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篇1

【關(guān)鍵詞】:小鼠組織;免疫組化技術(shù)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R392.33【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2010)06-034-1

醫(yī)學(xué)研究和科研領(lǐng)域經(jīng)常會(huì)應(yīng)用動(dòng)物模型來(lái)進(jìn)行研究,以此來(lái)探索人類(lèi)疾病的模擬反應(yīng)。在過(guò)去一個(gè)世紀(jì)的研究中,小鼠已經(jīng)成為建立人類(lèi)疾病的動(dòng)物模型的最佳實(shí)驗(yàn)材料。當(dāng)科研人員應(yīng)用小鼠做為研究對(duì)象時(shí),往往采用免疫組織化學(xué)的方法對(duì)小鼠組織進(jìn)行鑒定和分析。但是由于免疫組化操作的影響因素諸多,免疫組化效果不穩(wěn)定等因素常常困擾著免疫組化操作者。本文就以上相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行了簡(jiǎn)單的總結(jié)和分析。

1小鼠組織的應(yīng)用

小鼠經(jīng)常被用作動(dòng)物模型進(jìn)行科學(xué)研究,因?yàn)楝F(xiàn)在小鼠的基因改造技術(shù)越來(lái)越成熟,并且它的生理生化及發(fā)育過(guò)程類(lèi)似于人類(lèi),基因組也和人類(lèi)有90%同源,所以小鼠模型可以基本上真實(shí)模擬人類(lèi)的功能活動(dòng)和反應(yīng);小鼠作為遺傳學(xué)研究材料的另一優(yōu)勢(shì)還在于其基因組計(jì)劃已基本完成[1]?；蚪M序列的大量信息為研究基因功能及其表達(dá)調(diào)控、胚胎發(fā)育和人類(lèi)疾病的分子機(jī)制提供了條件基礎(chǔ)和技術(shù)手段。

2免疫組化的原理及優(yōu)點(diǎn)

免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新技術(shù),能將形態(tài)、代謝和功能密切結(jié)合起來(lái)。簡(jiǎn)單地說(shuō),用已知的抗原或者抗體去檢測(cè)待檢組織中的抗原或抗體,其結(jié)合后經(jīng)一系列方法的處理,出現(xiàn)呈色反應(yīng),這樣在光鏡下就可以確定組織的來(lái)源屬性和部位。免疫組化技術(shù)還有著以下的優(yōu)點(diǎn)。(1)特異性強(qiáng),抗原抗體的結(jié)合具有高度特異性;(2)敏感性高。由于ABC發(fā)或SP法的出現(xiàn)時(shí)抗原抗體的結(jié)合更敏感;(3)定位準(zhǔn)確,免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位。

3實(shí)驗(yàn)中存在的問(wèn)題及注意事項(xiàng)

3.1組織的預(yù)處理

因?yàn)樾∈竽Ｐ投际终滟F,所以我們?cè)谠囼?yàn)中應(yīng)盡量減少失敗的幾率。首先,小鼠組織的剝離要迅速,固定要及時(shí),否則很多組織比如腦組織很容易被破壞。其次,固定時(shí)間要適當(dāng)。固定時(shí)間以常溫下6-12小時(shí)為宜。過(guò)度固定可能導(dǎo)致組織抗原的損失,影響實(shí)驗(yàn)效果[2,3]。最后,組織的脫水時(shí)間要適當(dāng)。拿裸鼠為例,因?yàn)槠浣M織比較柔嫩,所以脫水時(shí)應(yīng)該從低濃度乙醇開(kāi)始,比如50%乙醇梯度開(kāi)始,并且適當(dāng)縮短脫水,透明的時(shí)間,防止小鼠組織變形,變脆變硬,影響后面的切片和形態(tài)觀察。

3.2免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟

免疫組織化學(xué)技術(shù)是多步驟、多因素決定的實(shí)驗(yàn)方法,任何一個(gè)環(huán)節(jié)稍有不慎,都直接影響免疫組化的結(jié)果。下面從以下幾個(gè)方面進(jìn)行闡述:(1)抗原修復(fù)。由于小鼠組織在福爾馬林或其他固定液中會(huì)引起蛋白內(nèi)或蛋白間亞甲基橋的橋連,導(dǎo)致許多抗原簇被封閉。所以,需要先進(jìn)行抗原修復(fù)或暴露。試驗(yàn)中應(yīng)該根據(jù)具體組織和抗體選擇最佳的修復(fù)方法。(2)減少或消除非特異染色。一般小鼠組織中免疫組化的非特異染色較深,常常干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察。我們應(yīng)該從以下方面盡量避免:①抗體濃度要適合。試驗(yàn)中通過(guò)設(shè)計(jì)梯度稀釋抗體來(lái)確定最佳抗體稀釋濃度?？贵w濃度過(guò)高也會(huì)產(chǎn)生非特異染色。②PBS洗滌要充分。試驗(yàn)中盡量使用新鮮的PBS,每次的洗滌時(shí)間也要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。③實(shí)驗(yàn)用的封阻血清要確保與一抗同源,封阻時(shí)間也要足夠。④實(shí)驗(yàn)的整個(gè)過(guò)程中都要確保組織不能干掉。(3)DAB顯色:對(duì)二甲胺基偶氮苯(DAB)顯色的時(shí)間也不同程度影響免疫組化的最終效果。最好顯微鏡下控制顯色,所以操作者應(yīng)具備一定的常用抗體定位的知識(shí),不要顯色時(shí)間太長(zhǎng),如果無(wú)陽(yáng)性物質(zhì),顯色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)無(wú)益,只能使假陽(yáng)性的機(jī)率倍增。

3.3結(jié)果的判斷和分析

免疫組化染色結(jié)果的判斷應(yīng)該是陽(yáng)性染色強(qiáng)而非特異染色很淡或無(wú),兩者形成鮮明的對(duì)比,陽(yáng)性標(biāo)記物的位置準(zhǔn)確(核、質(zhì)、膜、血管壁或間質(zhì)等),細(xì)胞邊界清楚。判斷根據(jù):根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的染色強(qiáng)度:(無(wú)著色細(xì)胞)(一),(+),(+ +),(卅)。免疫組化染色結(jié)果還要結(jié)合組織形態(tài)學(xué)判斷是真正的陽(yáng)性染色而非其他著色。另外實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行還必須設(shè)有對(duì)照,比如陽(yáng)性對(duì)照,陰性對(duì)照,自身對(duì)照等,這對(duì)結(jié)果的分析很重要。

4總結(jié)

總之免疫組化是一項(xiàng)很精確的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它在小鼠組織研究上的應(yīng)用有著很重要的科研價(jià)值和潛力。近年來(lái),由于檢測(cè)技術(shù)敏感性的不斷增強(qiáng);單克隆抗體的制備;基因庫(kù)的建立;以及修復(fù)抗原性的各種措施、特別是熱預(yù)處理法的出現(xiàn)與發(fā)展,使得免疫組化技術(shù)的使用邁出了嶄新的一步。雖然該技術(shù)也同時(shí)存在很多困難,但是只要我們認(rèn)真操作每一個(gè)步驟,一定能做出高質(zhì)量的小鼠的免疫組化切片并且得到有用的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

參考文獻(xiàn)

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篇2

【摘要】 目的 通過(guò)觀察左歸丸與右歸丸對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型大鼠腦、脊髓組織淋巴細(xì)胞亞群免疫組化表達(dá)的影響，探討滋陰補(bǔ)腎法與溫陽(yáng)補(bǔ)腎法治療EAE作用機(jī)制。方法 應(yīng)用髓鞘堿性蛋白與完全福氏佐劑，按體積比1∶1制成抗原并于Lewis大鼠雙后足墊下注射，建立EAE模型。120只Lewis大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、激素組、左歸丸組及右歸丸組，每組24只，正常組和模型組給予生理鹽水灌胃，3 mL/(只·d);激素組免疫后給予生理鹽水灌胃，3 mL/(只·d)，發(fā)病后改為醋酸潑尼松混懸液灌胃，5 mg/(kg·d);左歸丸組免疫后給予左歸丸混懸液，2 g/(kg·d);右歸丸組免疫后給予右歸丸混懸液，3 g/(kg·d)。直至處死。分別于急性期(免疫后15 d)和緩解期(免疫后27 d)隨機(jī)選取各組大鼠，取腦和脊髓組織切片進(jìn)行CD4+、CD8+、CD3+、CD19+免疫組化染色。結(jié)果 造模后第15日及第27日，模型組腦和脊髓組織中CD4+免疫組化表達(dá)均較正常組升高(P

【關(guān)鍵詞】 實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎;左歸丸;右歸丸;多發(fā)性硬化

Abstract：Objective To observe the immunohistochemical expression of lymphocyte subpopulationin in brain and spinal cord tissue， and explore the mechanism of Zuogui wan and Yougui wan on rats with experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE). Methods Lewis rats were immunized with the myelin basic protein (MBP). 120 rats were grouping randomly into normal group， EAE group， prednisone group， Zuoguiwan group and Youguiwan group after post immunization (PI). Rats in normal group and EAE group were administered normal soline， each 3 mL/d. Rats in prednisone group were administered suspension of prednisone after developed clinical signs， each 5 mg/kg. Rats in Zuoguiwan group were administered suspension of Zuoguiwan， each 2 g/kg， and rats in Youguiwan group were administered suspension of Youguiwan， each 3 g/kg. On 15th and 27th day after PI， rats were killed and the immunohistochemical staining was performed on the sections of brain and spinal cord. Results On 15th and 27th day after PI， the expression of CD4+ in brain and spinal cord tissue of EAE group were significantly higher than that in normal group (P

Key words：experimental autoimmune encephalomyelitis;Zuoguiwan;Youguiwan;multiple sclerosis

