)限制條款,并約定在解除或者終止勞動(dòng)合同后,在競(jìng)業(yè)限制期限內(nèi)按月給予勞動(dòng)者經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償。勞動(dòng)者違反競(jìng)業(yè)限制約定的,應(yīng)當(dāng)按照約定向用人單位支付違約金?！睆脑摋l內(nèi)容看,這導(dǎo)致實(shí)踐中勞動(dòng)者的權(quán)益得不到保護(hù),司法機(jī)關(guān)面對(duì)由此而發(fā)生的勞動(dòng)爭(zhēng)議沒(méi)有法律依據(jù),導(dǎo)致不同地區(qū)對(duì)相同的爭(zhēng)議采取不同的判決,加大了執(zhí)法的難度。

(一)用人單位未支付競(jìng)業(yè)禁止經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償競(jìng)業(yè)限制是否有效

根據(jù)《勞動(dòng)合同法》第23條的規(guī)定,用人單位可以與勞動(dòng)者在勞動(dòng)合同或者保密協(xié)議中約定競(jìng)業(yè)禁止條款,并約定在解除或者終止勞動(dòng)合同后,在競(jìng)業(yè)禁止期限內(nèi)按月給予勞動(dòng)者經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償。但是,該條款既沒(méi)有對(duì)用人單位給予經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金的數(shù)額作出規(guī)定,也沒(méi)規(guī)定如只有競(jìng)業(yè)禁止條款而沒(méi)有約定給予勞動(dòng)者經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金或約定了經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償?shù)珱](méi)有按月支付給勞動(dòng)者,競(jìng)業(yè)禁止條款是否有效?實(shí)踐中有兩種觀點(diǎn):其一,補(bǔ)償金是競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議生效的必要條件。該觀點(diǎn)認(rèn)為支付補(bǔ)償金是單位限制勞動(dòng)者就業(yè)權(quán)的對(duì)價(jià),也是競(jìng)業(yè)禁止合同生效的要件(徐芳寧,2006)。其二,認(rèn)為補(bǔ)償金并非是競(jìng)業(yè)禁止條款有效性的必要條件,未按約定支付經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金只能導(dǎo)致用人單位的違約,勞動(dòng)者可請(qǐng)求原用人單位支付競(jìng)業(yè)限制的補(bǔ)償金(張心全,2007)。由于《勞動(dòng)合同法》沒(méi)有對(duì)此明確的規(guī)定,導(dǎo)致各地在司法實(shí)踐中執(zhí)法不一,如上海地區(qū)在司法實(shí)踐中根據(jù)本地規(guī)章《上海市勞動(dòng)合同條例》若干問(wèn)題的通知(二),對(duì)于用人單位未支付離職后的競(jìng)業(yè)限制補(bǔ)償金的,只要雇傭雙方的競(jìng)業(yè)限制約定是雙方真實(shí)意思表示,且不違反法律、行政法規(guī)定的強(qiáng)制規(guī)定,符合一般合同的生效條件即認(rèn)定競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議生效。至于用人單位不按約定支付經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償,則只能將其歸入違約行為,不能構(gòu)成對(duì)競(jìng)業(yè)限制條款效力的否定因素。在用人單位違約的情形下,勞動(dòng)者可以利用仲裁、訴訟等途徑保護(hù)自己的權(quán)益,請(qǐng)求用人單位支付經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金。沒(méi)有法律層面的統(tǒng)一規(guī)定,造成不同地區(qū)相同案件不同的判決,導(dǎo)致執(zhí)法的混亂。因此,《勞動(dòng)合同法》應(yīng)對(duì)此問(wèn)題作出明確規(guī)定。

筆者認(rèn)為《勞動(dòng)合同法》應(yīng)采用第一種觀點(diǎn)。因?yàn)橛萌藛挝慌c勞動(dòng)者在實(shí)力對(duì)比上,用人單位是強(qiáng)勢(shì),勞動(dòng)者是弱勢(shì),如果用人單位與勞動(dòng)者簽訂了競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議,又沒(méi)按法律規(guī)定和協(xié)議約定給予勞動(dòng)者競(jìng)業(yè)限制補(bǔ)償金,如認(rèn)定競(jìng)業(yè)禁止有效,勞動(dòng)者的擇業(yè)權(quán)在競(jìng)業(yè)禁止期限內(nèi)受到限制,否則要承擔(dān)違約責(zé)任,用人單位又不給經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償,勞動(dòng)者通過(guò)仲裁和訴訟索要經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償費(fèi)時(shí)費(fèi)力,造成生活困難,不利于對(duì)弱勢(shì)群體的保護(hù),也有悖于《勞動(dòng)合同法》的社會(huì)法屬性。這點(diǎn)可以借鑒德國(guó)的《商法》關(guān)于競(jìng)業(yè)禁止的規(guī)定:雇主與受雇人之間必須有書(shū)面協(xié)議,雇主須負(fù)補(bǔ)償義務(wù),否則該項(xiàng)競(jìng)業(yè)禁止條款無(wú)效。

(二)《勞動(dòng)合同法》應(yīng)明確競(jìng)業(yè)禁止經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償?shù)拙€

