動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展范文
時(shí)間:2023-10-27 17:51:36
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篇1
1蛋白質(zhì)組學(xué)常用研究技術(shù)
蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)主要包括基于二維電泳(two-dimensionelectrophoresis,2DE)、高效液相色譜(highperfoemanceliquidchromatography,HPLC)等蛋白質(zhì)分離技術(shù);與數(shù)據(jù)庫(kù)搜索相結(jié)合的同位素標(biāo)記定量質(zhì)譜(isotope-codedaffinitytag)、熒光差異凝膠電泳(differenceingelelectrophoresis,DIGE)表面增強(qiáng)激光解吸/離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜(surfaceenhancedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,SELDI-TOFMS)、電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS/MS)等蛋白質(zhì)定量和鑒定技術(shù)[6]。近年來蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在疾病研究方面表現(xiàn)出了獨(dú)特的優(yōu)越性并取得了顯著的成績(jī)。
2蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物細(xì)菌性疾病研究中的應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物細(xì)菌性疾病中研究范圍涉及細(xì)菌在不同環(huán)境下蛋白表達(dá)譜的變化、篩選疫苗候選蛋白以及鑒定與細(xì)菌的致病及耐藥機(jī)制相關(guān)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)[7]。在完成羊種布魯菌強(qiáng)毒株16M蛋白質(zhì)組表達(dá)圖譜的基礎(chǔ)上,比較了牛源布魯菌強(qiáng)毒株和疫苗株蛋白質(zhì)組差異。結(jié)果表明,強(qiáng)弱毒菌株在鐵代謝、糖結(jié)合、脂代謝及蛋白合成等方面有一定差異,從分子水平上解釋了強(qiáng)弱毒菌株在代謝途徑上的關(guān)鍵區(qū)別[8]。陳煥春等以2006年引起人發(fā)病死亡的2型豬鏈球菌(SS2)的四川分離株SC-21為研究對(duì)象,利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究了其在37℃(對(duì)照條件)和42℃(模擬發(fā)病豬的體溫)培養(yǎng)條件下的分泌蛋白圖譜的差異,并鑒定了5個(gè)差異蛋白,為揭示SS2的致病機(jī)理、篩選藥物靶標(biāo)以及新型疫苗的研究提供了部分依據(jù)[9]。劉國(guó)勇等[10]利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析柱狀黃桿菌強(qiáng)毒株G4R3和弱毒株G18的胞外蛋白,共發(fā)現(xiàn)了34差異蛋白質(zhì)點(diǎn),鑒定出其中的7個(gè)蛋白點(diǎn),分析后認(rèn)為滑動(dòng)蛋白K、腺酐甲硫氨酸合成酶和膜蛋白可能是柱狀黃桿菌的毒力因子。TavernaF等[11]建立了奶牛炎病原金黃色葡萄球菌細(xì)胞表面可溶性蛋白2-DE參考圖譜,為比較金黃色葡萄球菌不同菌株對(duì)奶牛的致病性和分析鑒定疫苗候選抗原奠定了重要基礎(chǔ)。ZicbandtAK等[12]對(duì)兩株不同的金黃色葡萄球菌RN6390和Col株研究發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)葡萄糖激酶和脂肪酶蛋白質(zhì)點(diǎn)存在于RN6390菌株中,而IgG結(jié)合蛋白、腸毒素、白細(xì)胞毒素D、腸毒素B等9種蛋白質(zhì)點(diǎn)只存在于Col菌株中存在,為深入研究金黃色葡萄球菌的耐藥機(jī)制和致病機(jī)制奠定了分子基礎(chǔ)。
3蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物病毒性疾病研究中的應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物病毒性疾病中的研究主要集中在病毒感染后誘導(dǎo)宿主細(xì)胞蛋白質(zhì)組改變以及病毒感染的宿主血清/血漿差異蛋白質(zhì)組研究等方面,如為揭示PK-15細(xì)胞感染CSFV后蛋白質(zhì)組的變化,利用蛋白組學(xué)技術(shù)從感染48h的細(xì)胞中尋找并鑒定了35個(gè)差異表達(dá)蛋白質(zhì)點(diǎn)。Westernblot分析證實(shí)了膜連蛋白2上調(diào)表達(dá),甘油三磷酸脫氫酶(GAPDH)下調(diào)表達(dá)[13]。這些差異表達(dá)的蛋白是PK-15細(xì)胞對(duì)CSFV感染的特征性反應(yīng),有助于進(jìn)一步研究CSFV的感染機(jī)理。進(jìn)一步對(duì)感染CSFV豬血清進(jìn)行了差異蛋白質(zhì)組分析,鑒定了14種差異表達(dá)蛋白,其中的急性期蛋白接聯(lián)珠蛋白(haptoglo-bin)、補(bǔ)體成分C4a、載脂蛋白A-1(apolipoproteinA-1)已被鑒定為其他疾病如乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)感染或相關(guān)癌癥的潛在生物標(biāo)記[14]。同樣,鑒定的這些蛋白具也有作為CS-FV感染生物標(biāo)記的潛能。DhingraV等[15]研究發(fā)現(xiàn),野生型狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)感染能誘導(dǎo)與離子平衡有關(guān)的蛋白H+ATP酶和Na+/K+ATP酶上調(diào)表達(dá),而Ca2+ATP酶下調(diào)表達(dá),這些參與突觸泡與突出前膜對(duì)接或融合的相關(guān)蛋白下調(diào)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Na+和Ca2+濃度降低和感染鼠的前聯(lián)會(huì)積聚大量突出泡,而弱毒RV感染沒有類似現(xiàn)象,這可能是野生型RV致神經(jīng)機(jī)能障礙的機(jī)制。另外還發(fā)現(xiàn),弱毒RV感染介導(dǎo)凋亡相關(guān)蛋白上調(diào)表達(dá),而野生型RV沒有這種現(xiàn)象,這一發(fā)現(xiàn)解釋了僅有弱毒RV感染才能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。王娜[16]利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析了豬繁殖與呼吸綜合征病毒071030株和福州株接種Marc-145細(xì)胞后蛋白質(zhì)組學(xué)差異,為進(jìn)一步研究PRRSV毒株間的致病力差異提供了分子基礎(chǔ)。ZhangX等[17]用蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)技術(shù)發(fā)現(xiàn)在PCV-2感染PK15細(xì)胞后α微管蛋白、β肌動(dòng)蛋白、及細(xì)胞角蛋白8發(fā)生了變化,為進(jìn)一步理解PCV-2與宿主的相互作用奠定了基礎(chǔ)。
4蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物寄生蟲病研究中的應(yīng)用
蛋白質(zhì)組學(xué)用于動(dòng)物寄生蟲病研究主要集中于對(duì)不同生活史階段發(fā)育相關(guān)蛋白圖譜以及發(fā)現(xiàn)藥物靶蛋白和疫苗候選蛋白等方面。近年來,蛋白質(zhì)組學(xué)在以血吸蟲為代表的重大疾病研究中得到廣泛應(yīng)用。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),分離、鑒定出日本血吸蟲天然分子質(zhì)量31ku~32ku抗原組分,發(fā)現(xiàn)其中3個(gè)蛋白點(diǎn)與這些天然分子中起保護(hù)性的有效分子相關(guān)[18-19]。DvorkJ等[20]對(duì)日本血吸蟲進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析,鑒定了361個(gè)蛋白質(zhì),其中15種為蛋白酶,并且組織蛋白酶B2能夠消化宿主的表皮和結(jié)締組織。YangLL等[21]利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分離、鑒定日本血吸蟲正常尾蚴及紫外線致弱尾蚴蟲體間差異蛋白,分析得出20個(gè)差異表達(dá)蛋白,分別于細(xì)胞代謝、遞呈、酶促反應(yīng)等血吸蟲生命活動(dòng)相關(guān)。GardnerMJ等[22]應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分別研究了惡性瘧原蟲在孢子期、裂殖體期、滋養(yǎng)體期和配子體期的蛋白質(zhì)組變化。鑒別了惡性瘧原蟲1289種蛋白質(zhì),其中包括無性生殖期714種、配子體期931種和配子期645種。CohenAM等[23]以對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期剛地弓形蟲為研究對(duì)象,用pH4~7和pH6~11分離到1000余種多肽,分離到3000~4000種多肽。
5蛋白質(zhì)組學(xué)在動(dòng)物其他疾病及相關(guān)領(lǐng)域研究中的應(yīng)用
隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的發(fā)展,該技術(shù)也在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)代謝疾病以及克隆動(dòng)物研究領(lǐng)域中逐步得到應(yīng)用。如EdvardssonU等[24]以高三酰甘油、高血糖和高胰島素血癥的小鼠作為臨床肥胖癥和胰島素抵抗模型,給予PPAR-α特異性頡頏劑。結(jié)果表明,治療后1周血漿三酰甘油、高血糖和高胰島素水平明顯降低,蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)至少有16個(gè)蛋白質(zhì)位點(diǎn)表達(dá)上調(diào),其中有14種為過氧化物酶體脂肪酸代謝有關(guān)的蛋白質(zhì)。ChaeJI[25]等利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析了體細(xì)胞核移植技術(shù)克隆的成年豬胰臟蛋白質(zhì)組的變化發(fā)現(xiàn)了69種差異蛋白質(zhì)。在體細(xì)胞核移植樣本中,與細(xì)胞調(diào)往相關(guān)的膜連蛋白,核纖層蛋白,熱休克蛋白都發(fā)生了上調(diào)表達(dá)。而抗氧化蛋白和過氧化氫酶發(fā)生了下調(diào)表達(dá)。Westenblot鑒定結(jié)果顯示抗氧化蛋白酶和抗凋亡蛋白也發(fā)生了下調(diào)表達(dá),而凋亡蛋白酶卻發(fā)生了上調(diào)表達(dá)。該結(jié)果提示克隆成年豬胰臟中活性氧自由基的積累導(dǎo)致了細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
篇2
(一)強(qiáng)力推進(jìn)學(xué)前教育三年行動(dòng)計(jì)劃。