多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種慢性自身免疫性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，病理特點(diǎn)為病灶區(qū)域的血腦屏障(blood brain barrier，BBB)損害、炎癥和髓鞘脫失。細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)異常在其發(fā)生和發(fā)展中起重要作用[1-2]。雖然實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis， EAE)動(dòng)物模型在臨床和病理方面上與MS有許多相似之處，但是EAE由髓鞘堿性蛋白(MBP)致敏產(chǎn)生，故抗原是已知的，但MS的致敏抗原仍不明確，發(fā)病機(jī)制與EAE還不完全一樣。典型的MS早期病變，淋巴細(xì)胞包括漿細(xì)胞未出現(xiàn)在血管周?chē)?，故可肯定淋巴?xì)胞未直接參與脫髓鞘過(guò)程。盡管EAE不能完全代替MS，但對(duì)于研究MS病理形成過(guò)程、發(fā)病機(jī)制及觀察各種治療效果仍是有價(jià)值的[3]。在前期研究中藥二黃方(膠囊)、左歸丸、右歸丸對(duì)EAE大鼠外周血T淋巴細(xì)胞影響的基礎(chǔ)上[4]，本實(shí)驗(yàn)研究左歸丸與右歸丸對(duì)EAE大鼠模型中樞神經(jīng)系統(tǒng)中淋巴細(xì)胞亞群免疫組化表達(dá)的影響，探討滋陰補(bǔ)腎法與溫陽(yáng)補(bǔ)腎法治療MS的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)Lewis大鼠，雄性，體重200～250 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司[許可證號(hào)：SCXK(京)2007-0001]，飼養(yǎng)于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室[許可證號(hào)：SYXK(京)2005-0022]。

1.2 抗原、藥物及試劑

左歸丸由熟地黃、山藥、山茱萸、枸杞子、鹿角膠、菟絲子、川牛膝和龜膠組成，右歸丸由熟地黃、山藥、山茱萸、枸杞子、鹿角膠、菟絲子、杜仲、當(dāng)歸、肉桂和附子組成，北京同仁堂制藥廠提供;醋酸潑尼松，5 mg/片，批號(hào)060802，天津力生制藥廠提供;完全福氏佐劑(complete Freund’s adjuvant， CFA)，批號(hào)F7881，美國(guó)Sigma公司提供;髓鞘堿性蛋白(MBP87-99，human，bovine，rat)由美國(guó)ALEXIS生物化學(xué)公司提供，批號(hào)16752/a;RAT CD4-PE抗體(MR5104)、RAT CD8-TC抗體(MR5206)、RAT NKTR-PE抗體(MR6804)，由美國(guó)Caltag公司提供。CD3(批號(hào)bs-0550R)、CD4(批號(hào)bs-0647R)、CD8(批號(hào)bs-0648R)、CD19(批號(hào)bs-0079R)免疫組化試劑盒，購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3 造模

將125 ?L MBP87-99水溶液(含MBP87-99150 ?g)與125 ?L CFA混合，充分乳化制成抗原配劑。當(dāng)天給予Lewis大鼠雙后足墊皮下多點(diǎn)注射250 ?L抗原配劑，誘導(dǎo)EAE。對(duì)照組則予足墊皮下注射CFA與生理鹽水的混合液。

1.4 分組及藥物干預(yù)

120只Lewis大鼠隨即分為5組，每組24只。按組別分別作以下處理：①正常組每日給予生理鹽水灌胃(3 mL/只);②模型組免疫后每日給予生理鹽水灌胃(3 mL/只);③激素組免疫后每日給予生理鹽水灌胃(3 mL/只)，發(fā)病后改為醋酸潑尼松混懸液灌胃(5 mg/kg);④左歸丸組免疫后每日給予左歸丸混懸液灌胃(2 g/kg);⑤右歸丸組免疫后每日給予右歸丸混懸液灌胃(3 g/kg)。

1.5 取材

分別于造模后第15日(急性期)和第27日(緩解期)處死大鼠取材。用10%的水合氯醛以4 mL/kg的劑量腹腔注射麻醉大鼠，麻醉后，將大鼠仰臥位置于托盤(pán)內(nèi)，打開(kāi)腹腔，從大鼠肋骨兩側(cè)剪斷肋骨，打開(kāi)胸腔，暴露心臟，用鈍針經(jīng)心尖部略左(左心室)進(jìn)針，插入至主動(dòng)脈，用止血鉗將針頭固定好，剪開(kāi)右心耳，立即用生理鹽水沖洗，直至右心耳流出液體清亮，約200～300 mL;關(guān)閉灌注泵開(kāi)關(guān)，換為4%多聚甲醛灌注固定，先快后慢，直至大鼠變硬，每只約用多聚甲醛200～300 mL，剝離腦和脊髓，放入4%多聚甲醛液中固定。

1.6 免疫組化染色

按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。將組織沖洗干凈，梯度酒精脫水，二甲苯透明，再以純凈石蠟將腦組織包埋，石蠟切片機(jī)做連續(xù)切片，片厚5 ?m。石蠟切片脫蠟至水。3%H2O2室溫孵育10 min， PBS沖洗5 min，共3次。滴加適當(dāng)比例稀釋的CD4+、CD8+、CD3+、CD19抗體，37 ℃孵育2 h，PBS沖洗5 min，共3次。25 ℃孵育2 h，4 ℃過(guò)夜，PBS洗2 min，共3次。滴加生物素標(biāo)記羊抗兔IgG，室溫下20 min，PBS洗2 min，共3次;滴加SABC復(fù)合物，室溫20 min，PBS洗5 min，共4次。DAB顯色10 min左右，蒸餾水多次洗滌，蘇木素輕度復(fù)染，脫水，透明，中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察。陰性對(duì)照不加一抗，以正常山羊血清和PBS代替CD4+、CD8+、CD3+、CD19+抗體作孵育。

1.7 病理圖像分析

采用MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析管理系統(tǒng)對(duì)免疫組化染色結(jié)果進(jìn)行定量分析，每組選取3張切片，每張切片在大腦及脊髓白質(zhì)區(qū)域隨機(jī)選取6個(gè)高倍視野(×400)，陽(yáng)性結(jié)果用積分光密度(Integral Optical Density，IOD)表示。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均以—(—數(shù))±s表示，采用SPSS11.5軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果

(見(jiàn)表1、表2)表1 各組大鼠不同時(shí)點(diǎn)腦組織淋巴細(xì)胞亞群免疫組化IOD值變化(—(—化)±s，%)注：與正常組比較，*P

3 討論

MS發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，目前認(rèn)為是由于機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能紊亂，造成Ts細(xì)胞及NK細(xì)胞數(shù)量減少和功能缺陷，Th細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn)，最終致B細(xì)胞過(guò)度活化而產(chǎn)生以抗髓鞘堿性蛋白為主的自身抗體所致[5]。細(xì)胞免疫在MS的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，CD4+、CD8+被抗原刺激活化后，可隨機(jī)進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)形成獲得性免疫監(jiān)視功能[6]。有報(bào)道，急性發(fā)作期CD8+T細(xì)胞和對(duì)照組相比下降，這提示MS發(fā)作期CD4+/CD8+比值可能升高[7]。Ionen等[8]對(duì)25名確診MS患者的研究表明，MS發(fā)作期患者CD8+細(xì)胞比例顯著下降，CD4+T細(xì)胞比例無(wú)明顯下降，CD4+/CD8+T細(xì)胞比例顯著增加，均提示在MS發(fā)作期可能存在CD4+/CD8+T細(xì)胞比例增高[9]。我國(guó)學(xué)者的研究表明，MS患者外周血中CD8+細(xì)胞顯著降低，CD4+/CD8+比值明顯升高;腦脊液中CD3+、CD4+細(xì)胞明顯升高，CD8+細(xì)胞顯著低于對(duì)照組及外周血，而CD4+/CD8+比值明顯高于對(duì)照組及外周血[10]。MS患者腦脊液中CD4+/CD8+高比率，在其經(jīng)受大劑量甲基強(qiáng)的松龍治療后，病情趨于緩解，EDSS評(píng)分下降后也逐步降低，說(shuō)明CD4+/CD8+比率是一個(gè)較為敏感的指標(biāo)，可用于MS輔助診斷、病情的動(dòng)態(tài)觀察及藥物療效判斷等[11]。

左歸丸、右歸丸是滋補(bǔ)腎陰和溫補(bǔ)腎陽(yáng)法治療MS的重要代表方劑，我們使用流式細(xì)胞儀技術(shù)觀察左歸丸和右歸丸對(duì)EAE大鼠外周血淋巴細(xì)胞亞群水平的影響。結(jié)果造模后第15日，左歸丸組CD4+細(xì)胞顯著升高(P

本實(shí)驗(yàn)中，無(wú)論是急性期還是緩解期，模型組腦和脊髓組織中CD4+免疫組化表達(dá)均較正常組升高(P

參考文獻(xiàn)

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篇3

【摘要】近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)以及其它高、新技術(shù)在病理領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，同樣作為體育界的基礎(chǔ)研究學(xué)科運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)的發(fā)展已經(jīng)不能滿(mǎn)足簡(jiǎn)單的宏觀的研究，越來(lái)越多的醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)以及病理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)在運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)廣泛應(yīng)用，尤其是組織病理學(xué)技術(shù)中定位技術(shù)，例如免疫組化、原位雜交等。本文就以上三種病理學(xué)常用的定位技術(shù)的方法進(jìn)行綜述。

【關(guān)鍵詞】組織病理學(xué)；技術(shù)；運(yùn)動(dòng)人體科學(xué)

【中圖分類(lèi)號(hào)】 R818.02【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-1074(2009)04-0045-01

1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)

隨著免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的廣泛應(yīng)用，病理學(xué)研究產(chǎn)生了劃時(shí)代的飛躍。免疫組織化學(xué)是病理學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的方法，是在蛋白質(zhì)水平用各種特異性抗體檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)各種抗原物質(zhì)。根據(jù)標(biāo)記物的不同，免疫組織化學(xué)技術(shù)可分為免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫酶細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫鐵蛋白技術(shù)、免疫金-銀細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、親和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、免疫電子顯微鏡技術(shù)等。