2006年3月20日公布的《勞動(dòng)合同法》(草案)征求意見(jiàn)稿第16條規(guī)定:用人單位在勞動(dòng)合同終止或者解除時(shí),應(yīng)向勞動(dòng)者支付數(shù)額不少于勞動(dòng)者在該用人單位年工資收入的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償。但在2008年1月1日開(kāi)始實(shí)施的《勞動(dòng)合同法》將此條刪掉,立法者可能出于兩種考慮,其一,強(qiáng)制規(guī)定補(bǔ)償金的數(shù)額有悖于該法第3條“訂立勞動(dòng)合同,應(yīng)當(dāng)遵循合法、公平、平等自愿、協(xié)商一致、誠(chéng)實(shí)信用的原則”。其二,是來(lái)自用人單位反對(duì)的呼聲過(guò)于強(qiáng)烈。但是,去掉了補(bǔ)償金數(shù)額的條款,導(dǎo)致現(xiàn)實(shí)生活中,用人單位在簽訂勞動(dòng)合同中處于優(yōu)勢(shì)地位,利用勞動(dòng)者迫切找到工作的心理,在競(jìng)業(yè)禁止條款上損害勞動(dòng)者的利益。例如李某是某公司的員工,在與用人單位簽訂勞動(dòng)合同時(shí)被要求簽訂競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議,其中約定李某在勞動(dòng)合同終止后2年內(nèi)不能到與本單位生產(chǎn)或經(jīng)營(yíng)同類(lèi)產(chǎn)品、從事同類(lèi)業(yè)務(wù)的有競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系的其他用人單位工作,或者自己開(kāi)業(yè)生產(chǎn)或者經(jīng)營(yíng)同類(lèi)產(chǎn)品、從事同類(lèi)業(yè)務(wù)。并約定競(jìng)業(yè)限制的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償每月200元,勞動(dòng)合同終止后的兩年內(nèi)勞動(dòng)者需每月在用人單位發(fā)工資日去用人單位領(lǐng)取。這樣的條款對(duì)勞動(dòng)者不公平,因?yàn)閯趧?dòng)者不能發(fā)揮自己的特長(zhǎng),喪失了擇業(yè)自由權(quán),影響了其經(jīng)濟(jì)收入,而區(qū)區(qū)200元根本就不足以補(bǔ)償其因競(jìng)業(yè)禁止而遭受的經(jīng)濟(jì)損失。

為了保護(hù)勞動(dòng)者的利益,《勞動(dòng)合同法》應(yīng)當(dāng)對(duì)競(jìng)業(yè)禁止經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償金的底線作出規(guī)定。因?yàn)椤秳趧?dòng)合同法》屬于社會(huì)法,兼有公法和私法的屬性,對(duì)勞動(dòng)者的傾斜保護(hù),體現(xiàn)了《勞動(dòng)合同法》的社會(huì)法屬性。勞動(dòng)合同也不同于一般的民商事合同,雖然勞動(dòng)關(guān)系的當(dāng)事人即用人單位與勞動(dòng)者之間是平等主體的勞動(dòng)合同關(guān)系,兩者具有平等的法律人格,但這種平等是相對(duì)的。從總體上看,勞動(dòng)者和用人單位在經(jīng)濟(jì)利益上不對(duì)等,這種不對(duì)等導(dǎo)致勞動(dòng)者在簽訂勞動(dòng)合同時(shí)不可避免的接受一些損害勞動(dòng)者利益的條款。因此,《勞動(dòng)合同法》應(yīng)該對(duì)競(jìng)業(yè)禁止經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償作出一個(gè)最低限額的規(guī)定,以保護(hù)在勞動(dòng)關(guān)系中處于弱勢(shì)一方勞動(dòng)者的權(quán)益。這點(diǎn)可以借鑒德國(guó)商法第74條:離職后競(jìng)業(yè)限制期間,原企業(yè)或雇主應(yīng)支付補(bǔ)償金,競(jìng)業(yè)限制期間每一年之補(bǔ)償金,其數(shù)額不得低于勞工離職時(shí)與勞動(dòng)合同所能取得報(bào)酬的一半,當(dāng)事人就每一年競(jìng)業(yè)限制期間所約定數(shù)額低于5184馬克者,其離職競(jìng)業(yè)限制協(xié)議無(wú)效。因此我國(guó)《勞動(dòng)合同法》也應(yīng)結(jié)合我國(guó)國(guó)情,對(duì)離職后競(jìng)業(yè)限制的經(jīng)濟(jì)補(bǔ)償?shù)拙€作出規(guī)定以保護(hù)勞動(dòng)者的利益。同時(shí),這樣的規(guī)定在現(xiàn)實(shí)中還能起到遏制競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議使用的作用。不鼓勵(lì)企業(yè)大量使用競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議,應(yīng)成為《勞動(dòng)合同法》關(guān)于競(jìng)業(yè)禁止規(guī)定立法的主導(dǎo)思想。