2012年必須落實(shí)省定450所公辦幼兒園建設(shè)的具體項(xiàng)目、地點(diǎn)、改擴(kuò)建或新建面積和資金來源。各地要根據(jù)省政府提出的三年內(nèi)每個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)至少建設(shè)1所公辦中心幼兒園的要求,結(jié)合本地三年行動(dòng)計(jì)劃,抓緊研究部署今明兩年的任務(wù)。
要積極爭(zhēng)取國(guó)家“城市學(xué)前教育發(fā)展獎(jiǎng)補(bǔ)資金”和“扶持民辦幼兒園發(fā)展獎(jiǎng)補(bǔ)資金”的支持,制訂具體政策措施,扶持好城市集體、企事業(yè)單位辦園和普惠性、低收費(fèi)、有質(zhì)量的民辦幼兒園;堅(jiān)持以流入地政府和普惠性幼兒園為主,積極推動(dòng)各地解決進(jìn)城務(wù)工人員隨遷子女入園。
推進(jìn)“農(nóng)村學(xué)前教育投入及管理體制改革試點(diǎn)”工作。這是我省承擔(dān)的國(guó)家試點(diǎn)任務(wù),各地必須給予高度重視。2011年底,省里業(yè)已制發(fā)《幼兒園機(jī)構(gòu)編制管理實(shí)施辦法》,明確了公辦幼兒園教職工編制解決辦法,各地要抓緊推進(jìn)落實(shí)。要重點(diǎn)面向社會(huì)招聘學(xué)前教育專業(yè)畢業(yè)的專任教師,對(duì)轉(zhuǎn)崗的中小學(xué)教師要嚴(yán)格考核,切實(shí)提高“保教”質(zhì)量。
隨著學(xué)前教育加快發(fā)展,管理任務(wù)更加繁重,管理難度劇增。要糾正“小學(xué)化”的教育內(nèi)容和方式,整治“小學(xué)化”教育環(huán)境,嚴(yán)格執(zhí)行義務(wù)教育招生政策,逐步取消小學(xué)附設(shè)學(xué)前班,健全學(xué)前教育教研制度,建立起科學(xué)的幼兒園保育教育質(zhì)量監(jiān)測(cè)機(jī)制。依據(jù)法律規(guī)定,要通過審批、年檢、評(píng)估和督導(dǎo)等方式,強(qiáng)化動(dòng)態(tài)監(jiān)管,著力規(guī)范幼兒園辦園行為和保教工作。
(二)大力推進(jìn)縣域義務(wù)教育均衡發(fā)展。
要繼續(xù)堅(jiān)持“區(qū)域統(tǒng)籌、縣域推進(jìn)、改造薄弱、促進(jìn)均衡”的原則,全力落實(shí)教育部與省政府簽署的備忘錄和省政府與各地市政府簽訂的責(zé)任書,確保完成建設(shè)400所標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)校,實(shí)現(xiàn)年度階段性義務(wù)教育均衡發(fā)展的工作任務(wù)。
進(jìn)一步明確基本均衡的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和工作要求。各地要依據(jù)這一評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),按照責(zé)任狀確定的建設(shè)進(jìn)度,統(tǒng)籌好各方面工作。加大投入力度、加快建設(shè)步伐。教育部從2012年開始,要組織開展義務(wù)教育基本均衡發(fā)展縣的認(rèn)定驗(yàn)收。為此,各地要切實(shí)落實(shí)省政府《關(guān)于進(jìn)一步推進(jìn)縣域義務(wù)教育均衡發(fā)展的若干意見》,嚴(yán)格按照確定的建設(shè)進(jìn)度,統(tǒng)籌安排各方面資源,整合人力、物力、財(cái)力,切實(shí)加快建設(shè)步伐,確保按規(guī)劃的時(shí)間完成建設(shè)任務(wù),并通過教育部驗(yàn)收。及時(shí)解決好工作推進(jìn)中出現(xiàn)的新矛盾、新問題。要在縣域內(nèi)科學(xué)、合理布局中小學(xué)校網(wǎng)點(diǎn)。要按照教育規(guī)劃綱要部署,從實(shí)際出發(fā),統(tǒng)籌兼顧城鎮(zhèn)化發(fā)展、新農(nóng)村建設(shè)和城鄉(xiāng)學(xué)齡人口變化等因素,科學(xué)調(diào)整學(xué)校布局,建好必要的教學(xué)點(diǎn),堅(jiān)決防止和糾正因?qū)W校布局調(diào)整出現(xiàn)學(xué)生就學(xué)困難、學(xué)校班額過大等問題。要貫徹“縣域統(tǒng)籌、傾斜薄弱”的原則要求,加快農(nóng)村學(xué)校和薄弱學(xué)校標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè),提高義務(wù)教育學(xué)校標(biāo)準(zhǔn)化率,縮小縣域內(nèi)城鄉(xiāng)、校際間辦學(xué)差距。在教師、校長(zhǎng)交流上加大改革力度,破除體制機(jī)制障礙。省里要制發(fā)推進(jìn)縣域內(nèi)教師、校長(zhǎng)交流的指導(dǎo)意見,各地要結(jié)合實(shí)際,采取多種措施,加強(qiáng)保障,積極探索,穩(wěn)步推進(jìn)。及時(shí)總結(jié)推廣成功經(jīng)驗(yàn)做法。2012年要召開17個(gè)義務(wù)教育標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)校建設(shè)試點(diǎn)縣工作推進(jìn)會(huì),召開“學(xué)區(qū)制”辦學(xué)模式改革牡丹江現(xiàn)場(chǎng)會(huì)。
(三)深入推進(jìn)普通高中多樣化發(fā)展。
全省普通高中教育工作要在2011年良好布局開局基礎(chǔ)上,繼續(xù)以推進(jìn)高中教育普及為目標(biāo),進(jìn)一步深入推進(jìn)普通高中多樣化特色化發(fā)展。一是以市地為單位,對(duì)全省普通高中進(jìn)行普查,對(duì)未達(dá)標(biāo)的薄弱高中由地方政府制訂整改計(jì)劃,全面加強(qiáng)普通高中達(dá)標(biāo)建設(shè)。二是深化區(qū)域和學(xué)校改革試點(diǎn)工作,建立普通高中多樣化特色化發(fā)展促進(jìn)機(jī)制,引導(dǎo)普通高中找準(zhǔn)內(nèi)涵發(fā)展定位,凝練學(xué)校文化,培育辦學(xué)特色,形成一批“高質(zhì)量、多樣化、有特色”的普通高中。年底擬召開試點(diǎn)地區(qū)和學(xué)校現(xiàn)場(chǎng)會(huì)。三是落實(shí)教育部和國(guó)家發(fā)改委關(guān)于進(jìn)一步做好普通高中改制學(xué)校清理規(guī)范工作要求,加大工作力度,確保按要求在秋季開學(xué)前完成清理工作。四是進(jìn)一步加強(qiáng)普通高中學(xué)生學(xué)籍管理,規(guī)范普通高中辦學(xué)行為。依托學(xué)籍信息化管理系統(tǒng),明確各級(jí)教育行政部門職責(zé),加強(qiáng)和規(guī)范普通高級(jí)中學(xué)學(xué)生學(xué)籍管理。強(qiáng)化審批和管理,進(jìn)一步規(guī)范國(guó)際班辦學(xué)行為。從規(guī)范招生行為著手,切實(shí)規(guī)范普通高中辦學(xué)行為。
(四)依法推進(jìn)民族教育和特殊教育健康發(fā)展。
民族教育工作方面。全面貫徹新修訂的《民族教育條例》,以民族教育發(fā)展項(xiàng)目建設(shè)為依托,加快少數(shù)民族各級(jí)各類學(xué)校建設(shè);繼續(xù)推進(jìn)民族中小學(xué)“雙語教學(xué)”教學(xué)模式改革;廣泛深入開展民族團(tuán)結(jié)教育,繼續(xù)抓好教育援疆、工作;全面啟動(dòng)民族文化教育基地學(xué)校建設(shè);加強(qiáng)掃盲教材建設(shè),積極推進(jìn)少數(shù)民族掃盲教育工作。特殊教育工作方面。大力推進(jìn)特殊教育學(xué)校標(biāo)準(zhǔn)化建設(shè)和特殊兒童隨班就讀工作;繼續(xù)推進(jìn)特殊教育課程改革,大力推廣“醫(yī)教結(jié)合、綜合康復(fù)”教學(xué)模式,力爭(zhēng)年內(nèi)取得相應(yīng)科研成果,形成一支具有示范、帶動(dòng)作用的骨干教師隊(duì)伍,指導(dǎo)各學(xué)校加大校本課程開發(fā)和利用力度,組織優(yōu)秀特殊教育校本課程評(píng)選。
—— 深化課程改革,全面提高教育質(zhì)量
(一)貫徹執(zhí)行好義務(wù)教育新課標(biāo)。
為認(rèn)真貫徹執(zhí)行好新課程標(biāo)準(zhǔn),一是要統(tǒng)籌設(shè)計(jì)義務(wù)教育新課標(biāo)的學(xué)習(xí)培訓(xùn),要求各級(jí)教育行政、教科研部門、中小學(xué)校長(zhǎng)和廣大教師,透徹理解、深刻把握新課標(biāo),內(nèi)化行為,創(chuàng)造性地貫徹到教與學(xué)的過程中去,促進(jìn)教師專業(yè)發(fā)展,全面提高教育質(zhì)量;二是省里要按照國(guó)家新課標(biāo)的精神,研制我省《地方課程標(biāo)準(zhǔn)指導(dǎo)意見》;三是各地要進(jìn)一步加強(qiáng)義務(wù)教育地方課程與學(xué)校課程建設(shè)與管理,大力推廣普及地方課程;四是中小學(xué)校要充分利用學(xué)校和當(dāng)?shù)刭Y源,開發(fā)豐富多彩、獨(dú)具特色的學(xué)校課程。
(二)創(chuàng)造性落實(shí)好高中課程方案。
繼續(xù)創(chuàng)造性地深入貫徹實(shí)施我省的《普通高中課改方案》,以課程實(shí)施為重點(diǎn),探索創(chuàng)新人才培養(yǎng)模式,優(yōu)化完善“課程模塊修習(xí)考核”、“學(xué)業(yè)水平考試”、“高校招生考試”以及“高中學(xué)生綜合素質(zhì)評(píng)價(jià)”等“三考一評(píng)”制度建設(shè)。要按照普通高中多樣化、特色化發(fā)展要求,加大普通高中選修課程開設(shè)力度,實(shí)行分類規(guī)劃與指導(dǎo),滿足不同學(xué)生的成長(zhǎng)與發(fā)展需求。加強(qiáng)學(xué)生選課指導(dǎo)和人生規(guī)劃指導(dǎo),加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)教學(xué),培養(yǎng)學(xué)生動(dòng)手實(shí)踐能力,促進(jìn)學(xué)生全面而有個(gè)性地發(fā)展。
(三)深化教與學(xué)改革。
要把教學(xué)改革作為深化課改的核心環(huán)節(jié),深入探索教學(xué)規(guī)律和人才成長(zhǎng)規(guī)律,貫徹“學(xué)思結(jié)合、知行統(tǒng)一、因材施教”教學(xué)原則,注重維護(hù)學(xué)生的尊嚴(yán)和人格,激發(fā)學(xué)生好奇心,發(fā)揮學(xué)生主觀能動(dòng)性,鼓勵(lì)廣大教師從教育教學(xué)的實(shí)際出發(fā),遵循教育規(guī)律,進(jìn)行個(gè)性化、多樣化的探索與創(chuàng)造,形成豐富多彩、生動(dòng)活潑的教與學(xué)的局面,全面提高教育質(zhì)量。要探索建立和完善中小學(xué)教育質(zhì)量綜合評(píng)價(jià)制度。
(四)全面加強(qiáng)教研工作。
各級(jí)教研部門要切實(shí)轉(zhuǎn)變教研服務(wù)方式,進(jìn)一步完善省、市、縣和基層學(xué)校以校為本、基于網(wǎng)絡(luò)、上下聯(lián)動(dòng)、由點(diǎn)到面、覆蓋全省城鄉(xiāng)的各級(jí)教研功能互補(bǔ)的教研模式,強(qiáng)化“研培一體”教研制度,充分發(fā)揮教研工作促進(jìn)教師專業(yè)發(fā)展和深化課程改革的作用。省里要制發(fā)《中小學(xué)教研工作指導(dǎo)意見》,各地各校要抓住貫徹落實(shí)新課標(biāo)這一重要任務(wù),全面提升研培能力,建立促進(jìn)教師專業(yè)發(fā)展成長(zhǎng)機(jī)制。
(五)大力推進(jìn)基礎(chǔ)教育信息化建設(shè)。