1.1免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟免疫組化技術(shù)是在組織化學(xué)的方法上結(jié)合免疫學(xué)的理論和技術(shù)發(fā)展起來(lái)的一門(mén)新技術(shù)。其原理是利用免疫學(xué)的核心――抗原體特異性結(jié)合的原理，用標(biāo)記抗體追蹤抗原，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑，如酶、金屬離子、同位素等顯示一定的顏色，并借助顯微鏡、熒光顯微鏡、電鏡對(duì)其顏色進(jìn)行觀察，以達(dá)到檢測(cè)抗原物的目的[1]。

1.2免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：①特異性強(qiáng)，免疫組化中抗體與組織細(xì)胞中的抗原的結(jié)合是特異的。如白細(xì)胞共同抗原（LCA）顯示淋巴細(xì)胞成分。②敏感性高，而今，由于抗生物素―生物素（ABC）法和鏈酶素―過(guò)氧化物酶連接（SP）法的出現(xiàn)，使抗體的稀釋度(代表敏感度)達(dá)到了上千、上萬(wàn)，甚至上億倍，使免疫組化技術(shù)更加可靠。③定位準(zhǔn)確，由于抗原抗體的結(jié)合是特異的，因而免疫組化技術(shù)可在組織和細(xì)胞內(nèi)準(zhǔn)確定位，對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，將形態(tài)與功能相結(jié)合，對(duì)疾病進(jìn)行深入的研究。

2原位雜交實(shí)驗(yàn)技術(shù)

原位雜交是將組織化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合來(lái)檢測(cè)合定位核酸的技術(shù)。它是用一段已知序列的核苷酸片斷來(lái)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)是否存在欲檢測(cè)物質(zhì)的DNA或RNA，是比免疫組化更加靈敏而深入一個(gè)層次的檢驗(yàn)方法。根據(jù)所選探針和待測(cè)靶序列的不同，核酸原位雜交有DNA-DNA雜交、DNA-RNA雜交、RNA-RNA雜交等。

2.1原位雜交技術(shù)的應(yīng)用原位雜交由于不需要從待測(cè)組織中提取核酸，可完好的保存組織、細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，將形態(tài)學(xué)與基因功能活動(dòng)的變化相結(jié)合進(jìn)行多層面的研究。主要應(yīng)用：①細(xì)胞特異性mRNA轉(zhuǎn)錄的定位可用于基因圖譜、基因表達(dá)和基因組進(jìn)化的研究；②感染組織病毒DNA/RNA的檢測(cè)和定位；③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)及其變化的監(jiān)測(cè)；④基因在染色體上的定位；⑤檢測(cè)染色體的變化；⑥間期細(xì)胞遺傳學(xué)的研究。

2.2原位雜交技術(shù)與免疫組化的比較

2.2.1兩者的區(qū)別原位雜交與免疫組化染色技術(shù)相比較，這兩種方法的共同之處均具有定位檢測(cè)的功能，且均有較高的敏感性和特異性，所不同的是免疫組化染色是用的是抗體，其檢測(cè)對(duì)象是抗原，機(jī)制是抗原-抗體的特異性結(jié)合，是蛋白質(zhì)表達(dá)水平的檢測(cè)；原位雜交使用的是探針，遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則與待測(cè)靶序列結(jié)合，是DNA或mRNA水平的檢測(cè)。從實(shí)驗(yàn)方法來(lái)看，免疫組化染色操作相對(duì)簡(jiǎn)單，成本相對(duì)較低，受外界因素的影響相對(duì)??；原位雜交技術(shù)無(wú)論從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)上，還是從實(shí)際操作上均較免疫組化染色復(fù)雜，成本的高低與試劑的種類(lèi)和來(lái)源密切相關(guān)。一般而言，直接選用商品化的標(biāo)記探測(cè)和檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)成本較高；熒光標(biāo)記探針較非熒光標(biāo)記探針的成本高，對(duì)樣本及實(shí)驗(yàn)條件的要求較高，也更容易受到外界因素的影響。

2.2.2免疫組化與原位雜交雙標(biāo)技術(shù)雙標(biāo)技術(shù)是在同一張組織切片上標(biāo)記兩種不同的抗體或同時(shí)應(yīng)用兩種不同的檢測(cè)手段，如免疫組化和原位雜交技術(shù)，在不同層次來(lái)檢測(cè)同一細(xì)胞上某些物質(zhì)的表達(dá)是否有相關(guān)性的一種實(shí)驗(yàn)方法。與傳統(tǒng)的單項(xiàng)檢測(cè)相比，雙標(biāo)記具有無(wú)可比擬的優(yōu)越性，可以克服由于切片間各種差異而引起的時(shí)間或空間的樣本誤差。實(shí)驗(yàn)方法上先進(jìn)行原位雜交會(huì)減少免疫組化過(guò)程中對(duì)待測(cè)DNA或RNA的破壞或影響，一般目前均推薦先進(jìn)行原位雜交后進(jìn)行免疫組化標(biāo)記[2，3]。具體的操作跟單純的免疫組化和原位雜交各自的方法一致。需要注意的問(wèn)題就是：①所用的實(shí)驗(yàn)設(shè)備必須經(jīng)DEPC水浸泡或200℃烤箱過(guò)夜，操作時(shí)須帶口罩及手套；②當(dāng)雜交步驟完成后，切片必須認(rèn)真浸泡及長(zhǎng)時(shí)間洗滌至少超過(guò)30min。③作免疫組化的各步驟時(shí)間均須適當(dāng)延長(zhǎng)，以增加抗原抗體間的結(jié)合，楊青春等人研究發(fā)現(xiàn)每個(gè)步驟均延長(zhǎng)2～3倍時(shí)間。④免疫組化顯色后不需要用蘇木精復(fù)染，以免遮蓋核信號(hào)。

參考文獻(xiàn)

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[2]許良中.實(shí)用腫瘤病理方法學(xué)[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，1997:222-223

篇4

【關(guān)鍵詞】 腫瘤；免疫組化法；活檢穿刺法；病理診斷

DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2016.11.017

腫瘤是臨床常見(jiàn)疾病， 近年來(lái)的發(fā)病率逐漸增高。無(wú)論是良性腫瘤還是惡性腫瘤， 早期臨床癥狀均不典型， 尤其是惡性腫瘤患者往往在中晚期才能確診， 此時(shí)已經(jīng)錯(cuò)過(guò)了最佳治療時(shí)機(jī)， 影響了患者的預(yù)后[1]。因此， 對(duì)于早期腫瘤的診斷是目前臨床所關(guān)注的一大重點(diǎn)。目前早期腫瘤尚缺乏理想的診斷方案， 常規(guī)方案包括CT、超聲彈性成像、MRI等影像學(xué)檢查， 但此類(lèi)方案的漏診、誤診率較高[2]。病理診斷作為腫瘤診斷的重要檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)， 雖然具有準(zhǔn)確度高的特點(diǎn)， 但具有一定損傷性， 患者體驗(yàn)較差， 此外， 對(duì)于病理診斷中的不同技術(shù)應(yīng)用價(jià)值尚存在爭(zhēng)議。一般的病理檢驗(yàn)多以活檢穿刺診斷為主， 該方案雖然能夠確定疾病類(lèi)型及分期， 但患者體驗(yàn)較差[3]。隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步， 免疫組化技術(shù)融入了抗原修復(fù)、敏感檢測(cè)及自動(dòng)免疫染色系統(tǒng)， 不但提高了診斷準(zhǔn)確率， 更改善了檢查體驗(yàn)。本文就免疫組化法用于腫瘤患者病理診斷的臨床效果進(jìn)行了研究分析， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 研究對(duì)象選取2014年1月～2015年4月本院收治的112例腫瘤患者， 男61例， 女51例， 年齡25～70歲， 平均年齡（43.9±11.4）歲；肺癌22例， 肝癌37例， 轉(zhuǎn)移性腫瘤51例， 血管瘤2例。根據(jù)病理診斷方案不同將患者分為觀察組和對(duì)照組， 各56例。

1. 2 方法

1. 2. 1 對(duì)照組采用穿刺活檢法進(jìn)行診斷， 根據(jù)影像學(xué)顯示的病灶部位進(jìn)行穿刺， 超聲下取出組織進(jìn)行活檢， 與標(biāo)準(zhǔn)組織進(jìn)行對(duì)比。

1. 2. 2 觀察組采用免疫組化法進(jìn)行診斷， 主要試劑包括脫水劑、固定劑、蒸餾水、透明液、浸蠟液、樹(shù)膠等。取患者0.2 cm×1.0 cm×2.0 cm的1塊組織置于甲醛溶液中充分浸泡2 h， 置于透明液1 h， 之后用脫水劑脫水1 h， 置于浸蠟液1 h， 埋于石蠟中常規(guī)切片， 層厚2 μm， 將組織切片進(jìn)行免疫組化染色， 在37℃下置于3%過(guò)氧化氫溶液中孵育10 min， 蒸餾水沖洗3 min， 高壓修復(fù)2 min， PBS洗滌5 min， 常溫孵育2 h， PBS洗滌5 min， 加入U(xiǎn)ltrasenSitive SP試劑， 孵育后DBA顯色， 樹(shù)膠封固。

1. 3 觀察指標(biāo)及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果， 包括甲胎蛋白、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3等， 染色呈棕黃色為陽(yáng)性， 否則為陰性。采用問(wèn)卷調(diào)查形式了解患者的診斷體驗(yàn)， 主要包括心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感3個(gè)維度， 每個(gè)維度10個(gè)條目， 每個(gè)條目根據(jù)患者回答情況賦分0～10分， 分值越高這說(shuō)明患者對(duì)該檢驗(yàn)方案的體驗(yàn)度越好， 總分≥200分為滿(mǎn)意。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P

2 結(jié)果

2. 1 陽(yáng)性率對(duì)比 觀察組染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型， 甲胎蛋白及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3異常表達(dá)48例， 陽(yáng)性率85.7%、滿(mǎn)意度82.1%， 對(duì)照組的陽(yáng)性率50.0%、滿(mǎn)意度57.1%， 兩組對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P

2. 2 患者體驗(yàn)對(duì)比 診斷體驗(yàn)調(diào)查結(jié)果顯示， 觀察組患者的心理顧慮、生理問(wèn)題、信任感評(píng)分均顯著高于對(duì)照組， 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