《勞動(dòng)合同法》對(duì)競(jìng)業(yè)禁止期限應(yīng)分檔規(guī)定

《勞動(dòng)合同法》第24條(二)規(guī)定:“在解除或者終止勞動(dòng)合同后,前款規(guī)定的人員到與本單位生產(chǎn)或者經(jīng)營(yíng)同類(lèi)產(chǎn)品、從事同類(lèi)業(yè)務(wù)的有競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系的其他用人單位,或者自己開(kāi)業(yè)生產(chǎn)或者經(jīng)營(yíng)同類(lèi)產(chǎn)品、從事同類(lèi)業(yè)務(wù)的競(jìng)業(yè)限制期限,不得超過(guò)二年”?！秳趧?dòng)合同法》對(duì)競(jìng)業(yè)禁止期限規(guī)定了上限,也就是用人單位與勞動(dòng)者約定競(jìng)業(yè)禁止的期限自勞動(dòng)者離職后最長(zhǎng)二年的時(shí)間。該法對(duì)不同行業(yè)競(jìng)業(yè)禁止的期限統(tǒng)一規(guī)定了上限,這樣的規(guī)定難以滿足實(shí)際需要。由于各個(gè)行業(yè)不同,競(jìng)業(yè)限制不應(yīng)有一刀切的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。有的企業(yè)研發(fā)一項(xiàng)新技術(shù)或新產(chǎn)品需要投入大量的人力和物力,兩年的時(shí)間可能還沒(méi)完全投入市場(chǎng),也還沒(méi)有獲得可觀的收益,但是當(dāng)初參與研發(fā)的員工離職后兩年就不受競(jìng)業(yè)限制的約束,這無(wú)疑加大了原企業(yè)投資的風(fēng)險(xiǎn),對(duì)原企業(yè)不公平,從而也挫傷了企業(yè)研發(fā)新技術(shù)和新產(chǎn)品的積極性,最終不利于經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和社會(huì)的進(jìn)步。

意大利《民法典》第2125條規(guī)定,經(jīng)理級(jí)人員離職后競(jìng)業(yè)禁止協(xié)議的時(shí)間限制為5年,其他人員的限制不得超過(guò)3年;在約定期限超過(guò)上述限制規(guī)定的情況下,應(yīng)當(dāng)相應(yīng)的削減。結(jié)合我國(guó)國(guó)情,筆者認(rèn)為競(jìng)業(yè)限制的期限長(zhǎng)短,應(yīng)依據(jù)商業(yè)秘密在市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)中具有的競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)持續(xù)的時(shí)間長(zhǎng)短來(lái)決定,而不應(yīng)規(guī)定統(tǒng)一的上限?！秳趧?dòng)合同法》可以借鑒國(guó)外的立法,結(jié)合我國(guó)國(guó)情對(duì)競(jìng)業(yè)禁止期限分檔作出規(guī)定。對(duì)高新技術(shù)的商業(yè)秘密競(jìng)業(yè)禁止期限的上限規(guī)定為1年,對(duì)于一般的商業(yè)秘密維持現(xiàn)在的上限規(guī)定2年,而對(duì)于像掌握可口可樂(lè)秘方的員工競(jìng)業(yè)禁止的期限應(yīng)無(wú)上限規(guī)定。

參考文獻(xiàn):

1.黎建飛,丁廣宇.競(jìng)業(yè)禁止義務(wù)規(guī)范研究[J].法學(xué)雜志,2006(4)

篇4

通訊作者：胡權(quán)

【摘要】 目的 探討麝香保心丸與銀杏葉片治療老年冠心病心絞痛的療效。方法 將120例老年冠心病心絞痛患者隨機(jī)分為兩組,麝香保心丸組60例,銀杏葉片組60例。結(jié)果 兩藥均可改善冠心病心絞痛癥狀，總有效率分別為91.7%和90.0%，無(wú)明顯差異；血脂降低總有效率分別為88.3%和91.7%，兩組亦無(wú)顯著差異。結(jié)論 兩藥治療老年冠心病心絞痛療效相當(dāng)。

【關(guān)鍵詞】 麝香保心丸； 銀杏葉片； 老年冠心??； 心絞痛

冠心病心絞痛是由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起管腔狹窄或由于冠狀動(dòng)脈痙攣導(dǎo)致心肌供血不足所致，臨床表現(xiàn)為發(fā)作性胸骨后或心前區(qū)疼痛，好發(fā)于中老年人，易發(fā)展為急性心肌梗死或猝死。因此，對(duì)老年冠心病心絞痛的防治要予以高度重視。麝香保心丸和銀杏葉片是目前治療冠心病心絞痛常用中成藥物，為比較兩種藥物的確切療效，筆者選擇了120例老年冠心病心絞痛患者，隨機(jī)分為兩組，進(jìn)行臨床療效對(duì)比，現(xiàn)將觀察結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 120例冠心病心絞痛老年患者均為筆者所在醫(yī)院2007年1月～2009年5月住院或門(mén)診患者。所有病例均參照WHO制定的“缺血性心臟病的命名和診斷標(biāo)準(zhǔn)”。麝香保心丸治療組與銀杏葉片治療組各為60例。麝香保心丸治療組中男38例，女22例，年齡60.5～85.7歲，平均64.8歲，病程0.3～13年，平均4.1年；銀杏葉片治療組中男36例，女24例，年齡61～84.6歲，平均71.2歲，病程0.2～16年，平均3.9年。兩組病例資料無(wú)明顯差異（P＞0.05），具有可比性。

1.2 治療方法 兩組在治療前均進(jìn)行心電圖、動(dòng)態(tài)心電圖、血糖、血脂及肝腎功能檢測(cè)，排除急性心肌梗死、重度神經(jīng)官能癥、更年期綜合征、心功能不全及休克等原因所致心電圖缺血性改變。