各地要把信息化作為實(shí)施素質(zhì)教育、提高教育質(zhì)量的有效手段。繼續(xù)加快推進(jìn)基礎(chǔ)教育信息基礎(chǔ)設(shè)施建設(shè),結(jié)合國(guó)家實(shí)施的農(nóng)村義務(wù)教育薄弱學(xué)校改造、配置多媒體遠(yuǎn)程教學(xué)設(shè)備項(xiàng)目,加快推進(jìn)“班班通”建設(shè),完善現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育網(wǎng)絡(luò);繼續(xù)以農(nóng)村為重點(diǎn),加強(qiáng)教師培訓(xùn),加強(qiáng)中小學(xué)現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育能力建設(shè),全面提升農(nóng)村學(xué)校應(yīng)用信息技術(shù)的水平。要充分運(yùn)用遠(yuǎn)程教育網(wǎng)絡(luò),推動(dòng)優(yōu)質(zhì)課程資源共享。
—— 強(qiáng)化教育管理,努力緩解熱點(diǎn)難點(diǎn)問題
(一)關(guān)于抓好“留守兒童”和進(jìn)城務(wù)工人員子女工作。
一方面,各地要針對(duì)“農(nóng)村留守兒童”的安全保障、身心健康、行為習(xí)慣培養(yǎng)等突出問題,建立健全關(guān)愛服務(wù)體系,盡力滿足農(nóng)村留守兒童上寄宿制學(xué)校的需求,保障不能寄宿的農(nóng)村留守兒童就近上學(xué)。另一方面,各地要按照進(jìn)城務(wù)工隨遷子女教育“兩為主”的政策要求,深化“兩為主”為“兩個(gè)全部納入”,保障隨遷子女平等接受義務(wù)教育,并融入城市生活。
(二)關(guān)于抓好規(guī)范辦學(xué)行為工作。
一是切實(shí)減輕中小學(xué)生過重課業(yè)負(fù)擔(dān)。嚴(yán)格落實(shí)省政府《關(guān)于全省中小學(xué)深入實(shí)施素質(zhì)教育規(guī)范辦學(xué)行為意見》和教育部要求;全面推行學(xué)生綜合素質(zhì)評(píng)價(jià)工作,制發(fā)全省義務(wù)教育階段學(xué)生綜合素質(zhì)評(píng)價(jià)指導(dǎo)意見,構(gòu)建小學(xué)、初中與高中有機(jī)銜接的學(xué)生綜合素質(zhì)評(píng)價(jià)機(jī)制;積極推進(jìn)高中招生制度改革,不得向?qū)W校下達(dá)升學(xué)指標(biāo),不得以升學(xué)率為主要標(biāo)準(zhǔn)來評(píng)價(jià)學(xué)校和校長(zhǎng)的工作成績(jī)。二是切實(shí)規(guī)范辦學(xué)行為。堅(jiān)決治理人民群眾反映還比較強(qiáng)烈的亂辦班、亂補(bǔ)課,擇校亂收費(fèi),教輔材料濫散以及基建、招生、采購(gòu)等領(lǐng)域還時(shí)而發(fā)生的違紀(jì)違法問題。三是切實(shí)推進(jìn)改制學(xué)校清理規(guī)范工作。各地要切實(shí)落實(shí)好教育部和國(guó)家發(fā)改委關(guān)于進(jìn)一步做好普通高中改制學(xué)校清理規(guī)范工作要求,加大工作力度,確保按要求在秋季開學(xué)前完成清理工作。同時(shí),繼續(xù)鞏固義務(wù)教育階段改制校工作成果,對(duì)義務(wù)教育階段改制學(xué)校清理規(guī)范后的運(yùn)行情況逐校進(jìn)行排查,發(fā)現(xiàn)問題迅速糾正解決。
篇3
糖尿病是由多種病因引起以慢性高血糖為特征的代謝紊亂。糖尿病的病因尚未被完全闡明。目前公認(rèn)糖尿病不是唯一病因所致的單一疾病,而是復(fù)合病因的綜合征,與遺傳、自身免疫及環(huán)境因素有關(guān)。近年來,由于糖尿病的發(fā)病率上升,防治糖尿病已成為科學(xué)工作者的一個(gè)重要課題。故合適的糖尿病模型是人類研究糖尿病的重要手段。
1 糖尿病研究中動(dòng)物模型的使用現(xiàn)狀
由于糖尿病的病因不明,誘發(fā)因素較多,因此糖尿病研究所涉及范圍較廣,而且使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類也較多。主要以哺乳動(dòng)物為主,如靈長(zhǎng)類動(dòng)物獼猴,主要用于病因?qū)W、遺傳學(xué)、神經(jīng)系統(tǒng)、細(xì)胞生化及藥物鑒定等方面研究,這樣的動(dòng)物模型,研究人類糖尿病會(huì)更接近自然,結(jié)果也比較理想[1],但因價(jià)格昂貴,難以得到,國(guó)內(nèi)較少使用。嚙齒類動(dòng)物用量最大,如大鼠、小鼠、地鼠、豚鼠等,以藥物篩選和血液生化、病理改變等方面的使用為主。家兔主要用于糖尿病高脂血癥和藥物研究,但由于膽固醇沉積所致的家兔動(dòng)脈硬化病變與人類動(dòng)脈硬化機(jī)制不盡相同,因此,用家兔作這方面的研究應(yīng)該有所考慮。近年來人們對(duì)進(jìn)化程度及器官功能更接近于人類且具有自發(fā)性糖尿病傾向的小型豬產(chǎn)生興趣,其為研究糖尿病的病因?qū)W及并發(fā)癥帶來了方便[2]。Rulifson等[3]認(rèn)為,果蠅的IPC和哺乳單位的胰島β細(xì)胞可能來源于一種共同的可以產(chǎn)生胰島素的祖先神經(jīng)元。還認(rèn)為,遺傳是容易控制的無脊椎動(dòng)物果蠅,可作為研究人類依賴于胰島素的糖尿病的有用模型。
2 糖尿病動(dòng)物模型
從Minkowski 和Von Mehring用切除狗胰腺的方法建立DM動(dòng)物模型以來,已有100多年的歷史。迄今為止,已建立了多種建立DM動(dòng)物模型的方法,主要有:(1)手術(shù)切除胰腺;(2)化學(xué)藥物誘導(dǎo);(3)自發(fā)性DM;(4)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物等[4]。下面就這幾種常見的動(dòng)物模型做簡(jiǎn)要的綜述。
2.1 手術(shù)切除胰腺[3]
將實(shí)驗(yàn)單位的胰腺全部或大部分切除后,β細(xì)胞缺如而產(chǎn)生永久性DM。自100多年前,Minkowski和Von Mehring首創(chuàng)用切除狗胰腺的方法建立DM動(dòng)物模型以來,國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此法作了改良并得到了成功,均成功制作了穩(wěn)定的1型糖尿病模型。
2.2 化學(xué)物質(zhì)損傷
2.2.1 鏈脲佐菌素(streptoxolocin,STZ)
STZ是一種廣譜抗菌素,具有抗菌、抗腫瘤的性能和致糖尿病的副作用,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胰島β細(xì)胞具有高度選擇性的毒性作用[5]。STZ誘導(dǎo)的糖尿病因給藥方式不同,其成模效果也有所差別,如采用小劑量分次給藥的方法,則建立與人類1型糖尿病表現(xiàn)相似的大鼠模型,如采用較大劑量一次性注射的給藥方法,則建立與人類2型糖尿病表現(xiàn)相似的大鼠模型,其原理可能與胰島的損傷程度有關(guān)[6]。
1型糖尿病模型(IDDM模型):靜脈或腹腔一次大劑量注射STZ所制得的速發(fā)型糖尿病系胰島β細(xì)胞直接受損害所致:按55mg/kg給大鼠腹腔內(nèi)注射STZ,由于STZ對(duì)胰島β細(xì)胞的直接損害,胰島的分泌減少而致血糖升高,出現(xiàn)糖尿病的各種表現(xiàn)[6]。多次小劑量注射所制得的遲發(fā)型糖尿病模型則與T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的β細(xì)胞不斷破壞有關(guān):應(yīng)用30mg/kg多次注射STZ誘導(dǎo)大鼠DM,逐漸加重胰島功能損傷,終達(dá)失代償,可有效模擬糖尿病病程及發(fā)病機(jī)理,并降低動(dòng)物模型的死亡率7]。這樣建立的動(dòng)物模型與人類IDDM更接近。
2型糖尿病模型(NIDDM模型):用STZ處理的新生大鼠成年后將呈典型的NIDDM模型:先以高脂飼料喂養(yǎng),再加小劑量一次腹腔注射鏈脲佐菌素制作的大鼠模型,表現(xiàn)出肥胖、高血糖伴有高血脂、高胰島素血癥及胰島素抵抗,與2型糖尿病的特征一致[8]。通過高糖高脂飲食誘發(fā)出高胰島素血癥和胰島素抵抗,再通過注射低劑量的STZ打擊胰腺功能,導(dǎo)致胰腺代償性分泌胰島素的功能障礙,最后誘發(fā)出高血糖癥[9]。自發(fā)性高血壓鼠(SHR)在新生期予以STZ處理,成年可獲得2型糖尿病合并原發(fā)性高血壓模型[10]。國(guó)外Simionesce等[10]給雄性Syrian金黃地鼠注射STZ,同時(shí)予高脂飲食而誘發(fā)糖尿病合并血癥模型,有助于觀察研究糖尿病慢性血管并發(fā)癥。
2.2.2 四氧嘧啶(Alloxan)
四氧嘧啶致動(dòng)物血糖升高主要是通過破壞胰島細(xì)胞導(dǎo)致體內(nèi)胰島素分泌絕對(duì)不足[11]。使用四氧嘧啶制備糖尿病模型是一種經(jīng)濟(jì)可靠的實(shí)驗(yàn)方法,但實(shí)驗(yàn)條件要求較為苛刻:選取雄性Wistar大鼠,體重190~240 g,在日照時(shí)間10 h以上,且陽光充足的條件下飼養(yǎng),給藥方式采取兩步給藥法,劑量為120 mg/kg(第1天),100 mg/kg(第2天),其成模率最高[11]。也有報(bào)道[12],使用ALX制作糖尿病模型所需的最適合的劑量為200 mg/kg,但注射前須禁食12 h,在注射后4h灌胃50%葡萄糖(5 ml/100 g體重),造模成功率可達(dá)到98.1%。
2.2.3 STZ和Alloxan聯(lián)合使用聯(lián)合使用SIz+ALX ,減少了每種試劑的劑量,降低了毒性,增加了動(dòng)物模型的成功率,同時(shí),因STZ用量的減少而降低了成本。用此法復(fù)制模型與臨床I型的糖尿病有很多相似之處,所建立的大鼠DM模型可代表1型糖尿病模型[13]。
2.2.4 烏克坦(Yucatan)[14]小型豬(亦稱墨西哥無毛豬)也是糖尿病研究中一個(gè)很好的動(dòng)物模型,只需一次靜脈注射水合阿脲(alloxan monohydrate)200 mg/kg體重,就可以產(chǎn)生典型的急性糖尿病。其臨床體征包括高血糖、劇渴、多尿和酮尿等。
2.2.5 環(huán)丙庚哌(cyrpoheptadine)[14]大鼠連續(xù)給藥4周后,可見高血糖癥狀,并出現(xiàn)胰島素β細(xì)胞的分泌顆粒逐漸消失,胰島素分泌在安靜時(shí)呈正常值,當(dāng)補(bǔ)充葡萄糖過量時(shí),則不能引起胰島素的補(bǔ)充分泌。這與人類糖尿病患者的胰島素動(dòng)態(tài)極其相似。
2.2.6 注射激素[14]給動(dòng)物注射糖皮質(zhì)激素、生長(zhǎng)激素、甲狀腺素、胰高血糖素拮抗胰島素的作用,可制備內(nèi)分泌性糖尿病動(dòng)物模型。但激素類藥物制造動(dòng)物糖尿病模型有共同的缺點(diǎn):需時(shí)長(zhǎng),停藥后緩慢恢復(fù)至正常,一般較少應(yīng)用。
2.2.7 注射生物及生物制品注射生物及生物制品可引起β細(xì)胞的破壞,如鼠腦炎病毒、心肌炎病毒(M型變異)可誘發(fā)若干品系的成年小鼠形成糖尿?。?4]。靜脈注射卡介苗可造成穩(wěn)定的胰島素抵抗模型[15],白介素1(IL1)在一定劑量范圍內(nèi)對(duì)β細(xì)胞有選擇性細(xì)胞毒作用,這種由NO介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)可得到IDDM[2]。
2.2.8 催肥選擇性破壞下丘腦腹內(nèi)側(cè)核的飽食中樞,使動(dòng)物產(chǎn)生貪食,或用特殊的實(shí)驗(yàn)室飲食催肥,使動(dòng)物肥胖,繼而產(chǎn)生高血糖、高胰島素血癥和胰島素抵抗[14]。用含37%蔗糖+10%豬油的飼料喂養(yǎng)貴州小香豬,可使其產(chǎn)生嚴(yán)重的高血糖癥,空腹血糖均值為(7.45±3.10) mmol/L,可建立較理想的2型糖尿病動(dòng)物模型[16]。