3 討論

隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步， 免疫組化技術(shù)被越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于腫瘤患者的診斷， 并取得了理想的效果。免疫組化技術(shù)診斷的準(zhǔn)確率必須以可靠的免疫組化切片為基礎(chǔ)， 因此在診斷中要加強(qiáng)醫(yī)生和技術(shù)人員之間的協(xié)調(diào)性， 確保免疫組化切片順利完成， 但由于技術(shù)仍不夠成熟， 目前免疫組化技術(shù)也不能排除假陽(yáng)性和假陰性的幾率[4]。

為了提高診斷準(zhǔn)確率， 免疫組化法的使用過(guò)程中要遵循以下幾點(diǎn)：①固定， 在對(duì)組織進(jìn)行固定時(shí)要采用10%的甲醛固定液， 能夠更好、更長(zhǎng)時(shí)間的固定組織， 能夠確保目標(biāo)組織3個(gè)月內(nèi)具有穩(wěn)定的陽(yáng)性率[5]；②烤片， 在烤片過(guò)程中要注意溫度的把握， 通常在65℃左右的恒溫箱中進(jìn)行加熱烤片， 但要避免溫度過(guò)高；③修復(fù)， 對(duì)目標(biāo)組織進(jìn)行抗原修復(fù)的時(shí)間應(yīng)該控制在8 min， 然后讓切片自然冷卻并染色；④染色， 既要對(duì)組織進(jìn)行反復(fù)染色， 又要避免染色過(guò)深影響觀察。而免疫組化法的基本機(jī)制依賴(lài)于酶促反應(yīng)， 主要是通過(guò)酶聯(lián)反應(yīng)來(lái)使過(guò)氧化物酶形成有顏色的復(fù)合物， 但是由于腫瘤類(lèi)型較多， 不同組織標(biāo)本也存在抗原含量的差異， 因此顯色時(shí)間不同[6]， 要充分顯色才能便于準(zhǔn)確觀察。

本次研究結(jié)果顯示， 觀察組染色后細(xì)胞結(jié)構(gòu)為變異型， 甲胎蛋白及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3異常表達(dá)48例， 陽(yáng)性率85.7%、滿(mǎn)意度82.1%， 顯著優(yōu)于對(duì)照組的陽(yáng)性率50.0%、滿(mǎn)意度57.1%（P

綜上所述， 免疫組化法應(yīng)用于腫瘤患者的病理診斷臨床應(yīng)用價(jià)值更高， 患者體驗(yàn)度更好， 值得在臨床上推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

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篇5

【關(guān)鍵詞】病理技術(shù)；無(wú)醛固定液；甲醛固定液

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（s）.2014.05.060文章編號(hào)：1004-7484（2014）-05-2453-02在病理診斷中傳統(tǒng)應(yīng)用較多的是甲醛固定液，但是甲醛固定液的毒性較大，對(duì)人體危害嚴(yán)重。無(wú)醛固定液是近年來(lái)病理診斷中逐漸應(yīng)用的新型固定液，其免疫組化染色效果較好，且能保證組織細(xì)胞的完整性，是病理診斷中較為理想的固定液。為了探討無(wú)醛固定液在病理技術(shù)中的應(yīng)用價(jià)值，本文選擇我院臨床送檢的61例組織標(biāo)本，分別用甲醛固定液和無(wú)醛固定液固定后，對(duì)免疫組化染色效果進(jìn)行對(duì)比，報(bào)告如下：

1資料和方法

1.1一般資料選擇我院2009年――2012年臨床送檢的組織活體標(biāo)本61例進(jìn)行研究，其中11例結(jié)腸癌組織，9肺癌組織，13例乳腺癌組織，12例淋巴癌組織，10例卵巢癌組織，6例前列腺癌組織。

1.2方法

1.2.1試劑每種組織分別取2塊，組織大小為2×1×0.2cm，將每種組織分別納入兩組中，采用甲醛固定液和GS無(wú)醛固定液固定組織。試劑：GS無(wú)醛固定液、脫水液、浸蠟液、無(wú)苯透明液全部由（哈爾濱格林標(biāo)本技術(shù)開(kāi)發(fā)有效公司）提供。甲醛、二甲苯試劑則由（北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司）提供。另外，在試驗(yàn)中所需的RPR、HER-2、CAl99、LCA、CD20、CD45RO、EGFR、CK、p53、CAl25等即用型單克隆抗體由（福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司）提供。

1.2.2固定方法①GS無(wú)醛固定液固定方法：無(wú)醛固定液Ⅰ和無(wú)醛固定液Ⅱ分別固定1h和3h，之后用脫水液脫水1h，無(wú)苯透明液透明1.5h，浸蠟液1.5h，石蠟包埋，常規(guī)切片，切片厚度為5μm。②甲醛固定：采用4%的甲醛液將組織分別固定2h，之后用80%的乙醇脫水1h，無(wú)水乙醇脫水1h，二甲苯透明1.5h，浸蠟液1h，石蠟包埋后常規(guī)切片，厚度為5μm。

1.2.3免疫組化染色將兩種固定液固定的切片各取一張，切片先進(jìn)行脫蠟，然后用3%的H2O2室溫孵育10min，用蒸餾水洗3次，每次3min，用高壓鍋修復(fù)，溫度為140℃，時(shí)間為2.5min，之后PBS洗3次，每次5min，加抗工作液1滴，在37℃下孵育2h，再次PBS洗3次，每次5min，加入Max VisionTM試劑，37℃下孵育30min，再次PBS洗3次，DAB顯色，用蒸餾水沖洗，蘇木精復(fù)染核1min后，分化返藍(lán)，乙醇脫水，二甲苯透明，用中性樹(shù)膠封固。根據(jù)組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色。對(duì)同一種組織采用不同固定液固定方法得到切片的免疫組化染色效果進(jìn)行對(duì)比。

2結(jié)果

經(jīng)對(duì)比，采用傳統(tǒng)甲醛固定液固定的一組，液面較渾濁，且組織上浮，而采用GS無(wú)醛固定液固定的一組，液面清亮，組織沉底，且變硬、變白，具有較好的連續(xù)性；免疫組化染色效果顯示，無(wú)醛固定液的標(biāo)本組織細(xì)胞抗原性保存較好，背景清晰，且陽(yáng)性結(jié)果定位較準(zhǔn)確。

3討論

在病理診斷中免疫組化染色是非常重要的工具，當(dāng)前大部分的病理診斷均需要通過(guò)免疫組化染色。在以往免疫組化染色過(guò)程中，結(jié)果不穩(wěn)定情況經(jīng)常出現(xiàn)，近年來(lái)隨著免疫試劑質(zhì)量的提高和免疫組化染色操作自動(dòng)化的發(fā)展，該狀況有了一定改善，但是結(jié)果不穩(wěn)定情況依然存在。對(duì)免疫組化染色結(jié)果穩(wěn)定性產(chǎn)生影響的重要方面就是組織的固定質(zhì)量，該步驟是實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中的最初的一步，也是最關(guān)鍵的一步，通過(guò)對(duì)病理切片制作質(zhì)量的影響來(lái)影響免疫組化的結(jié)果，固定液是該操作中必不可少的，而固定液的質(zhì)量和性質(zhì)對(duì)切片質(zhì)量產(chǎn)生影響[1]。

在以往病理組織切片制作過(guò)程中應(yīng)用較多的是甲醛固定液，除了具有較高的毒性之外，它具有較強(qiáng)的滲透性，組織收縮小，固定均勻，廉價(jià)以及保存組織結(jié)構(gòu)好的優(yōu)點(diǎn)，因此在病理診斷中應(yīng)用較多，但是甲醛固定液也存在較大的缺點(diǎn)：首先其揮發(fā)性較強(qiáng)，保存要求高，具有強(qiáng)烈的腐蝕性和刺激性，釋放到空氣中對(duì)環(huán)境的污染嚴(yán)重，根據(jù)相關(guān)的醫(yī)學(xué)研究，人體直接接觸甲醛可能會(huì)引發(fā)濕疹、過(guò)敏和皮炎，另外眾所周知，甲醛具有致癌性，人長(zhǎng)期生活在甲醛環(huán)境中，則罹患各種癌癥和呼吸道疾病的可能性增高；甲醛的存放要求高，當(dāng)存放時(shí)間夠長(zhǎng)，則會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，在標(biāo)本制作中應(yīng)用會(huì)影響固定效果；甲醛氧化活性較高，容易氧化為甲酸，導(dǎo)致整個(gè)溶液呈酸性，固定后標(biāo)本也變?yōu)樗嵝裕诩?xì)胞核染色時(shí)，對(duì)其效果產(chǎn)生影響，同時(shí)在固定肝、脾等的陳舊組織時(shí)，甲醛容易形成甲醛色素，與含鐵血黃色混合，直接影響到病理診斷效果；甲醛固定液用完之后的處理難度較大，需要特殊處理，廢液不能直接從下水管道排出，處理成本較高[2]。

鑒于甲醛固定液存在的缺陷，在醫(yī)學(xué)研究中，研究人員在不斷尋找甲醛固定液的替代品，我國(guó)研究人員經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的研究，研制出了GS無(wú)醛固定液，該固定液最明顯的特點(diǎn)就是環(huán)保，除了無(wú)色、無(wú)刺激性、低揮發(fā)性、對(duì)環(huán)境危害較小之外，還具有如下優(yōu)點(diǎn)：具有較強(qiáng)的滲透性，有效縮短了切片制作中脫水時(shí)間；具有較好的固定、脫水、脫脂、硬化等作用，減少了組織在制作中出現(xiàn)收縮、空泡、核固縮等；除了能保護(hù)組織形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)之外，還能保證細(xì)胞膜的完整性；用無(wú)醛固定液制作的標(biāo)本易于分離，能有效清除脂肪組織，無(wú)需過(guò)多的清潔；減少了組織中抗原和核酸被破壞；能較為完整的保存RNA和DNA，可清除顯示細(xì)胞的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，便于進(jìn)行標(biāo)本精細(xì)化研究；無(wú)醛固定液的處理較為簡(jiǎn)單，以乙醇廢液處理方法相似[3]。

