導(dǎo)語(yǔ)：甘草中甘草酸含量測(cè)定論文一文來(lái)源于網(wǎng)友上傳，不代表本站觀點(diǎn)，若需要原創(chuàng)文章可咨詢(xún)客服老師，歡迎參考。

【關(guān)鍵詞】甘草

甘草為豆科植物甘草(glycyrrhizauralensisfisch)、脹果甘草（glycyrrhizainflatabat）或光果甘草(glycyrrhizaglabral)的干燥根及根莖，始載于《本經(jīng)》，藥用歷史悠久。其功能補(bǔ)脾益氣、潤(rùn)肺止咳、緩急止痛、清熱解毒、緩和藥性。主要含有甘草酸及甘草苷類(lèi)成分，其中甘草酸為現(xiàn)代藥理應(yīng)用研究證實(shí)具有抗纖維化、抗炎、抗病毒和保肝解毒及增強(qiáng)免疫功能等作用［1］。目前針對(duì)甘草的內(nèi)在質(zhì)量控制，主要圍繞甘草酸成分進(jìn)行定性、定量一類(lèi)的檢查。2005版《中國(guó)藥典》收載了RP-HPLC三元等度洗脫法測(cè)定甘草酸的方法，規(guī)定甘草酸含量不得低于2%［2］。本實(shí)驗(yàn)依托2005版《中國(guó)藥典》一部甘草酸含量測(cè)定（附錄VID）項(xiàng)下操作主線，采用RP-HPLC法測(cè)定甘草酸的含量，方法簡(jiǎn)便、快速，重現(xiàn)性好，結(jié)果穩(wěn)定，用于甘草酸的檢測(cè)專(zhuān)屬性強(qiáng)，

1儀器與試劑

1.1儀器

Agilend1100系列液相色譜儀、四元泵、在線真空脫氣、DAD檢測(cè)器、化學(xué)工作站、1200型自動(dòng)進(jìn)樣器。

1.2試劑

甘草酸單銨鹽（monoam0niumglycyrrhitinate）對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；甘草(glycyrrhizainflatabat)樣品，產(chǎn)地新疆（華東醫(yī)藥股份有限公司）；甲醇（色譜純）、醋酸銨（分析純）、冰醋酸（分析純）、水（雙蒸水）。

2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1色譜條件

美國(guó)ZORBAXExundC18分析柱（4.6mm×250mm,5μm）為固定相；甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67∶33∶1）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)250nm；流速1ml·min-1；柱溫為室溫。柱效以甘草酸計(jì)，理論塔板數(shù)不應(yīng)低于2000。結(jié)果被測(cè)成分于7min內(nèi)即可出完，三元等度洗脫全程為0～20min。記錄的色譜圖結(jié)果見(jiàn)圖1，2。

2.2對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取80℃干燥至恒重的甘草酸單銨鹽0.1g對(duì)照品，置100ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，使成每ml含有甘草酸單銨鹽1mg對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的制備

取甘草，研細(xì)（過(guò)3號(hào)篩），置烘箱內(nèi)80℃干燥至恒重，精密稱(chēng)取0.3g，置100ml量瓶中，加流動(dòng)相約45ml，超聲處理（功率250W，頻率20KH2）30min，取出，放冷，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4測(cè)定方法

精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對(duì)照品溶液色譜圖中甘草酸的峰面積（3次平均）外標(biāo)法計(jì)算甘草中甘草酸的含量（%，W/W）。

2.5線性關(guān)系

精密吸取對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、8.0、10.0ml于100ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，分別進(jìn)樣10μl，記錄峰面積。以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），峰面積(A)為縱坐標(biāo)(Y)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。甘草酸回歸方程為Y=3.00029X+1.23099r=0.99989，線性范圍0.1033～1.0330μg。

2.6精密度試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液與上述色譜條件下進(jìn)樣10μl，重復(fù)5次，以被測(cè)成分峰面積分別計(jì)算，結(jié)果甘草酸RSD=1.21%。

2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液10μl，分別于0、2、4，6、8h進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果甘草酸RSD=1.45%。(n=5)。

2.8重現(xiàn)性試驗(yàn)

取同一批次甘草藥材按2.3項(xiàng)下提取制備5份供試溶液，分別精密吸取10μl進(jìn)樣，記錄峰面積，結(jié)果甘草酸RSD=1.32%。

2.9回收率測(cè)定

取已知含量的甘草樣品粉末約0.2g，精密稱(chēng)定9份，置10ml的量瓶中，樣本中添加1mg/ml甘草酸對(duì)照品溶液1ml，按2.3項(xiàng)下操作，進(jìn)樣10μl，依2.4法測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算回收率，甘草酸平均回收率為99.04%RSD=0.79%，結(jié)果見(jiàn)表1。表1甘草酸加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）

2.10樣品測(cè)定

取6批樣品，按2.3項(xiàng)下提取制備，依2.4項(xiàng)方法測(cè)定，重復(fù)測(cè)定3次，結(jié)果生藥甘草的平均含量為7.85%RSD=0.85%。

3討論

3.1洗脫溶劑系統(tǒng)的選擇

本實(shí)驗(yàn)為RP-HPLC三元等度洗脫法。選擇甲醇-0.2mol/L醋酸銨溶液-冰醋酸（67：33：1）作為洗脫溶劑，是基于甘草酸對(duì)三元等度洗脫系統(tǒng)的適應(yīng)性的考量。脹果甘草中含有甘草酸、甘草苷等成分，因此只要選擇適宜的洗脫溶劑系統(tǒng)，以促使各組分的分配系數(shù)較大，達(dá)到基線分離的效果。實(shí)驗(yàn)證明該方法簡(jiǎn)單、易行，設(shè)備要求相較梯度洗脫為低，早期一類(lèi)設(shè)備都可用于檢測(cè)，且抗干擾性強(qiáng)，具有專(zhuān)屬性特點(diǎn)。

3.2關(guān)于甘草酸

由生藥甘草中提取的甘草酸，通常稱(chēng)之天然甘草酸，天然甘草酸存在順?lè)串悩?gòu)，且以順式甘草酸含量為高，反式甘草酸含量極低。本實(shí)驗(yàn)未能揭示該異構(gòu)體基線分離，可能與該異構(gòu)體化學(xué)結(jié)構(gòu)相似抑或是脹果甘草本身未含有反式甘草酸有關(guān)，尚待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

1張劍峰，張丹參.甘草酸藥理作用的研究進(jìn)展.河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2005，22(4):82.

2國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.60.