2.3 自發(fā)性DM[4]是指動(dòng)物未經(jīng)過任何有意識(shí)的人工處置,在自然情況下發(fā)生的DM。包括BB(Bio Breeding)鼠、db(diabetes)鼠和NOD(nonobesiw diabetes)鼠等常用的1型DM 自發(fā)性動(dòng)物模型,以BB鼠尤為理想。常用的2型DM 自發(fā)性動(dòng)物模型有中國(guó)地鼠(Chinese hamster),GK(CotoKakisaki Wistar rats)大鼠和NSY鼠(NagoyaShibataYasuda)。而肥胖Zucker大鼠(obese Zucker rat)則是研究2型DM伴高血壓的理想的動(dòng)物模型[17],嗜沙肥鼠(psammomys obesus),PO則適用于LADA的研究。SHHF肥胖大鼠有較強(qiáng)胰島索抗性,可能是胰島素分泌過多導(dǎo)致更多的有賴于脂肪和性別的危險(xiǎn)效應(yīng)[18]。OLETF(OtsukaLong-EvansTokushimaFaty)大鼠[19]是1984年由日本制藥公司開發(fā)的自發(fā)性2型糖尿病鼠種。該鼠膽囊收縮素(CCK)A受體mRNA的表達(dá)完全缺失,其攜帶的ODB1和ODB2基因與糖尿病的發(fā)病有關(guān)。該鼠貪食,不好運(yùn)動(dòng),體形肥胖,逐漸出現(xiàn)糖尿病的臨床表現(xiàn)。早期以胰島素抵抗、糖脂代謝紊亂為主,以后逐漸出現(xiàn)胰腺功能減退,晚期合并糖尿病腎臟病變,與人類2型糖尿病極為相似。自發(fā)糖尿病模型是在自然發(fā)生糖尿病的個(gè)體和糖負(fù)荷發(fā)生異常的個(gè)體中實(shí)施遺學(xué)控制(近交系、突變系等)獲得的。如果糖尿病的病態(tài)能夠作為系統(tǒng)特征表現(xiàn)出來或突變基因能被固定下來的話,則能夠作為病態(tài)模型分類的。但這一階段的病因依然是不清楚的。另一方面,制作病因模型必須制作出轉(zhuǎn)糖尿病基因的動(dòng)物來用于分析糖尿病的特性。首先要考慮的問題是,在動(dòng)物體中無論是導(dǎo)人或是敲除和人相同的糖尿病基因,都不能肯定會(huì)顯示出和人完全相同的病態(tài)。自發(fā)性糖尿病模型只有在各個(gè)變異基因被弄清之后,并發(fā)現(xiàn)了相對(duì)應(yīng)的人的致病基因才有可能說有了病因模型[20]。目前國(guó)內(nèi)外不少部門可供應(yīng)這些動(dòng)物模型,但價(jià)格十分昂貴,且對(duì)飼養(yǎng)和繁殖此類動(dòng)物的條件要求較高,在近交系中常出現(xiàn)變異,繁殖后代的個(gè)體差異大,需要專用的動(dòng)物房及專人管理。
2.4 轉(zhuǎn)基因模型[4]研究者按照自己的意愿,借助于實(shí)驗(yàn)手段來控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特定基因組分及其表達(dá)等,而使動(dòng)物表現(xiàn)特有的遺傳性狀,此稱為轉(zhuǎn)基因技術(shù),運(yùn)用此技術(shù)干預(yù)的動(dòng)物稱為轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。有關(guān)l型 、2型糖尿病和MODY 的轉(zhuǎn)基因糖尿病動(dòng)物均有報(bào)道。隨著對(duì)糖尿病研究的逐步深入,相應(yīng)的糖尿病動(dòng)物模型發(fā)展勢(shì)在必然。越接近于人類的動(dòng)物模型將越受歡迎。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的建立將為糖尿病研究提供更科學(xué)有效的工具。日本的研究者曾報(bào)道[21]轉(zhuǎn)錄因子ICER通過競(jìng)爭(zhēng)性抑制其他的轉(zhuǎn)錄激活因子直接與胰島素基因相結(jié)合,有效地抑制胰島素基因轉(zhuǎn)錄,同時(shí),在糖尿病狀態(tài)下,胰島內(nèi)ICER同分異構(gòu)體的表達(dá)增強(qiáng),因此培育了ICER轉(zhuǎn)基因鼠,發(fā)現(xiàn)該鼠可表現(xiàn)嚴(yán)重的高血糖,ICER可強(qiáng)有力地抑制體內(nèi)胰島素基因的轉(zhuǎn)錄,引起嚴(yán)重的胰島素缺乏性糖尿病。
3 討論
了解糖尿病實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的研究發(fā)展概況可為此疾病發(fā)病機(jī)理、遺傳因素及其治療的研究提供必要的依據(jù)。由于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與人類之間有較多的偏差,所以至今還沒有一種動(dòng)物模型與人類疾病特征完全吻合。為了深入對(duì)疾病的探討,我們必須依賴于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型,這需要我們繼續(xù)對(duì)該方面進(jìn)行進(jìn)一步的研究。同時(shí)在選擇糖尿病動(dòng)物模型時(shí),需根據(jù)研究目的和實(shí)驗(yàn)條件,合理地培養(yǎng)和利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
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篇4
吸入物的血/氣分配系數(shù)和組織/氣分配系數(shù)決定了藥物誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間長(zhǎng)短。如吸入具有較高的溶解度,那么誘導(dǎo)期間停留在血液里的藥物就會(huì)增加,而腦內(nèi)相應(yīng)減少,所以誘導(dǎo)需要較長(zhǎng)時(shí)間。七氟烷和地氟烷溶解度低,血?dú)夥峙湎禂?shù)小,所以誘導(dǎo)和蘇醒迅速。血/氣分配系數(shù)也會(huì)受外界因素影響。體溫降低時(shí)數(shù)值增加:而血液稀釋后溶解度降低,系數(shù)減小。吸入物誘導(dǎo)時(shí)肺泡濃度與吸入濃度比值(fa/fi)隨著藥物溶解度降低而增加,氧化亞氮的fa/fi比值最高,其次為地氟烷,氟烷具有較高的脂溶性,因而fa/fi比值最低。
吸入麻醉誘導(dǎo)時(shí),快速增加吸入濃度容易產(chǎn)生藥物的呼吸道刺激癥狀,如嗆咳、屏氣、喉痙攣和流涎等,尤其是沒有使用術(shù)前藥物的患者,其中義以地氟烷為顯著。兒童發(fā)生呼吸道刺激反應(yīng)的機(jī)牢高于成人兩倍,這容易導(dǎo)致兒童血氧飽和度降低,發(fā)生缺氧,因此地氟烷不適合兒童麻醉誘導(dǎo)。如果誘導(dǎo)前使用阿片類鎮(zhèn)痛藥物,則能夠降低地氟烷對(duì)呼吸道的刺激作用。氟烷和七氟烷因?yàn)闆]有氣道刺激反應(yīng),因而適合于兒童麻醉誘導(dǎo),七氟醚的誘導(dǎo)快,對(duì)于循環(huán)的下擾較小,蘇醒快,并且沒有肝臟毒性顧慮,因此在兒童麻醉誘導(dǎo)時(shí)多被采用。但是也有研究認(rèn)為氟烷能夠提供比七氟烷更好的插管條件,這是由于高脂溶性的氟烷在肺泡內(nèi)的濃度比較穩(wěn)定。
吸入物通過血流分布全身,根據(jù)血液灌注程度不同,物分布也存在時(shí)相差異。藥物與血流豐富組織(腦、心臟、肝臟、腎臟等)達(dá)到平衡的時(shí)間僅為10分鐘,肌肉和皮膚組織需要4小時(shí)才能達(dá)到平衡,而脂肪組織需要30小時(shí)才能達(dá)到半量飽和。肥胖患者脂肪組織中血流相對(duì)高灌注區(qū)域,如心臟周圍、腎臟周圍、腸系膜和網(wǎng)膜脂肪等較多,它們能夠儲(chǔ)存大量高脂溶性吸入,在麻醉蘇醒期,這些部位的藥物重新回到血液,從而延長(zhǎng)蘇醒時(shí)間,因此需要格外注意。對(duì)于肥胖患者使用低溶解度的吸入物,不會(huì)影響這些患者的蘇醒時(shí)間。地氟烷和七氟烷脂溶性低,并且具有較高的mac-awake值,其蘇醒速度甚至快于異丙酚麻醉。
吸入物大部分以原形通過呼吸道排出體外,少部分在體內(nèi)經(jīng)過代謝排泄,也有極少的一部;分通過皮膚和內(nèi)臟器官,手術(shù)創(chuàng)面排出體外。吸入物的排出速率主要與其血液溶解度有關(guān),低脂溶性的新型物如七氟烷和地氟烷具有蘇醒迅速的特點(diǎn)。
衡量吸入物的臨床麻醉效能時(shí),通常采用mac和mac-awake兩個(gè)指標(biāo)。mac是指在一個(gè)大氣壓下,50%的動(dòng)物對(duì)于超強(qiáng)疼痛或傷害刺激不產(chǎn)生體動(dòng)反應(yīng)的最低肺泡吸入物濃度,它是藥理學(xué)中ed50、的另外一種表現(xiàn)形式。mac-awake是指在一個(gè)大氣壓下,50%的受試者不能對(duì)命令產(chǎn)生正確反應(yīng)時(shí)的呼氣末物濃度。mac和mac-awake分別反映吸入物制動(dòng)和意識(shí)消除(抑制學(xué)習(xí)記憶)的效能。
人類和不同種屬動(dòng)物(人鼠、小鼠、狗、兔、貓、豬)的mac沒有非常明顯差異,況且這些數(shù)值差別可能是實(shí)驗(yàn)研究時(shí)動(dòng)物的年齡和溫度影響所致,這提示決定mac的基因在不同動(dòng)物中相對(duì)保守。
脊髓是介導(dǎo)吸入物制動(dòng)反應(yīng)的主要中樞。mac定義中超強(qiáng)刺激主要指:手術(shù)切口、夾尾、置放喉鏡、電刺激等,而氣管插管的刺激強(qiáng)度高于超強(qiáng)刺激,抑制這類刺激時(shí)藥物濃度也高于1mac。臨床麻醉通常采用比1mac高10%-30%的吸入濃度來保證大多數(shù)患者都能夠產(chǎn)生制動(dòng)效應(yīng)。
mac是年齡為40歲左右人群的平均數(shù)值,多數(shù)吸入物mac數(shù)值受年齡影響,小于l歲時(shí) mac最高,以后每增加10歲,mac降低6.7%左右。針刺能夠適度降低吸入物的mac。使閑阿片類鎮(zhèn)痛藥物和/或其他鎮(zhèn)靜類輔助藥物也可以降低mac,3μg/kg的芬太尼就可使地氟烷的 mac從0.63降至0.32,這與它們均作用于脊髓背角神經(jīng)細(xì)胞有關(guān)。
隨著體溫的降低,動(dòng)物的mac也相應(yīng)減少,體溫每降低1℃,mac降低4%-5%,20℃時(shí)就不需要物了。然而體溫降低對(duì)于氧化亞氮的 mac影響微弱。
妊娠能夠增加吸入物效能,降低mac,這可能與妊娠期間孕激素濃度的增加有關(guān)。
mac-awake和mac比值可用于衡量估算吸入麻醉時(shí)患者的蘇醒時(shí)間。該比值隨著藥物種類不同而各異,常用吸入物異氟烷、七氟烷和地氟烷的mac-awake是其mac數(shù)值的1/3。氟烷的比值超過亍50%,而氧化亞氮的比值達(dá)到60%以上。mac-awake同樣隨著年齡的增長(zhǎng)而降低,它與mac的比值不隨年齡變化。
阿片類鎮(zhèn)痛藥物降低七氟烷的mac-awake作用微弱,它們能夠降低麻醉期間抑制體動(dòng)反應(yīng)的吸入藥物濃度,但是不影響蘇醒時(shí)吸入物濃度,所以,阿片類藥物對(duì)于吸入物蘇醒時(shí)間的影響較小。
mac-bar是指抑制外科手術(shù)刺激產(chǎn)生自主反應(yīng)時(shí)的肺泡濃度,對(duì)于復(fù)合使用60%的氧化亞氮的異氟烷和地氟烷,它們的mac-bar是mac的1.3,而成人七氟烷的mac-bar是mac的2.2。
吸入物存在濃度效應(yīng)和第二氣體效應(yīng)。氧化亞氮能夠增加密閉腔隙的氣體容積,它不僅能夠增加腸道、胸腔內(nèi)氣體的含量,同樣也可以進(jìn)入氣管導(dǎo)管氣囊,喉罩內(nèi)囊,swan-ganz導(dǎo)管末端氣球,增加它們的容積,這些都可能會(huì)加重組織損傷。
采用乳化技術(shù)使吸入物能夠直接用于靜脈注射。該方法的優(yōu)點(diǎn)可能是其具有更短的誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間,目前已有多種鹵代類吸入物乳化制劑用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究報(bào)道,但是其人體藥理學(xué)研究還需要全面深入仔細(xì)的探討。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]李進(jìn),豐新民,袁世熒.乳化吸入的研究進(jìn)展[j];華中醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期.