在本組研究中，同一標(biāo)本采用無(wú)醛固定液和甲醛固定液，在相同的免疫組化條件下，在免疫組化染色效果中兩者基本一致，在部分切片中，無(wú)醛固定液組的免疫組化染色效果要優(yōu)于甲醛固定液組。另外在部分研究中對(duì)甲醛固定液和無(wú)醛固定液的固定時(shí)間進(jìn)行了研究，當(dāng)固定時(shí)間在30d以?xún)?nèi)，甲醛固定液與無(wú)醛固定液的免疫組化染色效果無(wú)差異（p>0.05），但是當(dāng)固定時(shí)間超過(guò)60d后，相比于甲醛固定液組，無(wú)醛固定液組的免疫組化陽(yáng)性結(jié)果呈現(xiàn)較大的優(yōu)勢(shì)（p0.05），說(shuō)明了無(wú)醛固定液固定時(shí)間在120d內(nèi)不會(huì)對(duì)免疫組化染色效果產(chǎn)生影響，而甲醛固定液則只在60d內(nèi)不會(huì)對(duì)免疫組化染色效果產(chǎn)生影響。

綜上所述，無(wú)醛固定液的免疫組化染色效果與甲醛固定液基本一致，在某些組織中還優(yōu)于甲醛固定液，同時(shí)固定有效時(shí)間要長(zhǎng)于甲醛固定液，因此在病理檢查中可用無(wú)醛固定液代替甲醛固定液。

參考文獻(xiàn)

[1]潘黎明.環(huán)保型無(wú)醛固定液與甲醛固定液對(duì)免疫組化染色的效果比較[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2013，25（5）：583.

篇6

【摘要】目的對(duì)皮膚交界痣的診斷進(jìn)一步的探討。方法用組織病理學(xué)及免疫組化，對(duì)比復(fù)發(fā)及無(wú)復(fù)發(fā)皮膚交界痣的區(qū)別，來(lái)明確皮膚交界痣的診斷。結(jié)果兩者的組織病理學(xué)及免疫組化幾乎無(wú)差別。結(jié)論診斷和治療皮膚交界痣，不能單純依靠組織病理學(xué)和免疫組化，還應(yīng)當(dāng)根據(jù)臨床，并加強(qiáng)隨訪，觀察復(fù)況，以便及時(shí)進(jìn)行下一步治療。

【關(guān)鍵詞】交界痣；免疫組化；復(fù)發(fā)；隨訪

皮膚交界痣，是皮膚的一種瘤樣病變，一般為良性經(jīng)過(guò)。但近年來(lái)常有復(fù)發(fā)病例。對(duì)本院2000-2007年31例交界痣(其中4例有復(fù)發(fā))進(jìn)行研究和分析，并進(jìn)行總結(jié)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1資料和方法

1.1研究對(duì)象

1.1.1一般資料挑取本院2000-2007年病理診斷為“皮膚交界痣”的病例31例。臨床檢查為皮膚色素性腫物(部位各不相同)，稍突起于皮膚表面，不分病例表面長(zhǎng)有毛發(fā)。臨床局麻下行切除手術(shù)，將腫物標(biāo)本送病理檢查。

1.1.2檢查方法標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定，石蠟切片后，分別進(jìn)行HE染色和免疫組化SP法染色，一抗CK,S-100,GFAP,HMB45,試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。

1.2病理檢查與診斷

1.2.1組織學(xué)病理大體取材：大多數(shù)為球形腫物，直徑0.8~1.2cm，表面覆以少量毛發(fā)或無(wú)毛發(fā)，腫物褐色或黑色，切面質(zhì)韌。

鏡下所見(jiàn):表皮及其下延的上皮角的基底層細(xì)胞與真皮之間，被增生的痣細(xì)胞團(tuán)所取代，并與表皮相連，形成所謂的“滴落現(xiàn)象”。痣細(xì)胞為梭形或立方狀。部分細(xì)胞透明，胞漿含有色素。核圓形或橢圓，無(wú)異型性，核分裂少見(jiàn)，不見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。痣細(xì)胞在表皮和真皮交界處，呈多個(gè)巢團(tuán)狀，邊界清楚，分布距離均勻；每個(gè)巢內(nèi)的上一半在表皮的底層內(nèi)，下一半則在真皮淺層內(nèi)。這些痣細(xì)胞為大痣細(xì)胞，色素較深。

1.2免疫組化瘤細(xì)胞顯示S-100(+)HMB45(+-)GFAP(-)CK(-)。

1.3對(duì)比把4例復(fù)發(fā)的病例同其他27例組織病理及免疫組化進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)與不復(fù)發(fā)的病例，在組織病理學(xué)及免疫組化方面均無(wú)明顯差異。

2結(jié)果

經(jīng)過(guò)組織病理學(xué)及免疫組化分析，得出最后診斷為“皮膚交界痣”。大部分患者切除腫物后，均治愈。只少數(shù)病例(4例)于手術(shù)后3~5年內(nèi)復(fù)發(fā)，占所有病例的12.9%。繼續(xù)切除復(fù)發(fā)腫物，經(jīng)過(guò)組織病理學(xué)及免疫組化檢查，并進(jìn)一步會(huì)診，仍診斷為“皮膚交界痣”。

3討論

交界痣(junctionalnevus)可發(fā)生于任何年齡。常見(jiàn)于皮膚表面，也可見(jiàn)于結(jié)合膜、外耳道、子宮頸等處。臨床常表現(xiàn)為體積較小，孤立性半球形小結(jié)節(jié)，大多直徑<1cm。一般呈單發(fā)，極少數(shù)為多發(fā)。表面較光滑，與皮膚紋理相似，質(zhì)地韌，呈棕色或黑褐色，幾乎是對(duì)稱(chēng)性的，界限清楚的病變,表面光滑、無(wú)毛，平坦或稍高于表皮。一般不出現(xiàn)自覺(jué)癥狀。突起于皮膚表面的交界痣容易受到洗臉、刮須、摩擦與損傷的此外，并由此可能發(fā)生惡性變癥狀：如局部輕微癢、灼熱和疼痛；痣的體積迅速增大；色澤加深；表面出現(xiàn)感染、破潰、出血，或痣捉為皮膚出現(xiàn)衛(wèi)星小點(diǎn)、放射黑線(xiàn)、黑色素環(huán)；以及痣所在部位的引流區(qū)淋巴結(jié)腫大等。惡性黑色素瘤多來(lái)自交界痣。痣細(xì)胞分布，由表皮到與表皮相連的真皮內(nèi)。細(xì)胞呈梭形或立方狀，部分細(xì)胞胞漿透明，偶見(jiàn)核分裂，罕見(jiàn)病理性核分裂。

皮膚交界痣一直被認(rèn)為皮膚非腫瘤性病變，屬良性范疇，切除后即可治愈，完全切除后不復(fù)發(fā)。但近些年來(lái)，對(duì)此病診斷標(biāo)準(zhǔn)似乎應(yīng)該有所改變。因部分患者在腫物完全切除后，仍出現(xiàn)復(fù)發(fā)，這一點(diǎn)值得慎重。本文經(jīng)過(guò)對(duì)31例病例對(duì)比分析，發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)組織的瘤細(xì)胞并無(wú)明顯的異型性，但這種生物學(xué)行為則屬低度惡性經(jīng)過(guò)。很多病理學(xué)家也因此提出：診斷皮膚交界痣，應(yīng)主要注意痣細(xì)胞侵及表皮的程度，越接近皮膚的表面，越應(yīng)該注意復(fù)發(fā)。因此，病理學(xué)上認(rèn)為，對(duì)于皮膚交界痣的治療，除了完全切除腫物外，臨床上還應(yīng)建立嚴(yán)格的隨診制度，以便觀察是否復(fù)發(fā)和下一步治療。

參考文獻(xiàn)

［1］范郎綈.腫瘤診斷病理學(xué).天津科學(xué)技術(shù)出版社.

篇7

[關(guān)鍵詞] 胃腸間質(zhì)瘤；免疫組化；c-kit；血小板源性生長(zhǎng)受體α基因

[中圖分類(lèi)號(hào)] R735

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A

[文章編號(hào)] 1674-0742（2015）07（b）-0008-02

胃腸間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，CISTs）是消化道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤，組織學(xué)上由梭形細(xì)胞、上皮樣細(xì)胞、偶或多形性細(xì)胞排列成束狀或彌漫狀，由突變的c-kit或PDGFRA基因驅(qū)動(dòng)，可見(jiàn)于消化道的任何位置。過(guò)去，多數(shù)CISTs被診斷為平滑肌或神經(jīng)源性腫瘤，1983年Mazur等首次提出CISTs的概念。目前，CISTs的診斷依賴(lài)于結(jié)合組織形態(tài)學(xué)、CD117和DOG1免疫組化檢測(cè)以及c-kit和PDCFRA基因突變的檢測(cè)。該研究回顧性分析2013年1月-2015年1月收集的南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的110例CISTs的臨床病理特點(diǎn)，并運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)Dog-l、CD117、CD34、SMA、Sl00的表達(dá)，其中8例包含c-kit、PDGFRA基因突變檢測(cè)結(jié)果，探討免疫組化結(jié)合基因檢測(cè)對(duì)CISTs的診療價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院白2013年1月-2015年1月經(jīng)手術(shù)或內(nèi)鏡下切除的資料完整、診斷明確的原發(fā)性GISTs患者組織標(biāo)本110例。

1.2 免疫組化檢測(cè)

所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醉固定，常規(guī)石蠟包埋，切片。免疫組化采用sP兩步法，試劑均購(gòu)白福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司。參照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，常規(guī)設(shè)置陽(yáng)性和陰性對(duì)照。結(jié)果判定：陽(yáng)性表達(dá)部位定位準(zhǔn)確，Dog-1、CD117、CD34陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)平均≥10%為陽(yáng)性。

1.3 基因突變檢測(cè)