麝香保心丸治療組予麝香保心丸（上海和黃藥業(yè)），每次2片，每日3次，4周為一療程。銀杏葉片治療組予銀杏葉片（江蘇揚(yáng)子江藥業(yè)），每次2片，每日3次，4周為一療程。

1.3 觀察指標(biāo) 主要觀察心絞痛發(fā)作次數(shù)、疼痛持續(xù)時(shí)間、誘發(fā)因素、硝酸甘油的用量、藥物起效及持續(xù)時(shí)間、心電圖變化和血脂變化等。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn) 參照1979年全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合治療冠心病心絞痛及心律失常座談會(huì)《冠心病心絞痛及心電圖療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)》。顯效:癥狀消失或顯著減輕；有效:疼痛發(fā)作次數(shù)，程度及持續(xù)時(shí)間明顯減輕；無(wú)效:癥狀基本與治療前相同；加重:癥狀與治療前相比加重。心電圖：顯效:心電圖恢復(fù)正?；虼笾抡?；有效:ST段回升≥0.05 mv，但未達(dá)正常水平，T波改善，由平坦轉(zhuǎn)為直立；無(wú)效:治療前后的心電圖無(wú)明顯改善；加重：治療后ST段加深≥0.05 mv，T波倒置加深，由直立變平坦或倒置。血脂水平的觀察按1988年衛(wèi)生部調(diào)脂藥物標(biāo)準(zhǔn)制定療效。顯效：TC下降≥20%，TG下降≥40%；有效：TC下降≥10%～20%，TG下降≥20%；無(wú)效：未達(dá)到有效標(biāo)準(zhǔn)；加重：TC、TG較治療前升高。

2 結(jié)果

2.1 心絞痛療效 麝香保心丸治療組心絞痛療效總有效率為91.7%，銀杏葉片治療組總有效率為90%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表1。

2.2 心電圖療效 麝香保心丸治療組心電圖療效總有效率為73.3%，銀杏葉片治療組總有效率為70%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表2。

2.3 血脂療效 麝香保心丸治療組血脂療效總有效率為88.3%，銀杏葉片治療組總有效率為91.7%，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見(jiàn)表3。

表1 兩組心絞痛療效比較（n,%）

表2 兩組心電圖療效比較（n,%）

表3 兩組血脂療效比較（n,%）

3 討論

麝香保心丸由麝香、蘇合香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蟾酥、冰片等七味中藥組成，具有芳香溫通、益氣強(qiáng)心的功效?，F(xiàn)代中藥藥理學(xué)研究已證實(shí)，該藥能夠快速擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，保護(hù)缺血心肌，預(yù)防心室重構(gòu)［1］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸具有促進(jìn)治療性血管新生的作用，是第一個(gè)有治療性血管新生作用的中成藥。研究還發(fā)現(xiàn)，麝香保心丸不但有增強(qiáng)心肌收縮力，擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，改善心肌供血和心肌代謝作用，還具有降低血液黏稠度和改善異常血液流變學(xué)指標(biāo)等作用［2］。故在臨床上用于治療冠心病，尤其是心絞痛有顯著療效。

銀杏葉片主要成分為銀杏萜類(lèi)內(nèi)酯及黃酮醇苷類(lèi)，藥理研究證明，銀杏葉及有效成分有廣泛的藥理作用，用于治療冠心病時(shí)能有效擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)，改善心肌缺血，防治心肌缺血和再灌注損傷，能有效降低血脂，減少脂類(lèi)在血管壁的附著，對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化物而防治動(dòng)脈粥樣硬化［3］。近年來(lái)銀杏葉片在臨床廣泛用于冠心病心絞痛的防治。

本研究采用隨機(jī)雙盲對(duì)比法，對(duì)120例老年冠心病心絞痛患者分組治療，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明，兩組對(duì)心絞痛、心電圖及血脂的療效均無(wú)顯著差異（P＞0.05），證明兩藥治療冠心病的療效是相當(dāng)?shù)摹伤幘鶠橹兴幹苿?，盡管藥理作用機(jī)制有所不同，但對(duì)冠心病心絞痛的治療均是有效的。在臨床運(yùn)用中，兩藥均很少有不良反應(yīng)發(fā)生，且價(jià)格適中，服用方便，無(wú)耐藥性，患者依從性好，易于接受。因此，筆者認(rèn)為麝香保心丸和銀杏葉片均為治療老年冠心病心絞痛的理想藥物。但在治療冠心病急癥上，麝香保心丸可予舌下含服，起效快，優(yōu)于銀杏葉片。

參 考 文 獻(xiàn)

［1］ 王受益，戴瑞鴻，金椿，等.麝香保心丸治療冠心病心絞痛的臨床觀察.中國(guó)中西結(jié)合雜志,1996,16（12）:717-720.

［2］ 夏玲寧.麝香保心丸治療冠心病心絞痛45例臨床觀察.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2000,9:482-483.