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妊娠能夠增加吸入物效能,降低mac,這可能與妊娠期間孕激素濃度的增加有關(guān)。
mac-awake和mac比值可用于衡量估算吸入麻醉時(shí)患者的蘇醒時(shí)間。該比值隨著藥物種類不同而各異,常用吸入物異氟烷、七氟烷和地氟烷的mac-awake是其mac數(shù)值的1/3。氟烷的比值超過亍50%,而氧化亞氮的比值達(dá)到60%以上。mac-awake同樣隨著年齡的增長(zhǎng)而降低,它與mac的比值不隨年齡變化。
阿片類鎮(zhèn)痛藥物降低七氟烷的mac-awake作用微弱,它們能夠降低麻醉期間抑制體動(dòng)反應(yīng)的吸入藥物濃度,但是不影響蘇醒時(shí)吸入物濃度,所以,阿片類藥物對(duì)于吸入物蘇醒時(shí)間的影響較小。
mac-bar是指抑制外科手術(shù)刺激產(chǎn)生自主反應(yīng)時(shí)的肺泡濃度,對(duì)于復(fù)合使用60%的氧化亞氮的異氟烷和地氟烷,它們的mac-bar是mac的1.3,而成人七氟烷的mac-bar是mac的2.2。
吸入物存在濃度效應(yīng)和第二氣體效應(yīng)。氧化亞氮能夠增加密閉腔隙的氣體容積,它不僅能夠增加腸道、胸腔內(nèi)氣體的含量,同樣也可以進(jìn)入氣管導(dǎo)管氣囊,喉罩內(nèi)囊,swan-ganz導(dǎo)管末端氣球,增加它們的容積,這些都可能會(huì)加重組織損傷。
采用乳化技術(shù)使吸入物能夠直接用于靜脈注射。該方法的優(yōu)點(diǎn)可能是其具有更短的誘導(dǎo)和蘇醒時(shí)間,目前已有多種鹵代類吸入物乳化制劑用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究報(bào)道,但是其人體藥理學(xué)研究還需要全面深入仔細(xì)的探討。
參 考 文 獻(xiàn)
[1]李進(jìn),豐新民,袁世熒.乳化吸入的研究進(jìn)展[j];華中醫(yī)學(xué)雜志;2007年02期.
[2]王立文,張宏.吸入對(duì)肌肉松弛藥效應(yīng)的影響[j];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;1999年04期.
篇5
近年,大量動(dòng)物試驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)心肌缺血預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用,醫(yī)學(xué)界從有創(chuàng)和無創(chuàng)方面進(jìn)行了廣泛研究,這些研究提示了動(dòng)物均存在IPC(心肌缺血預(yù)還應(yīng))現(xiàn)象,IPC的保護(hù)作用是目前延遲心肌梗死發(fā)生最為有效和可以復(fù)制的方法。
IPC是幾次短暫缺血的快速適應(yīng)反應(yīng),可以減慢隨后長(zhǎng)時(shí)間心肌缺血所致的細(xì)胞壞死速度,是組織細(xì)胞在漫長(zhǎng)的生物進(jìn)化過程中獲得的一種內(nèi)在的抗損傷能力[1]。
心肌早期預(yù)適應(yīng)在動(dòng)物心肌預(yù)先經(jīng)歷亞致死性短暫缺血,可以產(chǎn)生對(duì)其后嚴(yán)重缺血的保護(hù)作用,這種保護(hù)作用是心肌保護(hù)的第1窗口,心肌保護(hù)的早期保護(hù)作用。
心肌缺血預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用消失后又出現(xiàn)的現(xiàn)象,這種作用是心肌保護(hù)的第2窗口,心肌保護(hù)的晚期保護(hù)作用[2]。
心肌缺血預(yù)適應(yīng)
心肌早期預(yù)適應(yīng)和晚期預(yù)適應(yīng)的保護(hù)作用相同,只是強(qiáng)弱程度、時(shí)間窗、持續(xù)時(shí)間不同。通過動(dòng)物試驗(yàn)的確可限制動(dòng)物的心肌梗死范圍作用。試驗(yàn)中提示:連續(xù)4次5分鐘缺血,5分鐘再灌注,繼以40分鐘再缺血,我們認(rèn)為心肌梗死前多次發(fā)作不穩(wěn)定性心絞痛可使缺血心肌處于預(yù)適應(yīng)狀態(tài),從而限制梗死面積。
心肌缺血預(yù)適應(yīng)可以提高室顫閾,減少再灌注和缺血誘發(fā)心律失常的發(fā)生率,在人體中具有抗心律失常的拮抗作用,特別對(duì)再灌注損傷導(dǎo)致的快速性心律失常的拮抗作用更強(qiáng)[3]。
心肌缺血預(yù)適應(yīng)的機(jī)制
側(cè)支循環(huán)假說:陳黃氏等提出重復(fù)短暫缺血使局部形成豐富的側(cè)支循環(huán)從而增加供應(yīng),但近年有少量學(xué)者提出懷疑預(yù)適應(yīng)與側(cè)支循環(huán)關(guān)系的趨勢(shì)[4]。
能量需求降低學(xué)說:預(yù)適應(yīng)對(duì)心肌的保護(hù)作用是通過線粒體,ATP酶抑制蛋白而降低ATP的消耗,通道開放對(duì)心肌缺血的保護(hù)作用機(jī)制是抑制細(xì)胞內(nèi)ATP的消耗,導(dǎo)致心肌頓抑,心肌收縮減弱,能量消耗降低。
ATP敏感性鉀通道:心肌被生理狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)ATP抑制而關(guān)閉,不參與靜息電位的形成。心肌缺血時(shí)二磷酸腺苷、鳥苷酸結(jié)石蛋白活化,可改變對(duì)ATP的敏感性。鉀通道開放劑預(yù)處理使缺血心肌細(xì)胞外鉀濃度進(jìn)一步升高,細(xì)胞膜超極化,動(dòng)作電位進(jìn)一步縮短,抑制Ca2+內(nèi)流,減輕Ca2+超載,再灌注后收縮功能恢復(fù),功能良好,心肌損害減輕[5]。
抗氧化 :心肌缺血后再灌注期產(chǎn)生大量的氧自由基,對(duì)心肌有損害作用,細(xì)胞內(nèi)的抗氧化酶超氧化物歧化酶,過氧化氫酶等可以消除DFR,拮抗其對(duì)膜脂質(zhì)的氧化反應(yīng),保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性及膜表面蛋白質(zhì)功能,從而保護(hù)心肌細(xì)胞[6]。
細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路:腺苷A受體,α腎上腺素受體等結(jié)合配體后活化PLC,催化磷酸肌醇酯產(chǎn)生DG而變位后激活細(xì)胞核中的PKC,使轉(zhuǎn)錄因子等磷酸化,增加HSPS,抗氧化酶等保護(hù)性蛋白質(zhì),產(chǎn)生心肌缺血的預(yù)適應(yīng)[7]。
心肌缺血預(yù)適應(yīng)具有廣泛的生理學(xué)作用與臨床應(yīng)用價(jià)值,其機(jī)制復(fù)雜,因而成為心血管系統(tǒng)的一個(gè)焦點(diǎn),心肌缺血預(yù)適應(yīng)的臨床應(yīng)用范圍將不斷拓展[8]。在溶栓治療中,可利用有心肌缺血預(yù)適應(yīng)的藥物降低再灌注損傷的程度,在心臟移植術(shù)或冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)等外科手術(shù)過程中,利用心肌缺血預(yù)適應(yīng)現(xiàn)象使心肌產(chǎn)生保護(hù)作用,從而延長(zhǎng)耐受手術(shù)的時(shí)間,降低手術(shù)死亡率[9]。
參考文獻(xiàn)
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篇6
關(guān)鍵詞:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物;處死方法;動(dòng)物福利
安樂死是英文單詞Euthanasia的中譯,Euthanasia一詞來源于古希臘語,意思是美好的死亡、快樂的死亡、無痛苦的死亡。日本學(xué)者將Euthanasia翻譯為“安樂死”,這一譯稱為中國(guó)學(xué)者所接受[1]。實(shí)施安樂死一般遵循以下原則:①盡量減少動(dòng)物的痛苦,盡量避免動(dòng)物產(chǎn)生驚恐、掙扎、喊叫。②注意實(shí)驗(yàn)人員安全,特別是在使用揮發(fā)性麻醉劑(乙醚、安氟醚、三氟乙烷)時(shí),一定要遠(yuǎn)離火源。③方法容易操作。④不能影響動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。⑤盡可能縮短致死時(shí)間,即安樂死從開始到動(dòng)物意識(shí)消失的時(shí)間。⑥判定動(dòng)物是否被安樂死,不僅要看動(dòng)物呼吸是否停止,而且要看神經(jīng)反射、肌肉松弛等狀況[2]。
1物理方法致死
1.1急性失血法
此法應(yīng)用于大鼠和小鼠等小動(dòng)物時(shí),常是剪斷動(dòng)物的股動(dòng)脈,放血致死??梢圆捎谜矍蚍?,在鼠右側(cè)或左側(cè)眼球根部將眼球摘去,使其大量失血致死。如果是犬、貓或兔等稍大型動(dòng)物應(yīng)先使動(dòng)物麻醉、暴露股三角區(qū)或腹腔,再切斷股動(dòng)脈或腹主動(dòng)脈,迅速放血。動(dòng)物在3~5 min內(nèi)即可死亡[3]。采用急性失血法動(dòng)物十分安靜,對(duì)動(dòng)物的臟器無損害,但器官貧血比較明顯,若采集組織標(biāo)本制作病理切片時(shí)可用此法。
1.2斷頭法
此法適用于鼠類等小動(dòng)物,可用直剪刀,也可用斷頭器。斷頭法處死動(dòng)物時(shí)間短,并且臟器含血量少,若需采集新鮮臟器標(biāo)本可采用此法。斷頭法會(huì)引起血液循環(huán)的突然中斷和血壓的迅速下降并伴隨意識(shí)的消失,只能用于恒溫動(dòng)物。對(duì)于變溫脊椎動(dòng)物不推薦用斷頭法,因?yàn)樗鼈兿鄬?duì)能更高的抵制缺氧[4]。
1.3空氣栓塞法
當(dāng)空氣注入靜脈后,可阻塞其分支,進(jìn)入心臟冠狀動(dòng)脈可造成冠狀動(dòng)脈阻塞,發(fā)生嚴(yán)重的血液循環(huán)障礙,動(dòng)物很快死亡。此法適用于較大動(dòng)物的處死,家兔、貓用此法需注入20~40 mL空氣,犬致死的空氣劑量為80~150 mL。由于應(yīng)用此法后,動(dòng)物死于急性循環(huán)衰竭,所以各臟器淤血十分明顯。
1.4斷髓法
此法適用于小鼠、大鼠等小動(dòng)物。用于家兔時(shí)可敲擊延髓致死,用木錘用力錘動(dòng)物的后腦部,破壞延腦,動(dòng)物痙攣后死亡,簡(jiǎn)單迅速。用于蟾蜍、蛙類可直接搗毀脊髓,將金屬探針插入枕骨大孔,破壞腦脊髓使動(dòng)物死亡,操作過程中要防止毒腺分泌物射入實(shí)驗(yàn)者眼內(nèi)。
2化學(xué)藥物致死
常用安樂死藥物有:吸入式麻醉劑(包括CO2、CO、乙醚、三氯甲烷等)、氯化鉀、巴比妥類麻醉劑、二氯二苯三氯乙(DDT)等。
2.1藥物吸入
藥物吸入致動(dòng)物死亡適用于嚙齒類,如小鼠、大鼠、豚鼠等小動(dòng)物,操作簡(jiǎn)單,是實(shí)驗(yàn)中安樂死的常用方法。因CO2無毒,制備方便,效果確切,是最常用的致死藥物。對(duì)1日齡的雛雞研究表明,CO2是有效的安樂死試劑,它幾乎不引起痛苦,抑制神經(jīng)緊張活動(dòng),在5 min之內(nèi)引起動(dòng)物的死亡。CO2濃度越高,動(dòng)物失去意識(shí)的時(shí)間就越短。當(dāng)CO2濃度增長(zhǎng)緩慢時(shí),也會(huì)延長(zhǎng)動(dòng)物失去意識(shí)的時(shí)間[5]??梢圆捎锰刂频陌矘匪老?,能使CO2氣體充滿整個(gè)箱室,確保麻醉致死效果和人員安全[6]。