按照試劑盒（OMEGA，USA）說(shuō)明提取石蠟組織中的基因組DNA，運(yùn)用合適的引物PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）擴(kuò)增c-kit基因外顯子9、11、13、17和PDCFRA基因外顯子12、18。PCR產(chǎn)物經(jīng)3%瓊脂糖凝膠電泳確定后，用ABI 3500測(cè)序儀行序列分析。應(yīng)用SeqScape v2.7軟件判斷基因突變情況。

2 結(jié)果

2.1 臨床及病理特征

110例患者中，男56例，女54例。年齡22～89歲，中位年齡59歲。腫瘤發(fā)生部位：胃74例（67.3%），小腸2l例（19.1%），結(jié)直腸6例（5.5%），食管6例（5.5%），胃腸外（腹膜后、盆腔）3例（2.7%）。根據(jù)文獻(xiàn)將腫瘤行危險(xiǎn)度分級(jí)：極低組47例（42.7%），低組25例（22.7%），中等組10例（9.1%），高組28例（25.5%）。腫塊最大直徑范圍0.3～20cm，平均直徑4.6cm。110例患者中梭形細(xì)胞型92例（83.6%），上皮樣型7例（6.4%），混合細(xì)胞型11例（10%）。

2.2 免疫組化結(jié)果

110例中CD117、Dog-l、CD34、SMA、Sl00的陽(yáng)性例數(shù)分別為102（92.7%）、103（93.6%）、87（79.1%）、49（44.5%）、9（8.2%）（表1）。CD117、Dog-1、CD34大部分為彌漫性表達(dá)。8例CD117陰性病例中，7例Dog-l陽(yáng)性。SMA、Sl00大部分為局部或局灶陽(yáng)性。

2.3 基因檢測(cè)結(jié)果

8例GIST（中等風(fēng)險(xiǎn)1例，高風(fēng)險(xiǎn)7例；胃4例，小腸3例，直腸1例）行c-kit、PDCFRA基因突變檢測(cè)，總體突變率100%（8/8）。其中c-kit突變率75%，PDGFRA突變率100%（表2）。c-kit突變結(jié)果提示4例應(yīng)用伊馬替尼可能有積極療效，2例可能產(chǎn)生耐藥或敏感性降低，2例療效不明確。PDGFRA檢測(cè)結(jié)果對(duì)伊馬替尼療效預(yù)測(cè)尚需要進(jìn)一步臨床觀察。8例GIST中，6例CD117陽(yáng)性。其中一例CD117、Dog-l雙陰性，c-kit第9外顯子插入突變。3討論

GISTs是消化道最常見(jiàn)的間葉源性腫瘤，在中國(guó)，估計(jì)年發(fā)病率約為10-20/100萬(wàn)，其中10%～30%為惡性。本研究中，中高等風(fēng)險(xiǎn)組占34.6%。CIST可發(fā)生于消化道任何部位，部分患者可發(fā)生于消化道外。該研究中，胃部發(fā)生率最高（67.3%），小腸其次（19.1%）。

GISTs具有非定向分化特征，因不同瘤體的組織分化程度存在差異，故其表現(xiàn)出的形態(tài)學(xué)以及組織學(xué)特征也不同。該研究中梭形細(xì)胞型占83.6%，上皮樣型占6.4%，混合細(xì)胞型占10%。在組織學(xué)上，GISTs與其他間葉源性腫瘤相似，難以與平滑肌腫瘤、神經(jīng)纖維瘤等鑒別。免疫組化診斷以往依賴(lài)CD117、CD34的表達(dá)。近年來(lái)，隨著研究的進(jìn)展，DOC1已成為GISTs診斷的重要分子標(biāo)記物。在該研究的110個(gè)病例中，CD117、Dog-1、CD34的陽(yáng)性率分別為92.7%、93.6%、79.1%，在8例CD117陰性的病例中，7例Dog-1陽(yáng)性。CD117、Dog-l、CD34三者聯(lián)合應(yīng)用可區(qū)分出絕大部分的GISTs。

篇8

【關(guān)鍵詞】胃癌;Plkl基因;表達(dá)

【中圖分類(lèi)號(hào)】R735.2【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1007-8517(2009)10-0040-01

Relationship Between the expression of Plkl Gene and Pathobiological Behaviors of Gastric Carcinoma

ZOU Chonggao XIA Heshun

(1.Hospital of workers,HU bei,WU Han,430021;2.Cancer Hospital,HU bei,WU Han,430021）

【Abstract】 Objective :To detect the expression of Plkl gene in gastric carcinoma , and to investigate the significance of Plkl gene expression in progression of gastric carcinoma. Methods : The expressions of Plkl were evaluated by immunohistochemistry in 49 cases of gastric carcinoma and the adjacent normal mucosa. Results : The positive rates of Plkl gene expression were 0 and 83.67% in adjacent normal mucosa and gastric carcinoma , respectively. And significant difference in expression of Plkl was found between gastric carcinomas and the adjacent normal mucosa ( P

【Keywords】gastric carcinoma ;Plkl gene ; expression

胃癌為我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤，根治性手術(shù)后有5%的早期胃癌和50%的進(jìn)展期胃癌患者在5年內(nèi)死亡，死因多為原癌復(fù)發(fā)[1]。因此，早期發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞播散，有效估計(jì)腫瘤的復(fù)發(fā)及預(yù)后，在胃癌的治療上意義重大，我們應(yīng)用免疫組化SP法檢技術(shù),探討Plkl在胃癌組織中的表達(dá)特點(diǎn)及其與臨床病理分期、組織學(xué)分型和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1臨床材料

1.1研究對(duì)象選取我院1993年1月至2005年1月胃癌術(shù)后或活檢標(biāo)本49例。入選條件為:第一次手術(shù)、術(shù)前未接受化療和放療及免疫治療的胃癌患者;均具有完整的臨床資料和病理資料。其中男性29例，女性20例:中位年齡63歲(26~84)歲; 組織學(xué)分期早期胃癌11 例,進(jìn)展期胃癌38 例。另取15例同期正常胃組織標(biāo)本作為對(duì)照組，取自胃癌切除標(biāo)本的遠(yuǎn)端組織，距腫瘤邊緣>5cm經(jīng)病理檢查確認(rèn)為正常胃粘膜上皮為對(duì)照組。

1.2免疫組化SP法檢第一抗體Plkl為鼠抗人單克隆抗體;購(gòu)自美國(guó)SnataCurze生物技術(shù)公司，SP免疫組化超敏染色試劑盒、DAB顯色試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。采用免疫組化SP法檢測(cè)胃癌及癌旁正常胃粘膜的Plkl的表達(dá)，免疫組化染色步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用己知的Plkl陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。由兩位資深病理科醫(yī)生獨(dú)立觀察每張切片后一起做出判斷。每張切片隨機(jī)觀察10個(gè)具有代表性的高倍視野，Plkl以在細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)著棕色顆粒為陽(yáng)性染色。依照各自染色程度及染色細(xì)胞數(shù)進(jìn)行綜合分析評(píng)分量化。不著色為0分，著色淡為1分，著色適中為2分，著色深為3分。著色細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分率75%為3分。每張切片染色程度得分與陽(yáng)性細(xì)胞百分率得分各自相乘為最后得分。0～1為(－)，2～3分為(+)，4～6為(++)，>6分為(+++)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用χ 檢驗(yàn)比較各組間率及配對(duì)資料的差異。所有數(shù)據(jù)均利用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析處理。

2結(jié)果

2.1Plkl在胃癌中的表達(dá)見(jiàn)表1。Plkl陽(yáng)性表達(dá)定位于胃癌細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞膜中，呈棕色顆?；驁F(tuán)塊。在49例胃癌組織中，41例有不同程度的陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率為83.67%:15例癌旁正常胃組織中未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)，二者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

2.2Plkl表達(dá)與胃癌病理組織學(xué)類(lèi)型關(guān)系見(jiàn)表2。Plkl的表達(dá)與胃癌浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及TNM分期密切相關(guān)(P0.05)。

3討論

胃癌的發(fā)病率和死亡率居我國(guó)惡性腫瘤的前列，多數(shù)病例在確診時(shí)己屬中晚期。目前多采用以手術(shù)為主的綜合治療，但許多病人最終死于局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，5年生存率僅為30%~40%，治療效果仍不理想。研究表明，胃癌不良的預(yù)后與胃癌細(xì)胞的無(wú)限增殖有關(guān)，而究其原因則可能是諸多與細(xì)胞增殖相關(guān)的基因發(fā)生了改變，找出這些與腫瘤細(xì)胞增殖有關(guān)的基因并闡明其在癌發(fā)生及發(fā)展中的作用對(duì)腫瘤防治具有重要意義。保羅樣激酶1(Poofhkekinaes，Plkl)是一類(lèi)廣泛存在于真核細(xì)胞中的呈周期依賴(lài)性表達(dá)的絲/蘇氨酸激酶，其結(jié)構(gòu)及功能均十分保守。本研究發(fā)現(xiàn)plkl的表達(dá)狀態(tài)與浸潤(rùn)程度、TNM分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移相關(guān)（均P

參考文獻(xiàn)

[1]張文范，張蔭昌，陳峻青.胃癌[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2001

[2]Weiehert W，Deknert C，Schmidt M，et al.Polo-like kinase isoform experssion is a prognostic factor in ovarian careinoma[J].BrJCnaeer.2004;90(4):815-821.

篇9

關(guān)鍵詞：彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤；病理診斷；免疫組化

【中圖分類(lèi)號(hào)】R733.4 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-8602（2015）05-0083-02

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）是最常見(jiàn)的非霍奇金淋巴瘤類(lèi)型，在2008年WHO淋巴造血組織腫瘤分類(lèi)中，將彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）分為非特指型（DLBCL-NOS）?特殊亞型和其它大B細(xì)胞淋巴瘤?掌握其臨床病理診斷特征及免疫學(xué)分型，在臨床治療?判斷預(yù)后中具有重要意義?

1 材料及方法

1.1 材料收集2009.1-2011.9我院資料完整的DLBCL共36例，男13例，女23例，年齡最小18歲，最大85歲，平均年齡57.6歲?發(fā)生于淋巴結(jié)19例，胃腸道11例，扁桃體及咽部4例，骨2例?