篇5

正在這時(shí)，老頑童爺爺走了進(jìn)來(lái)，他認(rèn)真地問(wèn)小海歸：“聽(tīng)說(shuō)你們能聽(tīng)到千里之外的聲音，那你們能聽(tīng)到黑煞在說(shuō)些什么嗎？”

“能！”他們說(shuō)：“讓我們仔細(xì)地聽(tīng)一聽(tīng)，黑煞說(shuō)他們要用垃圾做成垃圾炸彈投向快樂(lè)星球，讓我們的星球變成垃圾世界！這樣一來(lái)宇宙就成了他的地盤(pán)了，他要統(tǒng)治宇宙！’”

“好，太好了，讓我們來(lái)啟動(dòng)一號(hào)防御系統(tǒng)，讓他們自己炸自己！自食其果?！崩项B童爺爺興奮地說(shuō)。

正在這時(shí)垃圾炸彈飛了過(guò)來(lái)，就在快要到達(dá)快樂(lè)星球千鈞一發(fā)的時(shí)候，老頑童爺爺啟動(dòng)了一號(hào)防御系統(tǒng)，棒棒用隱身儀指了炸彈一下，垃圾炸彈就一下子被隱身并返回了黑暗星球。

那么隱身儀是什么東西呢？

它是棒棒前不久發(fā)明的，只要是被它隱身的東西，哪怕用再高級(jí)的探測(cè)器搜索，也是無(wú)濟(jì)于事。

黑煞以為快樂(lè)星球已經(jīng)下起了垃圾雨，樂(lè)得手舞足蹈，高興得跳起舞來(lái)。正在這時(shí)垃圾雨下還是下了，可是地點(diǎn)卻是在黑暗星球上。黑煞火冒三丈，恨不得馬上就殺了老頑童，可他哪里知道是小海歸們的耳朵立了大功呢？

篇6

防火墻進(jìn)來(lái)時(shí)，電腦病毒越來(lái)越強(qiáng)烈，電腦已經(jīng)處于癱瘓狀態(tài)，防火墻也沒(méi)辦法，只好去叫老頑童爺爺來(lái)幫忙，他打電話給老頑童爺爺：“老頑童爺爺，電腦出現(xiàn)病毒啦！而且病毒很厲害，請(qǐng)您快來(lái)幫幫忙！”

“那好，我馬上就來(lái)。”說(shuō)著，老頑童爺爺就來(lái)到了防火墻實(shí)驗(yàn)室，一看病毒，是一種從未出現(xiàn)過(guò)的新型病毒，在仔細(xì)確認(rèn)后就知道是黑煞傳進(jìn)來(lái)的，說(shuō)著立刻命令艾克啟動(dòng)三號(hào)防御系統(tǒng)，把網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行病毒沖洗，使病毒在被消滅的同時(shí)對(duì)他的產(chǎn)生地—黑暗星球，進(jìn)行了病毒的反傳播。

果然不一會(huì)兒，在黑暗星球的總控制臺(tái)也出現(xiàn)了病毒 ，黑煞又被氣得半死，大叫：“你這個(gè)老頑童，竟敢拿我發(fā)給你的病毒進(jìn)行反傳播，好，等我統(tǒng)治了宇宙，我就要把你拋進(jìn)一號(hào)黑洞，哈哈哈哈，哈哈哈哈……”又對(duì)著他的手下大吼：“你們這群廢物，還不趕快殺毒?！?/p>

這時(shí)候，快樂(lè)星球上已經(jīng)恢復(fù)了平靜，又是一片歡聲笑語(yǔ)了，真不愧是快樂(lè)星球呀。

篇7

“防火墻，你來(lái)這里干什么？”五兄弟好奇地問(wèn)。防火墻說(shuō)：“老頑童爺爺用能源探測(cè)器探測(cè)到火星有很多的能源，要你們?nèi)ヒ惶嘶鹦?，找到能源。?/p>

“是，長(zhǎng)官！”五弟調(diào)皮地說(shuō)。

“我餓！”大哥說(shuō)。

防火墻忍不住笑了出來(lái)，說(shuō)：“我們先回快樂(lè)星球吧！”說(shuō)著，駕駛著飛船，帶著大家回到了快樂(lè)星球。

老頑童爺爺見(jiàn)到他們平安歸來(lái)，高興極了，問(wèn)他們，“企鵝得救了嗎？”“Yes!Sir！”五弟一本正經(jīng)地舉起右手行了個(gè)禮?！疤昧?，來(lái)來(lái)來(lái)，爺爺請(qǐng)你們吃快樂(lè)星球大餐，怎么樣？”吃吃立刻口水直流三千尺，連聲叫：“太棒了！太棒了！”

老頑童爺爺帶著大家邊說(shuō)邊笑的來(lái)到了快樂(lè)星球旋轉(zhuǎn)餐廳，他們點(diǎn)了滿滿一桌子的菜，有吃吃愛(ài)吃的紅燒蹄膀，有玩玩愛(ài)吃的油燜大蝦，有洗洗愛(ài)吃的炒三鮮，有打打愛(ài)吃的清蒸大黃魚(yú)，喝喝說(shuō)：“我要一大瓶可樂(lè)?！?/p>

看著大家吃得高興，老頑童爺爺也很高興，他說(shuō)：“大家一定要吃飽喝足。明天休息一天，后天出發(fā)去火星。好嗎？”

篇8

節(jié)儉樸素，人之美德。

——題記

在一個(gè)古樸的小鎮(zhèn)上，人們過(guò)著無(wú)憂無(wú)慮的日子，他們團(tuán)結(jié)合作，互相幫助，更可貴的是他們特別節(jié)儉，所以他們?cè)絹?lái)越富裕，越來(lái)越幸福。