2.2藥物注射
藥物注射是通過將藥物注射到動(dòng)物體內(nèi),使動(dòng)物致死。這種方法適用于較大的動(dòng)物,如兔、貓、犬等。
氯化鉀適用于家兔和犬,可采用靜脈注射的方式。高濃度的鉀可使心肌失去收縮能力,心臟急性擴(kuò)張,致心臟遲緩性停跳而死亡[7]。實(shí)驗(yàn)證明注射氯化鉀后細(xì)胞損傷嚴(yán)重,線粒體腫脹很明顯,嵴模糊不清,細(xì)胞核明顯異常[8]。家兔和犬的致死量分別為10%氯化鉀5~10、20~30 mL。
巴比妥類麻醉劑適用于兔、豚鼠,用藥量為深麻醉劑量的25倍左右。一般用量為90 mg/kg,約15 min內(nèi)死亡。該類藥物能抑制丙酸氧化酶系統(tǒng),從而抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)(特別對(duì)大腦皮質(zhì)及下丘腦),使反射機(jī)能逐漸消失[9]。也有人稱用麻醉方法處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不應(yīng)稱為安樂死,這是按照設(shè)定程序“必須將其適時(shí)處死”,選用了無痛方法[10],在應(yīng)用上還存在爭(zhēng)議。
DDT適用于豚鼠、兔、犬。豚鼠致死量為3.0~4.4 mg/kg,家兔為0.5~1.0 mg/kg,犬為0.3~0.42 mg/kg[11]。豚鼠皮下注射,家兔和犬靜脈注射。其機(jī)理可能與DDT 損傷細(xì)胞修復(fù)和免疫抑制有關(guān),并能誘導(dǎo)肝微粒體酶系統(tǒng),使某些酶發(fā)生抑制,而且本身經(jīng)肝代謝而表現(xiàn)肝毒性作用[12]。
3特殊實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的處死
處死昆蟲一般用燙死法,快速,可避免昆蟲掙扎或人的抓捏而造成蟲體的損傷。很多直翅目昆蟲的腿可能會(huì)因劇烈的抽搐而脫落,可在制作昆蟲標(biāo)本時(shí)用萬能膠粘上去,不會(huì)影響蟲體的完整和美觀[13]。處死青蛙時(shí)可用酒精麻醉,用鑷子夾取一浸透95%酒精的棉球,塞入青蛙口腔中,三四分鐘后,青蛙便癱倒不動(dòng),效果極佳。也可用香煙麻醉,向裝有青蛙的瓶里吹幾口煙,蓋緊瓶蓋,幾分鐘后,青蛙癱倒不動(dòng)[14]。狐的處死方法為將人用氯化琥珀酞膽堿針劑1支(2 L,內(nèi)含100 mg)稀釋100倍,注入其心臟中,狐在10~60 s內(nèi)昏迷,4~7 min內(nèi)死亡,昏迷后即可取皮[15]。
隨著時(shí)代的進(jìn)步與發(fā)展,科學(xué)工作者在從事生命科學(xué)研究時(shí),對(duì)待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,越來越考慮到動(dòng)物福利的問題。動(dòng)物福利是社會(huì)進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)發(fā)展到一定階段的必然產(chǎn)物,體現(xiàn)了人與動(dòng)物協(xié)調(diào)發(fā)展的趨勢(shì)。應(yīng)愛護(hù)和善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,樹立人性化的實(shí)驗(yàn)精神。這樣不僅能保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性,還能培養(yǎng)良好的臨床心理,實(shí)現(xiàn)人性化的實(shí)驗(yàn)與教學(xué)。
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篇7
關(guān)鍵詞:牛;抗病基因 研究進(jìn)展
中圖分類號(hào):S823 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-0432(2013)-04-0282-2
0 前言
動(dòng)物可能對(duì)一些傳染性疾病存在完全或部分的抗性,即抗病性??共⌒源蠖嗍怯蛇z傳因素來決定和控制的,動(dòng)物自身的遺傳性狀決定著疾病的發(fā)病率。[1]抗病基因是動(dòng)物抗病性的遺傳基礎(chǔ),它是在外來因素的刺激下能夠抵抗疾病入侵、能使動(dòng)物體內(nèi)產(chǎn)生抗體,即動(dòng)物對(duì)疾病產(chǎn)生抗性的基因??共』虬凑招?yīng)大小分為三類:第一是單一主基因,這種基因的功能主要是控制抗性狀的表達(dá);第二是微效多基因,這種基因控制的抗病能力是由多個(gè)基因共同完成的;第三是獨(dú)立的多基因,一般抗病能力多受到獨(dú)立的多基因控制,而特殊抗病能力主要受到單個(gè)主基因位點(diǎn)的控制。[2]
雖然預(yù)防接種在動(dòng)物疾病控制方面起到了重要的防治作用,但仍未能完全遏制傳染病的流行。當(dāng)前可以利用分子生物學(xué)技術(shù),進(jìn)而找尋抗病基因進(jìn)行抗病育種,從根本上改變動(dòng)物的遺傳性狀,已成為控制和減少一些疾病發(fā)生的有效途徑。而利用分子遺傳學(xué)方法,采用基因圖譜和數(shù)量性狀位點(diǎn)掃描技術(shù)尋找與抗病力相關(guān)的基因,進(jìn)行間接選擇也日漸成為了新的方法。[3]目前,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的在牛體內(nèi)與免疫相關(guān)的抗病候選基因數(shù)量逐漸增多,主要有主要組織相容性復(fù)合物(MHC),天然抗性巨噬結(jié)合蛋白1(NRAMP1),甘露糖結(jié)合凝集素(MBL),Toll樣受體基因(TLR),干擾素(IFN)等,這些抗病候選基因有望成為動(dòng)物抗病育種的新靶點(diǎn)。
1 主要的抗病候選基因
1.1 天然抗性巨噬結(jié)合蛋白1(NRAMP1)
NRAMP1基因是一個(gè)比較保守的基因,主要存在于吞噬細(xì)胞,嗜中性粒細(xì)胞以及外周血液細(xì)胞中,為特異性表達(dá),會(huì)影響動(dòng)物自身的固有免疫,所以是綜合抗病能力較好的候選基因。NRAMP1基因最初在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn),是在網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞中的巨噬細(xì)胞表達(dá)。NRAMP1基因的存在可以抵抗多種細(xì)胞內(nèi)病原微生物的入侵,發(fā)揮著重要的免疫功能。[4]通過把小鼠的基因敲除發(fā)現(xiàn),NRAMP1基因與一些細(xì)胞內(nèi)菌,病原微生物菌,例如分枝桿菌中的結(jié)核分枝桿菌、沙門桿菌、利什曼菌等的抗性和易感性有關(guān)。牛的NRAMP1基因位于第2號(hào)染色體上,研究表明其對(duì)牛布魯氏病、乳腺炎等疾病有抵抗作用。對(duì)NRAMP1基因功能的研究表明可能是通過消耗含有胞內(nèi)病原微生物吞噬體中的二價(jià)金屬離子,使病原微生物缺乏繁殖必需的金屬離子而達(dá)到抵抗胞內(nèi)病原微生物的作用[5],但具體的作用機(jī)制目前尚不清楚。Ciro Estrada-Chavez,Ana L. Pereira-Suarez[6]等人發(fā)現(xiàn)在人體中,NRAMP1基因已被確定與結(jié)核易感性有關(guān)。
1.2 主要組織相容性復(fù)合物(MHC)
MHC是由連接緊密的多態(tài)性基因組成的,是一個(gè)與抗病性和免疫應(yīng)答有著緊密相關(guān)性的基因家族,在免疫反應(yīng)中對(duì)細(xì)菌、病毒、寄生蟲等的控制和清除起著重要的作用。目前已經(jīng)證實(shí)MHC與多種疾病間存在著密切的聯(lián)系,牛的MHC物位于第23號(hào)染色體上,1978年牛的MHC基因得到了首次報(bào)道,命名為BoLA基因。有關(guān)BoLA基因和疾病的報(bào)道很多,Gilliespie,Sharif等人研究出BoLA-DRB3第2外顯子與奶牛炎的高發(fā)病率有顯著相關(guān)性。Wei Lei,Qinglong Liang等人研究了牛BoLA-DRB3基因和皖北FMDV與??谔阋咭赘行灾g的關(guān)聯(lián),采用BOLA-DRB3基因擴(kuò)增的半巢式聚合酶鏈反應(yīng),分析基因頻率和基因型頻率在健康和感染口蹄疫牛之間的差異,發(fā)現(xiàn)等位基因Hae III A在皖北牛中與口蹄疫易感性顯著相關(guān),而Hae III C則對(duì)口蹄疫病毒具有很強(qiáng)的保護(hù)作用。[8]牛的BoLA基因與腸道寄生蟲病、高酮癥的易感性相關(guān),牛的白血病與BoLA-AW16相關(guān),牛的慢性后脊椎輕癱與BoLA-A8相關(guān),牛眼癌與W6相關(guān),W14單倍型與牛結(jié)核病易感性相關(guān)。
1.3 Toll樣受體基因(TLR)
TLR基因是一類普遍存在于哺乳動(dòng)物中已經(jīng)被鑒定出來的跨膜蛋白家族,主要存在于巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞中,Toll樣受體的作用是作為膜受體來識(shí)別侵襲機(jī)體的病原體含有的保守蛋白,還起著傳遞識(shí)別信號(hào),激活核轉(zhuǎn)錄因子,轉(zhuǎn)錄相應(yīng)的效應(yīng)分子以及影響機(jī)體天然免疫等作用。[9]自從2006年牛的TLR基因mRNA序列在GenBank上公布,對(duì)TLR基因家族和牛疾病之間的相關(guān)性研究便迅速增多。Colleen A. Fisher, Eric K. Bhattarai[10]等人運(yùn)用自定義下一代測(cè)序方法以及等位基因分型檢測(cè)方法對(duì)牛的10個(gè)TLR基因變體的280雙等位基因進(jìn)行SNP檢測(cè)和驗(yàn)證。采用驗(yàn)證牛TLR識(shí)別細(xì)菌配體基因的病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)有6個(gè)SNP位點(diǎn)可能與結(jié)核分枝桿菌的易感性和奶牛感染副結(jié)核病的易感性相關(guān)。還有研究認(rèn)為,TLR基因可能與牛呼吸性疾病、腸道性感染疾病、牛炎、口蹄疫病毒感染疾病、敗血病及子宮內(nèi)膜炎等。
1.4 甘露糖結(jié)合凝集素(MBL)