1.2 方法標(biāo)本經(jīng)10%中爾馬林固定，石蠟包埋，3-4um切片，HE染色，光鏡觀察?選用福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司即用型工作液，高溫高壓組織抗原修復(fù)，免疫組化MaxVision二步法，檢測(cè)腫瘤細(xì)胞免疫表型?根據(jù)病情及鑒別診斷需要，選用CD20?CD3?CD30?CD10?CD5 ?bcl-6?MUM1?Ki67等抗體?根據(jù)文獻(xiàn)記載，染色模式正確并>20%瘤細(xì)胞表達(dá)記為陽(yáng)性?

2 結(jié)果

近2年多來(lái)，我們科共診斷淋巴瘤66例，DLBCL36例，占同期非霍奇金淋巴瘤54.5%（36/66），是最常見(jiàn)的淋巴瘤類(lèi)型?淋巴結(jié)19例（頸部9例?腹股溝3例?腋窩2例?腹股溝2例?腹膜后3例），占52.8%（19/36），結(jié)外17例，占47.2%（17/36）其中11例發(fā)生于胃腸道，而且以胃DLBCL多見(jiàn)，占結(jié)外淋巴瘤52.9%（9/17），扁桃體及咽部4例，骨2例?發(fā)病部位不同，患者的臨床表現(xiàn)不一，表現(xiàn)為頸部包塊15例，腹痛?惡心?嘔吐?食欲減退等胃炎樣癥狀10例，腸梗阻1例，發(fā)熱?乏力?消瘦6例?結(jié)內(nèi)DLBCL19例中，淋巴結(jié)正常結(jié)構(gòu)消失，瘤細(xì)胞彌漫分布，以中心母細(xì)胞及免疫母細(xì)胞為主，細(xì)胞大小?形態(tài)較一致，核大?空泡狀?核膜厚?核仁清楚1-3個(gè)，除一例破壞淋巴結(jié)浸潤(rùn)周?chē)浗M織伴彌漫性纖維化外，多數(shù)間質(zhì)薄壁血管增生，無(wú)纖維結(jié)締組織增生?結(jié)外以胃DLBCL多見(jiàn)，占結(jié)外淋巴瘤52.9%（9/17），病變以胃竇為主，呈結(jié)節(jié)息肉狀2例?彌漫浸潤(rùn)型4例?潰瘍型3例，胃DLBCL以彌漫浸潤(rùn)性生長(zhǎng)為主，破壞黏膜及腺體，替代固有間質(zhì)，晚期浸潤(rùn)肌層及胃壁全層形成包塊或潰瘍?瘤細(xì)胞體積大?核大?核仁清楚?核分裂像易見(jiàn)，細(xì)胞凋亡多見(jiàn)，細(xì)胞粘附力差，排列松散，瘤細(xì)胞不表達(dá)CEA 及CK而表達(dá)CD45，不同于未分化癌?免疫組化結(jié)果：36例全部表達(dá)B細(xì)胞標(biāo)記，CD20呈細(xì)胞質(zhì)?細(xì)胞膜彌漫陽(yáng)性，83.3%（30/36）病例Ki67>40%，36.1%（13/36）表達(dá)MUM1，69.4%（25/36）表達(dá)bcl-2，38.8%（14/36）表達(dá) bcl-6，13.8%（5/36）病例表達(dá)CD10，少數(shù)病例表達(dá)CD5（1例），CD30（2例），瘤細(xì)胞不表達(dá) CK ?CEA ?CD3?ALK?依據(jù)Hans分型方法GCB型13例（36.1%），non-GCB型23例（63.9%），與文獻(xiàn)報(bào)道一致?臨床采用CHOP（環(huán)磷酰胺+多柔比星+長(zhǎng)春新堿+潑尼松）及 R-CHOP（美羅華加CHOP）化療方案治療，隨訪2-34月，17例建在，病情穩(wěn)定，9例死亡，10例失去聯(lián)系?

3 結(jié)論

彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤（DLBCL）是一組臨床表現(xiàn)?形態(tài)學(xué)?免疫表型及分子生物學(xué)各異的淋巴瘤，西方國(guó)家占成人25-30%，發(fā)展中國(guó)家比例更高40%-43.3%為最常見(jiàn)的NHL類(lèi)型?各年齡段均可發(fā)病，好發(fā)于老年人，中位年齡70歲，但青少年也可發(fā)生，淋巴結(jié)及結(jié)外均可發(fā)生，約40%發(fā)生于結(jié)外，而且以胃腸道最為常見(jiàn)?也可以發(fā)生于骨??脾臟?咽淋巴環(huán)?涎腺?肝?腎?皮膚?中樞神經(jīng)系統(tǒng)?女生殖道?肺等?因此臨床病理診斷及免疫組化在鑒別診斷及淋巴瘤分類(lèi)中具有重要意義?

參考文獻(xiàn)

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關(guān)鍵詞：纖支鏡；活檢；小細(xì)胞；腫瘤；免疫組化；病理診斷

肺癌是我國(guó)最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，近年來(lái)其發(fā)病率和病死率不斷上升。小細(xì)胞肺癌（SCLC）占全部肺癌的15%～20%，是一種高度惡性腫瘤，生長(zhǎng)迅速，可早期發(fā)生轉(zhuǎn)移，目前主要采取以化療和放療為主的綜合治療措施[1]。隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)的不斷進(jìn)步和臨床需求，纖支鏡活檢技術(shù)在肺部疾患如腫瘤病理診斷中的應(yīng)用越來(lái)越廣泛。多數(shù)情況下，SCLC經(jīng)過(guò)病理醫(yī)師光鏡下閱片就能得到確診。少數(shù)情況下因腫瘤細(xì)胞量少、壞死及受機(jī)械擠壓變形等因素的影響，難于僅憑HE切片確診，此時(shí)需借助免疫組化標(biāo)記進(jìn)行輔助診斷，并與肺原發(fā)系列小細(xì)胞性惡性腫瘤及轉(zhuǎn)移瘤鑒別。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2010年1月～2012年1月我院收治的經(jīng)纖支鏡活檢確診的小細(xì)胞惡性腫瘤患者，共35例，其中住院患者33例，門(mén)診2例，男性25例，女性10例。確診為SCLC的31例，經(jīng)典型類(lèi)癌1例，不典型類(lèi)癌1例，轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌（RCC）1例，ALK+間變性大細(xì)胞淋巴瘤（ALCL）1例。臨床表現(xiàn)根據(jù)發(fā)生頻率高低依次為咳嗽、氣促、痰血或咯血、胸痛、胸悶，個(gè)別伴發(fā)熱、聲嘶，無(wú)明顯肺部癥狀2例。臨床首診為肺癌的22例，結(jié)核3例，炎癥6例；"高血壓病"、"四肢乏力"、頸部腫塊各1例，因反復(fù)上腹痛伴黑便而診斷為"消化性潰瘍"1例。上述所有不同類(lèi)型肺原發(fā)癌的患者年齡40～78歲，平均60.53歲，伴有不同程度胸腔積液的5例。肺癌TNM分期，30例處于Ⅲ、Ⅳ期，3例Ⅱ期（含經(jīng)典型和不典型類(lèi)癌各1例）；RCC和ALCL患者均為男性，年齡分別76和49歲。

胸部CT：多表現(xiàn)為肺部團(tuán)塊狀、斑片狀或大片密度增高影或占位，伴或不伴支氣管閉塞或狹窄及肺不張。部分病例縱膈或肺門(mén)淋巴結(jié)增大考慮轉(zhuǎn)移；影像學(xué)提示肝轉(zhuǎn)移的2例，其中1例同時(shí)伴右腎上腺轉(zhuǎn)移。支氣管活檢部位：右上葉3例，右中葉2例，右下葉6例，右中下葉3例，右主1例，左上葉3例，左下葉6例，左舌葉4例，左主4例。表現(xiàn)為新生物生長(zhǎng)的20例，其中伴支氣管堵塞者8例，伴管腔狹窄者12例；粘膜顆粒狀或粗糙者11例?；顧z易出血者14例。

1.2方法 標(biāo)本均經(jīng)過(guò)4%的中性甲醛固定、石蠟包埋及常規(guī)連續(xù)切片。切片經(jīng)脫蠟、水化后放入PBS沖洗，檸檬酸緩沖液中微波處理修復(fù)；以3%的過(guò)氧化氫室溫孵育10 min阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，依次加入抗體室溫孵育，PBS沖洗，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，光鏡下觀察。用已知的陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗作為空白對(duì)照。全部單克隆抗體SP法試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司。

1.3免疫組化判讀 結(jié)果由兩位病理醫(yī)師獨(dú)立觀察每張免疫組化切片后做出判斷。CD56、CgA、Syn、CD10、CD30、RCC的陽(yáng)性表達(dá)均為細(xì)胞膜和（或）胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒沉積；ALK陽(yáng)性定位于胞質(zhì)/胞核；LCA、CD20、CD3陽(yáng)性定位于包膜；Vim陽(yáng)性定位于胞質(zhì)；TTF-1、Ki67陽(yáng)性定位于細(xì)胞核。陽(yáng)性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)文獻(xiàn)[2]。

2結(jié)果

2.1巨檢 組織1～8粒，每粒組織直徑0.01～0.1 cm，灰白色或灰白灰褐色。

2.2鏡檢 31例確診的SCLC活檢標(biāo)本，光鏡下最突出的特征：粘膜下纖維間質(zhì)或平滑肌束中見(jiàn)胞核深染、異型、小的瘤細(xì)胞呈不規(guī)則巢狀、條索狀或片狀浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，胞核圓形或卵圓形淋巴細(xì)胞樣、雀麥形或因受擠壓而成不規(guī)則形，擠壓嚴(yán)重的牽拉呈深藍(lán)色絲狀，染色質(zhì)致密、細(xì)顆粒狀，核仁不明顯，瘤細(xì)胞僅2～3倍淋巴細(xì)胞大小。少數(shù)病例可見(jiàn)瘤細(xì)胞圍繞血管排列和菊形團(tuán)結(jié)構(gòu)，或伴有不同程度腫瘤性凝固性壞死。間質(zhì)改變有瘤組織中可見(jiàn)較多血管增生，多為擴(kuò)張的毛細(xì)血管或血竇，并伴有癌性纖維間質(zhì)反應(yīng)。因染色較深，核分裂像計(jì)數(shù)不易判斷。上述患者均同時(shí)進(jìn)行纖支鏡刷片細(xì)胞學(xué)檢查作為對(duì)照，涂片發(fā)現(xiàn)SCLC的有16例，高疑11例；發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞，傾向鱗癌的1例；未發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的3例。陽(yáng)性率90.3%。