這時(shí)候，有一個(gè)人的受不了了，他開(kāi)始策劃一次行動(dòng)。

鎮(zhèn)上小學(xué)放學(xué)了，放學(xué)后，三個(gè)小孩子在亭子里嬉戲，當(dāng)他們玩得正開(kāi)心的時(shí)候，突然“咕—咕”的聲音從他們的鞋子里傳出，喔！原來(lái)是那個(gè)最大的孩子的肚子在叫，他想：我的肚子一定是餓了吧！后來(lái)，他們?nèi)伺d高采烈地跑到一個(gè)小飯店吃了起來(lái)，店老板想借比機(jī)會(huì)害這三個(gè)小朋友，于是，他在菜里面下了一種藥，然后給他們吃，這三個(gè)小孩子見(jiàn)了這些美食，頓時(shí)胃口大開(kāi)。不一會(huì)兒，他們?nèi)齻€(gè)人受到了控制，開(kāi)始浪費(fèi)糧食，搞得小鎮(zhèn)上渾濁不堪，一片，有幾次，小鎮(zhèn)上還發(fā)生了火災(zāi)呢！經(jīng)過(guò)這些事，有的人忐忑不安，有的人趕緊帶著小孩和老人逃跑，還有的人天天在家里呆著，不敢出門(mén)！

店老板看到這些，高興得快笑破了肚皮，好像這里的人痛苦就是他的快樂(lè)。那么，這個(gè)可惡的店老板是誰(shuí)呢？為了捍衛(wèi)人們的勞動(dòng)果實(shí)，為了使人們的生活回到往日的寧?kù)o，鎮(zhèn)上的權(quán)威W博士開(kāi)始四處尋找資料——

W博士在老頑童爺爺那兒得知，店老板叫明樂(lè)，今年37歲，他是浪費(fèi)大王，原來(lái)的他熱心助人，天天都面帶微笑，可是，可惡的A博士把他變成了一個(gè)可惡的浪費(fèi)大王，這個(gè)壞蛋就是今天在這里的店老板。

W博士聽(tīng)了這些，立馬向老頑童爺爺說(shuō)再見(jiàn)。

W博士準(zhǔn)備上飛馬時(shí)，聽(tīng)到一種叫聲，這是，W博士把飛馬放在一個(gè)車(chē)庫(kù)里，然后，向那種聲音走了過(guò)去?！袄项B童—”W博士看了老頑童爺爺大叫，突然，浪費(fèi)大王把W博士也抓了起來(lái)，關(guān)進(jìn)了密室里，W博士小聲地對(duì)浪費(fèi)大王說(shuō)：“明樂(lè)，你如果再這樣下去，世界將會(huì)滅亡！”“對(duì)的，如果，如果再這樣，你不為別人想，也要為自己想啊！”老頑童爺爺也吆喝起來(lái)?！班А泵鳂?lè)慢慢地抬起頭來(lái)，這句話讓明樂(lè)像被電打了一般，讓明樂(lè)清醒了，明樂(lè)把老頑童爺爺、W博士、三個(gè)小孩子給放了，支支吾吾地對(duì)他們說(shuō)：“對(duì)——對(duì)不起！”他們幾個(gè)人聽(tīng)了，異口同聲地說(shuō)：“沒(méi)關(guān)系?！庇谑?，明樂(lè)請(qǐng)他們到他家享受美食呢！

六個(gè)人手挽手，高興地離開(kāi)了這人死氣沉沉的城堡，并且，讓大自然恢復(fù)了往日的美麗。

……

篇9

1引言

引起過(guò)敏的物質(zhì)稱(chēng)為過(guò)敏原，一般為蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)。隨著食物過(guò)敏患者的增多，以及可能導(dǎo)致過(guò)敏性休克甚至死亡等嚴(yán)重后果，已建立了一系列針對(duì)過(guò)敏原的法規(guī)及檢測(cè)方法，包括核酸法（PCR）和酶聯(lián)免疫法（ELISA）等。新興的質(zhì)譜法（MS）靈敏度高、假陽(yáng)性概率低，并具有方法開(kāi)發(fā)快速、運(yùn)行成本低等優(yōu)勢(shì)。

葡萄酒釀造過(guò)程中需要加入澄清劑去除沉淀物質(zhì)，使酒液獲得長(zhǎng)期穩(wěn)定性。酪蛋白是常用的澄清劑之一。酪蛋白是一種來(lái)源于牛乳的過(guò)敏原，殘留在葡萄酒中會(huì)對(duì)過(guò)敏人群產(chǎn)生危害。但是葡萄酒，特別是紅葡萄酒含有大量單寧等鞣質(zhì)，單寧與蛋白質(zhì)之間存在多點(diǎn)疏水鍵和氫鍵的作用，有很強(qiáng)的蛋白結(jié)合能力。單寧常用作酶抑制劑使酶失活。單寧極大地抑制了葡萄酒蛋白的提取與酶解，傳統(tǒng)蛋白提取方法（超濾、透析、有機(jī)溶劑沉淀等）用于葡萄酒時(shí)回收率只有20%-30%[1，2]。因此，關(guān)于葡萄酒過(guò)敏原質(zhì)譜分析的報(bào)道很少，研究對(duì)象也集中在單寧含量很低的白葡萄酒，對(duì)于含有大量單寧的紅葡萄酒的前處理和質(zhì)譜分析仍無(wú)成熟的策略[3，4]。已報(bào)道的方法如十二烷基硫酸鉀（KDS）法、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP）法等，提取后蛋白仍需要電泳去除單寧和兩性電解質(zhì)，工作量大，分析通量低，蛋白質(zhì)的回收率很低[5，6]。