MBL基因是人體和動(dòng)物體內(nèi)重要的天然抗感染免疫分子,是由肝臟合成后分泌到血液中的,在抗原抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)前,其可以誘導(dǎo)并激活機(jī)體的固有免疫反應(yīng)。MBL基因與免疫調(diào)節(jié)、補(bǔ)體活化的介導(dǎo)等生物學(xué)效應(yīng)有著緊密的關(guān)聯(lián),同時(shí)又是臨床上介導(dǎo)多種疾病發(fā)生的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu),MBL基因在防御病原微生物侵襲的天然免疫中起著抗感染分子的作用。[11]研究發(fā)現(xiàn)MBL基因的多態(tài)性和免疫缺陷性疾病、病毒性疾病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、細(xì)菌性疾病、真菌性疾病以及寄生蟲性疾病等均有相關(guān)性。根據(jù)Gen Bank的數(shù)據(jù),牛具有MBL1與MBL2兩種基因,Andersen等人通過親和層析法從牛的血清中得到了純化的MBL基因。Kawai等人采用編碼人MBL基因的膠原區(qū)、頸區(qū)及糖識(shí)別區(qū)域探針的方法,從牛肝cDNA文庫(kù)中篩選編碼牛MBL基因的cDNA克隆,同時(shí)從牛血清中分離得到了MBL基因。Capparelli R[12]等人研究發(fā)現(xiàn)MBL基因多態(tài)性與水??共剪敆U菌病的能力密切相關(guān),其作用機(jī)理為MBL基因突變導(dǎo)致甘露糖結(jié)合凝集素血清水平下降,影響了正常的免疫功能。Liu J, Ju Z, Li Q等人選擇了MBL基因啟動(dòng)子區(qū)域的三個(gè)新SNP位點(diǎn)和兩個(gè)已報(bào)道的MBL1基因外顯子2的位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),采用PCR單鏈構(gòu)象技術(shù)在中國(guó)奶牛的三個(gè)不同品種中進(jìn)行性多態(tài)性分析,分析其基因型和單倍型頻率,血清MBL-A的水平,補(bǔ)體活性等,結(jié)果表明MBL1基因與抗奶牛乳腺炎存在相關(guān)性。[13]
1.5 干擾素基因(IFN)
由于IFN具有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、抵抗病毒感染及調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用,因此成為病毒學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、以及分子生物學(xué)比較活躍的研究領(lǐng)域。IFN-γ在調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)功能、增加巨噬細(xì)胞殺菌力、影響細(xì)胞的增殖與凋亡等方面具有重要的研究意義,其主要是通過刺激或抑制相應(yīng)的基因發(fā)揮作用。[14]孫仰峰等人2008年對(duì)牛IFN-α基因高效表達(dá)及純化進(jìn)行了研究。[15]張永紅等人研究魯西黃牛BoIFN-α基因,并獲得了具有較高抗病毒活性的重組干擾素產(chǎn)物。[16]蔡進(jìn)忠從我國(guó)環(huán)湖型牦牛和野牦?;蚪MDNA中克隆了α干擾素基因,重組后的BoIFN-α基因?qū)ε魅拘员菤夤苎撞《揪哂幸欢ǖ囊种谱饔?。[17]Sweeney RW, Jones DE等人選取5只未受感染的成年荷斯坦奶牛,7只自然感染結(jié)核分枝桿菌的成年荷斯坦奶牛,屠宰時(shí)從每只牛體內(nèi)取回腸和盲腸的淋巴結(jié)樣品,運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法測(cè)定IFN-γ和白細(xì)胞介素4在每個(gè)樣品mRNA表達(dá)量。結(jié)果感染結(jié)核的牛IFN-γ基因的表達(dá)量顯著高于未感染牛,因此,IFN -γ的表達(dá)量增加,可能會(huì)增強(qiáng)牛的抗感染性。[18]
2 抗病基因應(yīng)用于動(dòng)物抗病育種時(shí)可能存在的問題與前景展望
2.1 存在的問題
動(dòng)物抗病能力的遺傳機(jī)制很復(fù)雜,還有環(huán)境的影響也很大。病原微生物的遺傳特性與宿主動(dòng)物的關(guān)系也很復(fù)雜,同時(shí)對(duì)抗病性和易感性指標(biāo)的測(cè)定也沒有統(tǒng)一的規(guī)定,而且還缺乏用于選擇的可靠性標(biāo)記。研究表明抗病性性狀是由微效多種基因所控制的,但基因之間還會(huì)存在相互的作用,單純的使用某種標(biāo)記輔助選擇達(dá)不到全面性效果,基因工程育種雖然有很強(qiáng)的針對(duì)性,但成功率卻極低,而且需要的花費(fèi)也相當(dāng)巨大,很難實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的操作。[19]因此,單獨(dú)應(yīng)用某一種抗病育種技術(shù)都會(huì)呈現(xiàn)出很多方面的局限性,還有抗病性與生產(chǎn)性狀之間存在著負(fù)相關(guān)作用,不同的疾病間也會(huì)存在拮抗作用,目前除了一些已知的疾病外,大多數(shù)疾病在抗性選擇方面可以參考的數(shù)據(jù)還很少,抗病機(jī)理也不是很明確和清楚,這些問題也同樣在制約和阻礙著抗病育種的發(fā)展和應(yīng)用。
2.2 前景展望
抗病育種并不是育種的最終目的,還需要與動(dòng)物的生產(chǎn)性能、疾病的生理學(xué)特征、流行病學(xué)、免疫機(jī)制等多方面的綜合因素相結(jié)合考慮,才能產(chǎn)生最適合經(jīng)濟(jì)需要的效果。在目前畜牧業(yè)抗病育種的方法中,應(yīng)當(dāng)充分將常規(guī)的表型選擇和標(biāo)記型的輔助選擇有效的結(jié)合起來,讓兩者的優(yōu)勢(shì)得到互補(bǔ),有效的提高家畜機(jī)體的一般抗病能力和特殊抗病能力。[20]對(duì)此,應(yīng)該將分子學(xué)技術(shù)與抗病基因結(jié)合,開展動(dòng)物基因組的基礎(chǔ)研究工作,采用現(xiàn)代生物學(xué)技術(shù)和轉(zhuǎn)基因工程技術(shù)系統(tǒng)地對(duì)基因的結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行全面性的研究。隨著抗病基因作用機(jī)制研究不斷的深入,抗病育種進(jìn)展緩慢的局面將會(huì)得到逐漸的改善,綜合性抗病育種研究將對(duì)我國(guó)畜牧業(yè)發(fā)展產(chǎn)生巨大的推動(dòng)力。
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篇8
【關(guān)鍵詞】 腦出血;多器官功能障礙;內(nèi)毒素;TNFα;基因表達(dá);大鼠
急性腦血管病導(dǎo)致的多器官功能障礙綜合征(MODS)在臨床最常見。目前在外科與創(chuàng)傷領(lǐng)域,動(dòng)物及臨床研究均證實(shí)全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)是發(fā)展為MODS的必由之路,腸源性內(nèi)毒素學(xué)說在MODS的發(fā)病機(jī)制中占有重要地位〔1〕。但對(duì)于急性腦血管病致MODS是否也由SIRS發(fā)展而來及如何啟動(dòng)炎癥介質(zhì)的瀑布樣釋放仍不得而知,我們以往的研究結(jié)果表明腦缺血導(dǎo)致的MODS存在腸道內(nèi)毒素易位和血清內(nèi)毒素異常升高的現(xiàn)象〔2,3〕。本實(shí)驗(yàn)采用Ⅶ型膠原酶0.8 U加上適量肝素成功復(fù)制腦出血致MODS的動(dòng)物模型,在此基礎(chǔ)上探討血清內(nèi)毒素與腫瘤壞死因子(TNFα) mRNA基因表達(dá)的變化規(guī)律及相關(guān)性,以期揭示腦出血所致腦源性MODS的炎性致病機(jī)制。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型的建立 成年健康雄性Wistar大鼠(清潔級(jí))54只,體重250~300 g,由山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為9組:① 正常對(duì)照組;② 假手術(shù)組;③腦出血組,分為4、8、12、24、36、48和72 h時(shí)相點(diǎn)的7個(gè)亞組,每組6只。
在室溫22℃及恒定濕度的條件下,大鼠術(shù)前禁食12 h,禁水4 h。輕柔抓取動(dòng)物, 以1%戊巴比妥溶液40 mg/kg劑量腹腔注射麻醉動(dòng)物。參照Rosenberg等〔4〕方法,微量注射器沿鉆孔垂直進(jìn)針6 mm,出血組緩慢注入Ⅶ型膠原酶0.8 U和3.2 IU的肝素鈉(共2 μl)混合液,留針10 min后緩慢退出。假手術(shù)組注射同體積的生理鹽水,其余步驟均同出血組。
1.2 檢測(cè)項(xiàng)目與方法 觀察術(shù)后動(dòng)物的一般情況,包括意識(shí)、精神狀態(tài)、肢體活動(dòng)等。記錄麻醉后動(dòng)物的肛溫、呼吸、心率改變。到各時(shí)相點(diǎn)頸靜脈抽血5 ml,檢測(cè)血常規(guī)、肝功、腎功、心肌酶。4%多聚甲醛灌注后立即取肺臟、肝臟、小腸、腎臟,觀察大體標(biāo)本的形態(tài)變化,隨后放入盛有10%中性甲醛的容器內(nèi)及時(shí)固定。脫水、透明后,包埋切片,行HE染色,光鏡下觀察各臟器的病理改變。
1.3 血清內(nèi)毒素的測(cè)定 采用偶氮顯色法鱟試驗(yàn)定量測(cè)定內(nèi)毒素,試劑購(gòu)自上海伊華臨床醫(yī)學(xué)科技公司。
1.4 原位雜交技術(shù)測(cè)定組織TNFα mRNA的水平 試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司;使用CMIA真彩色醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng),檢測(cè)表達(dá)TNFα mRNA陽性顆粒的面密度和光密度,作為細(xì)胞TNFα mRNA的相對(duì)含量。
1.5 MODS動(dòng)物模型診斷依據(jù) 按照盛志勇院士提出的MODS實(shí)驗(yàn)動(dòng)物診斷標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)〔5〕。
1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各項(xiàng)指標(biāo)均以x±s表示,應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,組間兩兩比較用t檢驗(yàn),兩變量相關(guān)分析用直線相關(guān)分析。
2 結(jié) 果
2.1 腦出血模型并發(fā)SIRS、MODS發(fā)生率 出血組表現(xiàn)為手術(shù)4 h后精神萎靡不振,食欲下降,12 h后呼吸急促深大,均出現(xiàn)不同程度的腹脹。有15只在24 h后出現(xiàn)神經(jīng)源性肺水腫表現(xiàn)。24 h后未到時(shí)相點(diǎn)的動(dòng)物的死亡率達(dá)31.7%。依據(jù)診斷標(biāo)準(zhǔn)SIRS的發(fā)生率為100%,MODS發(fā)生率為67.9%。