經(jīng)典型類(lèi)癌患者，光鏡下見(jiàn)瘤組織排列呈緞帶樣、條索狀，小的玫瑰花環(huán)樣微小腺泡狀或器官樣，間質(zhì)富于血竇，瘤細(xì)胞形態(tài)溫和、單形性明顯，胞漿較豐富、透明或粉紅色顆粒樣；胞核圓形、多角形或梭形，染色質(zhì)粗糙點(diǎn)彩狀（椒鹽狀），偶見(jiàn)小的核仁。核分裂像1～2個(gè)/10 HPF，腫瘤壞死不明顯。

不典型類(lèi)癌患者鏡檢：瘤組織呈不規(guī)則巢狀、片狀浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，或圍繞血管排列，瘤細(xì)胞異型性比經(jīng)典型類(lèi)癌更明顯，核漿比更高，可見(jiàn)明顯核仁。瘤巢中央見(jiàn)小灶粉刺樣壞死。核分裂像多>5個(gè)/10 HPF。

肺轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌患者鏡檢：瘤組織呈不規(guī)則巢狀、腺泡狀、條索狀或片狀排列，瘤細(xì)胞胞漿透亮，胞核中位，圓形或卵圓形，淋巴細(xì)胞大小，無(wú)明顯異型性。無(wú)腫瘤壞死，核分裂不易見(jiàn)，間質(zhì)富于血管或血竇，并見(jiàn)較多新生血管。

惡性淋巴瘤患者鏡檢：粘膜下見(jiàn)深染明顯異型淋巴樣細(xì)胞彌漫性浸潤(rùn)，沒(méi)有成巢的特點(diǎn)，瘤細(xì)胞大、胞界清楚，核圓形或腎形，核仁顯著，伴有小血管增生，部分瘤細(xì)胞已擠壓變形。該病例除了發(fā)現(xiàn)雙肺部多發(fā)結(jié)節(jié)、右肺門(mén)及縱膈淋巴結(jié)腫大外，同時(shí)發(fā)現(xiàn)左頜下腫大淋巴結(jié)一枚，約1.5 cm×2.0 cm大小，請(qǐng)耳鼻喉科會(huì)診，取活檢證實(shí)為惡性淋巴瘤，與纖支鏡活檢病變一致。

2.3免疫組化結(jié)果 SCLC組別中，4例未做免疫組化標(biāo)記，因光鏡下形態(tài)學(xué)典型而直接診斷為SCLC，余27例均行免疫組化檢測(cè)，結(jié)果為CK、CD56恒定陽(yáng)性；TTF1除了1例弱（+），2例陰性外均彌漫強(qiáng)（+），陽(yáng)性率92.6%；Syn僅1例陰性表達(dá)，陽(yáng)性率96.3%；CgA陰性者4例，弱陽(yáng)性3例，陽(yáng)性率85.2%；Ki67核增殖指數(shù)多數(shù)病例>50%，少數(shù)病例30%左右。

經(jīng)典型和不典型類(lèi)癌細(xì)胞CD56、Syn、CgA、CK均（+）和TTF1（-），Ki67陽(yáng)性率分別為1%和15%；轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌表達(dá)RCC、CD10、Vim、AE1/AE3；ALCL陽(yáng)性表達(dá)CD3，CD30和ALK。

2.4病理診斷 確診SCLC共31例，經(jīng)典型類(lèi)癌和不典型類(lèi)癌各1例，轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌1例，ALK陽(yáng)性間變性大細(xì)胞淋巴瘤1例。

2.5隨訪 經(jīng)典型和不典型類(lèi)癌患者均行手術(shù)根治性切除，隨訪2年無(wú)復(fù)發(fā)；SCLC多為患者20例轉(zhuǎn)入腫瘤內(nèi)科進(jìn)行正規(guī)輔助放、化療，5例進(jìn)行了姑息性手術(shù)切除，6例放棄治療，隨訪時(shí)間9～24個(gè)月，死于惡病質(zhì)或廣泛轉(zhuǎn)移的23例，5例仍健在，3例因家屬拒絕而失訪。轉(zhuǎn)移性RCC患者隨訪2年已全身廣泛轉(zhuǎn)移仍健在，ALCL正規(guī)化療5周期腫瘤無(wú)進(jìn)展。

3討論

纖支鏡活檢適用于中央型肺癌的診斷，SCLC診斷的確立，多數(shù)情況下有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)生通過(guò)光鏡觀察HE切片就能得到確診。少數(shù)情況下因?yàn)樗蜋z組織少，組織嚴(yán)重?cái)D壓變形或因壞死多而影響診斷。此時(shí)通過(guò)免疫組化標(biāo)記往往能幫助確診。常用抗體有TTF1，Syn，CgA，CD56，AE1/AE3，Ki-67和LCA。SCLC多為前5項(xiàng)抗體陽(yáng)性，Ki-67核增殖指數(shù)高表達(dá)，LCA陰性。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)組免疫組化檢測(cè)結(jié)果分析，SCLC恒定陽(yáng)性的抗體有CD56和AE1/AE3，個(gè)別也有TTF1、Syn、CgA陰性表達(dá)的情況，此時(shí)聯(lián)合此五項(xiàng)抗體檢測(cè)有助于確診，而且陽(yáng)性抗體項(xiàng)目越多越支持診斷。KOTOGIANNI等[3]研究20例SCLC活檢標(biāo)本結(jié)果顯示，該組織中CD56均呈陽(yáng)性表達(dá)，甚至受擠壓部分的腫瘤組織中CD56也有較高的表達(dá)。HIROSHIMA等[4]研究顯示，TTF1是SCLC的一種敏感而特異的免疫標(biāo)記物，其陽(yáng)性表達(dá)率為80%～90%。本組為92.6%，略高于上述水平。作為傳統(tǒng)的神經(jīng)內(nèi)分泌標(biāo)志物，本研究中Syn、CgA的陽(yáng)性表達(dá)率要比以往文獻(xiàn)報(bào)道的水平偏高，且由于此兩項(xiàng)抗體表達(dá)的高特異性，應(yīng)用Syn及CgA對(duì)SCLC的協(xié)助診斷很有幫助。此外，纖支鏡刷片配合活檢，能相互補(bǔ)充，提高SCLC診斷準(zhǔn)確率。經(jīng)典型類(lèi)癌、不典型類(lèi)癌和小細(xì)胞癌同屬于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤，分別相當(dāng)于神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級(jí)（或高、中、低分化神經(jīng)內(nèi)分泌癌），上述3種腫瘤具有惡性程度和侵襲性生物學(xué)行為由低到高，核分裂像由少到多，腫瘤壞死有少或局限到廣泛的特點(diǎn)。

肺轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌的診斷的確立，光鏡下組織學(xué)形態(tài)是基礎(chǔ)，比如透明細(xì)胞巢，瘤細(xì)胞異型性小，血竇豐富。追問(wèn)病史，本例患者既往有腎癌腎切除病史，影像學(xué)提示雙肺、雙側(cè)胸膜多發(fā)結(jié)節(jié)改變，考慮轉(zhuǎn)移瘤，結(jié)合免疫組化RCC，CD10，Vim，AE1/AE3表達(dá)，最終確診為肺轉(zhuǎn)移性腎透明細(xì)胞癌。

復(fù)習(xí)文獻(xiàn)，絕大多數(shù)肺惡性淋巴瘤為B細(xì)胞來(lái)源的低度惡性MALT淋巴瘤，其次為淋巴瘤樣肉芽腫病，彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤極其少見(jiàn)。間變性大細(xì)胞淋巴瘤極罕見(jiàn)，至2011年3月，報(bào)道僅10多例。患者年齡27～58歲，無(wú)性別差異[5]。臨床表現(xiàn)多為肺實(shí)質(zhì)單個(gè)結(jié)節(jié)，亦可為雙側(cè)多結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)大小1.1～5.0 cm，有的在支氣管內(nèi)形成息肉樣包塊?；颊呖捎邪l(fā)熱、咳嗽、體重減輕。病理改變?yōu)榇蟮牧馨蜆恿黾?xì)胞在肺實(shí)質(zhì)呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng)，肺泡壁增寬，并在肺泡腔內(nèi)播散。瘤細(xì)胞大，間變明顯，胞界清楚，胞質(zhì)嗜酸性或嗜堿性，似上皮細(xì)胞，核呈圓形或腎形，核仁顯著，亦可見(jiàn)雙核及多核瘤細(xì)胞。其間可混雜多少不等的小淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、組織細(xì)胞、嗜酸性和中性粒細(xì)胞。ALCL免疫組化特征：瘤細(xì)胞LCA大多（+） ，T細(xì)胞標(biāo)記CD3大多（+），CD30100%強(qiáng)陽(yáng)性（細(xì)胞膜及Golgi區(qū)），ALK（+），CD20及CD15（-），CK（-）。

總之，免疫組化在協(xié)助診斷肺小細(xì)胞性惡性腫瘤特別是SCLC方面起到舉足輕重的作用。確診依賴(lài)于病理醫(yī)生扎實(shí)的病理形態(tài)學(xué)基礎(chǔ)，適當(dāng)?shù)拿庖呓M化抗體的選擇。免疫組化運(yùn)用得當(dāng)，將極大地提高腫瘤病理診斷準(zhǔn)確率和有效進(jìn)行鑒別診斷。

參考文獻(xiàn)：

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