交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮（PVPP）是PVP交聯(lián)后形成的顆粒（約110 μm），具有很強(qiáng)的吸附能力[7]。PVPP競(jìng)爭(zhēng)性地與單寧結(jié)合，釋放蛋白，可以有效去除單寧等多酚類(lèi)物質(zhì)[8，9]。本研究利用PVPP建立了快速、高效的紅葡萄酒蛋白提取與酶解方法，使前處理時(shí)間縮短到2 h之內(nèi)，回收率達(dá)到80%以上。將本方法與三重四極桿液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（LCMS/MS）結(jié)合，分析了紅酒中3種亞型的酪蛋白，檢出限達(dá)到10 μg/L，比目前報(bào)道的方法提高了至少一個(gè)數(shù)量級(jí)[3]。

2實(shí)驗(yàn)部分

2.1儀器與試劑

TSQ Vantage三重四極桿質(zhì)譜、Ultimate 3000超高效液相色譜（Thermo公司）。α酪蛋白（αCasein）、β酪蛋白（βCasein）、胰蛋白酶（Trypsin）、PVPP、NH4HCO3購(gòu)自SigmaAldrich公司；乙腈、甲酸購(gòu)自Fisher公司；紅葡萄酒商品若干。

2.2蛋白提取與酶解

樣品制備：取紅酒200 μL與酪蛋白混合溶液4 μL（α酪蛋白、β酪蛋白各5 μg/L）充分混勻后（添加量為100 μg/L時(shí)），加入200 μL PVPP混懸液（100 g/L，溶于0.5 mol/L NH4HCO3溶液），并于30 ℃振蕩反應(yīng)15 min。反應(yīng)后，直接加入2 μL Trypsin （200 μg/L），并于37 ℃振蕩酶解1.5 h。

酶解完成后，于20000 g離心5 min，取上清液。沉淀加入100 μL水，振蕩超聲2 min，再于20000 g下離心5 min，將溶液完全取出。兩次溶液合并后，再次20000 g離心，取上清液直接進(jìn)樣分析。

對(duì)照品制備：第一步不加酪蛋白，前處理完成后、進(jìn)樣前，再加入Trypsin酶解后的酪蛋白混合溶液4 μL（α酪蛋白、β酪蛋白各5 mg/L ，添加量為100 μg/L）， 混勻后直接進(jìn)樣分析。

2.3LCMS/MS分析

第10期張 偉等： 交聯(lián)聚乙烯基吡咯烷酮快速前處理方法結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析紅葡萄酒中酪蛋白過(guò)敏原

2.4數(shù)據(jù)處理

酪蛋白亞型序列來(lái)自SwissProt數(shù)據(jù)庫(kù)； 專(zhuān)一性肽段與特征性碎片選擇及碰撞能量?jī)?yōu)化由PinPoint軟件（Thermo）分析，結(jié)合LTQOrbitrap 高分辨質(zhì)譜（Thermo）全掃描確證獲得； 質(zhì)譜數(shù)據(jù)由Xcalibur Qual Browser軟件（Thermo）進(jìn)行定性分析，由Xcalibur Quan Browser軟件（Thermo）進(jìn)行定量分析。

3結(jié)果與討論

3.1酪蛋白LCMS/MS方法建立

酪蛋白有α和β兩種主要亞型，其中α包含S1和S2兩種亞型。由于αS1， αS2和β三者序列完全不同，并同時(shí)具有致敏性，因此同時(shí)針對(duì)這3種酪蛋白建立LCMS/MS分析方法。根據(jù)Pinpoint軟件分析，從3種酪蛋白中分別選擇兩條特征性肽段，每條特征性肽段分別選擇兩個(gè)子離子，即每種亞型對(duì)應(yīng)4對(duì)離子對(duì)，并獲得相應(yīng)的優(yōu)化碰撞能量（表1）。為了確定離子對(duì)選擇的準(zhǔn)確性，進(jìn)一步通過(guò)LTQOrbitrap高分辨質(zhì)譜對(duì)酪蛋白酶解產(chǎn)物進(jìn)行了數(shù)據(jù)依賴(lài)性掃描分析，驗(yàn)證了離子對(duì)選擇的合理性（圖1）。

Fig.2SRM total ion chromatogram and extracted ion chromatogram of casein unique peptides[HT5][TS）]

比PCR和ELISA檢測(cè)，LCMS/MS不僅能直接對(duì)目標(biāo)過(guò)敏原進(jìn)行鑒定，還可以同時(shí)分析不同亞型，方法的選擇性、準(zhǔn)確度、通量均有很大提高。

3.2紅葡萄酒快速前處理

利用PVPP實(shí)現(xiàn)了紅葡萄酒高效、快速前處理，并最大程度地降低了蛋白的損失。向紅酒中加入足量的PVPP競(jìng)爭(zhēng)性吸附單寧，再加入過(guò)量的Trypsin快速酶解蛋白，離心取上清液，并重復(fù)一次，合并兩次上清液后直接進(jìn)行質(zhì)譜分析（圖3）。與傳統(tǒng)方法相比，PVPP法不僅使回收率明顯提高，也使前處理時(shí)間由12 h（過(guò)夜酶解）縮短到2 h之內(nèi)。

值得注意的是，PVPP添加量與處理效果并不完全成正比，當(dāng)超過(guò)最優(yōu)添加量時(shí)，質(zhì)譜響應(yīng)反而下降，處理效果變差。這可能與PVPP的比表面積和吸附力有關(guān)：達(dá)到最優(yōu)添加量之前，PVPP在紅酒中均勻分散成小顆粒，比表面積大、吸附力強(qiáng)，有利于酚類(lèi)物質(zhì)吸附；當(dāng)添加量超過(guò)最優(yōu)值后，PVPP顆粒之間快速團(tuán)聚形成沉淀，吸附能力下降，同時(shí)蛋白也隨酚類(lèi)物質(zhì)摻雜在沉淀中，難以有效釋放。因此，合適的PVPP添加量對(duì)前處理非常重要。

考察了PVPP法的基質(zhì)效應(yīng)，200 μL紅酒經(jīng)PVPP處理并添加酪蛋白（1 mg/L ）后質(zhì)譜分析，并與等量經(jīng)PVPP處理的空白紅酒基質(zhì)進(jìn)行比較。結(jié)果表明（圖5），基質(zhì)對(duì)肽段的質(zhì)譜響應(yīng)影響不大（峰面積差異小），空白基質(zhì)未見(jiàn)特征肽段的質(zhì)譜響應(yīng)。證明基質(zhì)效應(yīng)對(duì)檢測(cè)無(wú)影響，前處理方法可靠、有效。

效解決了這一難題。

在低濃度下，PVPP法同樣能達(dá)到較高回收率。如表2所示，在0.1 mg/L 酪蛋白（100 μg/L）添加量下，特征性肽段的回收率均可達(dá)到75%以上，肽段ALNEINQFYQK由于響應(yīng)太低，無(wú)法準(zhǔn)確計(jì)算回收率。

考察了0.1 mg/L 酪蛋白在4種不同品牌紅酒中的回收率。如表3所示，特征性肽段的回收率均保持在64%-150%之間，進(jìn)一步證明了PVPP用于紅酒酪蛋白快速前處理方法高效、可行。

根據(jù)α酪蛋白中αS1和αS2所占比例計(jì)算，最終確定6條肽段的定量限在10-100 μg/L之間，對(duì)應(yīng)到αS1， αS2和β酪蛋白的定量限分別為40， 40和10 μg/L（表4），比文獻(xiàn)[3] 報(bào)道方法提高約一個(gè)數(shù)量級(jí)。此外，在10 μg/L濃度下，所有肽段均有響應(yīng)（信噪比>3）， 因此αS1， αS2， β酪蛋白的檢測(cè)限均在10 μg/L以下，同樣比文獻(xiàn)[3]報(bào)道方法提高約一個(gè)數(shù)量級(jí)。

4結(jié)論

通過(guò)PVPP快速前處理，使紅酒中酪蛋白回收率提高到80%以上，使整個(gè)前處理時(shí)間縮短到2 h之內(nèi)，有效解決了紅酒中大量單寧對(duì)蛋白提取與酶解的抑制。將PVPP法與三重四極桿液相色譜質(zhì)譜結(jié)合，分析了紅酒中3種亞型的酪蛋白αS1， αS2， β的過(guò)敏原，檢測(cè)限均低至10 μg/L，定量限達(dá)10-40 μg/L，同時(shí)結(jié)果具有良好的重現(xiàn)性。PVPP前處理方法簡(jiǎn)單有效、重現(xiàn)性好，適用于高通量的紅葡萄酒過(guò)敏原檢測(cè)。

Reference

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黎新明， 崔英德， 廖列文. 食品科學(xué)， 2002， 23（8）： 74-76

篇10

一星期后……

返校了，同學(xué)們都期待自己的成績(jī)好一點(diǎn)，這時(shí)，歐陽(yáng)老師讓楊陽(yáng)來(lái)發(fā)試卷，發(fā)完試卷后，楊陽(yáng)對(duì)老師說(shuō)還有兩份卷子，歐陽(yáng)老師看同學(xué)們都來(lái)了，沒(méi)有沒(méi)來(lái)的人。這兩份卷子，一份三張，張張都是滿分。這是歐陽(yáng)老師看一下姓名，上面的名字就是剛轉(zhuǎn)走的學(xué)生：艾克、艾雪。

在快樂(lè)星球上，艾克和艾雪也是每天無(wú)所事事。根本沒(méi)有小孩子的快樂(lè)?；貋?lái)一個(gè)星期了，照艾克的性格，他一定會(huì)搞發(fā)明的?？涩F(xiàn)在，根本沒(méi)摸實(shí)驗(yàn)器材。艾雪拿著一張全班合影，眼淚一滴一滴的流，沒(méi)有唱一首歌（在我的文中，艾雪除了是艾克的助手還是快樂(lè)星球的一名歌手）。笨笨聰聰看著兩個(gè)人失魂落魄的樣子，心中很不好受，于是就問(wèn)他們?yōu)槭裁催@樣?？墒莾扇苏l(shuí)也說(shuō)不清。似乎這是一個(gè)不能解開(kāi)的迷，于是，他們?nèi)フ伊死项B童爺爺。