2.2 腦出血模型主要臟器病理改變 肺:出血后4 h血管腔內(nèi)中性粒細(xì)胞增多;24 h和36 h見到輕度支氣管肺炎的改變;48 h出現(xiàn)了大葉性肺炎的改變,72 h仍有部分支氣管肺炎的改變。肝:8 h出現(xiàn)少數(shù)肝細(xì)胞濁腫,24~36 h肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死;72 h可見少量慢性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。小腸:4 h出現(xiàn)黏膜下層水腫;24~36 h黏膜和黏膜下層炎細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)到高峰;72 h仍見黏膜和黏膜下層充血、水腫。腎:12 h出現(xiàn)腎間質(zhì)充血,近曲腎小管上皮細(xì)胞濁腫;48 h出現(xiàn)了蛋白及細(xì)胞管型,72 h仍見近曲腎小管上皮細(xì)胞濁腫。
2.3 血清內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果 血清內(nèi)毒素于術(shù)后8 h開始升高, 24~36 h達(dá)高峰,72 h仍維持較高水平。腦出血組血清內(nèi)毒素〔(0.425±0.102)~(1.225±0.215)Eu/ml〕含量與正常對(duì)照組〔(0.175±0.02) Eu/ml〕及假手術(shù)組〔(0.180±0.03) Eu/ml〕比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
2.4 腦出血后TNFα mRNA在各臟器的表達(dá) 正常對(duì)照組及假手術(shù)組肺、肝、小腸和腎組織中均有少量TNFα mRNA的表達(dá),兩組相比各組織TNFα mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05);腦出血組肺、肝、小腸和腎組織TNFα mRNA表達(dá)均隨時(shí)間進(jìn)展而變化,12 h開始升高,24~36 h達(dá)高峰,12~48 h各器官組織與正常組和假手術(shù)組比較,均有差異,其中以肺和小腸組織升高幅度最顯著(P
2.5 各臟器TNFα mRNA表達(dá)與血清內(nèi)毒素的相關(guān)性 肺、肝、小腸和腎組織TNFα mRNA表達(dá)與血清內(nèi)毒素均存在顯著相關(guān)性(r分別為0.705、0.548、0.793、0.412,均P
3 討 論
MODS是由失控的SIRS導(dǎo)致的微循環(huán)功能障礙,繼而引起急性多器官功能障礙的觀點(diǎn)已被危重病學(xué)領(lǐng)域?qū)W者普遍接受。本研究建立了腦出血致MODS的動(dòng)物模型,結(jié)果顯示0.8 U膠原酶加上適量肝素復(fù)制腦出血模型SIRS的發(fā)生率為100%,MODS的發(fā)生率為67.9%,周圍器官組織的病理結(jié)果證實(shí)存在較明顯、持久的炎癥反應(yīng),證實(shí)腦出血誘發(fā)了SIRS,然后導(dǎo)致MODS的發(fā)生。
徐曉筑等〔6〕研究證實(shí)在嚴(yán)重顱腦外傷患者早期存在內(nèi)毒素血癥及炎性介質(zhì)的過度釋放,推測(cè)顱腦損傷后導(dǎo)致胃腸道及免疫系統(tǒng)等的功能改變出現(xiàn)內(nèi)毒素易位,進(jìn)一步激活單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)等引發(fā)炎性因子的瀑布樣釋放,繼而誘發(fā)MODS的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示,血清內(nèi)毒素在腦出血后8 h隨時(shí)間進(jìn)展?jié)舛妊杆偕撸?4 h達(dá)高峰,72 h仍維持較高水平,結(jié)合腦出血后腸、肝臟組織的病理改變表現(xiàn),為腦出血后出現(xiàn)內(nèi)毒素血癥提供了形態(tài)學(xué)依據(jù)。
在各種內(nèi)外科危重疾病的刺激下,單核細(xì)胞產(chǎn)生大量的TNFα,進(jìn)一步促進(jìn)其他細(xì)胞因子及炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生,可以導(dǎo)致機(jī)體MODS的產(chǎn)生〔7〕。我們的研究發(fā)現(xiàn),正常對(duì)照組及假手術(shù)組各器官組織中均有少量TNFα mRNA的表達(dá),兩組相比各組織TNFα mRNA表達(dá)無顯著差異(P>0.05);腦出血組肺、肝、腸和腎組織TNFα mRNA表達(dá)均隨時(shí)間進(jìn)展而變化,8 h開始升高,24~36 h達(dá)高峰,12~48 h各器官組織與正常組和假手術(shù)組比較,均有差異,其中以肺和小腸組織升高幅度最顯著,在72 h仍未有明顯的下降趨勢(shì)。
內(nèi)毒素可誘導(dǎo)TNFα mRNA產(chǎn)生,本研究顯示肺、肝、小腸和腎組織TNFα mRNA表達(dá)與血清內(nèi)毒素均存在顯著相關(guān)性,提示內(nèi)毒素血癥刺激炎癥因子TNFα的異常釋放,誘發(fā)失控性的炎癥介質(zhì)瀑布樣釋放,出現(xiàn)全身炎癥反應(yīng),最終導(dǎo)致MODS的發(fā)生。
參考文獻(xiàn)
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3 郭洪志,屈傳強(qiáng).前腦缺血大鼠腸、肝組織CD14mRNA表達(dá)與多器官功能障礙綜合征的關(guān)系研究〔J〕.中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2004;21(1):1921.
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篇9
[關(guān)鍵詞] 二氫楊梅素;肝纖維化;脂質(zhì)過氧化;丙二醛;超氧化物歧化酶
[中圖分類號(hào)] R575[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1673-7210(2009)06(c)-026-03
Protective effects of dihydromyricetin on lipid peroxidation in rats with hepatic fibrosis
KUANG Manyuan, LUO Mingying, JIA Lei
(Department of Anatomy, Xiangnan College, Chenzhou 423000, China)
[Abstract] Objective: To observe the protective effects of dihydromyricetin on hepatic fibrosis in rats induced by carbon tetrachloride (CCl4), and explore its mechanism related to anti-lipid peroxidation in rats. Methods: 84 male SD rats were randomly divided into six groups: normal group, model group, Fufangbiejia positive control group, lower, middle and high dosages of dihydromyricetin treatment groups. The hepatic fibrosis rat model was developed by subcutaneous injecting 40% CCl4. At the same time, rats were treated with dihydromyricetin at 25 mg/100 g, 50 mg/100 g or 100 mg/100 g. The levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) activities in liver tissue were determined, the histopathological change of the liver tissues was observed under optical microscope. Results: Dihydromyricetin could decrease serum level of MDA obviously (P
[Key words] Dihydromyricetin; Hepatic fibrosis; Lipid peroxidation; Malondialdehyde; Superoxide dismutase
藤茶,學(xué)名顯齒蛇葡萄(Ampelopsis grossedentala),是葡萄科蛇葡萄屬多年野生藤本植物的莖葉,具有消炎、止咳、抑菌、鎮(zhèn)痛、消脂、抗高血壓等功效[1]。顯齒蛇葡萄的主要成分為黃酮類化合物,筆者在前期的研究中發(fā)現(xiàn),藤茶總黃酮具有較好的保肝、護(hù)肝、抗肝纖維化的作用[2-3]。研究表明,二氫楊梅素是藤茶中含量最高的化學(xué)成分(約占40%)[4],具有抗脂質(zhì)過氧化、保肝、護(hù)肝等作用[5-6],但其抗肝纖維化作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用40% CCl4皮下注射制備大鼠肝纖維化模型[7],研究二氫楊梅素對(duì)肝纖維化大鼠脂質(zhì)過氧化損傷的保護(hù)作用。
1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
SD雄性大鼠84只,體重180~220g,由南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部提供。
1.2儀器與試劑
E260電子天平(梅特勒公司);低溫高速離心機(jī)(美國(guó)Beckman公司);二氫楊梅素、白色結(jié)晶由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥化學(xué)教研室提供;復(fù)方鱉甲軟肝片由福瑞中蒙藥科技股份有限公司生產(chǎn);CCl4分析純購(gòu)自天津市北宏試劑廠;MDA、SOD測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。
1.3動(dòng)物分組及處理
84只雄性SD大鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組(C組)和二氫楊梅素低、中、高劑量組(D、E、F組),每組14只。正常對(duì)照組正常喂養(yǎng),僅每天與模型組予以同體積的生理鹽水灌胃。模型組、復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組和二氫楊梅素各劑量組予以40% CCl4橄欖油(將CCl4與橄欖油按體積4∶6配成40%油劑),首劑0.5 ml/100 g,以后0.3 ml/100 g,每周2次皮下注射,共13周。造模的同時(shí),二氫楊梅素低、中、高劑量組分別予以二氫楊梅素25 mg/100 g、50 mg/100 g、100 mg/100 g體重灌胃干預(yù),每次灌胃前將二氫楊梅素以生理鹽水分別配制成25、50、100 mg/ml濃度的混懸液,每天1次,共13周。復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組:將復(fù)方鱉甲軟肝片原藥研磨成粉末,按照100 mg/ml的濃度,與生理鹽水配成混懸液,每次按100 mg/100 g體重灌胃,每天1次,共13周。
1.4 取材和標(biāo)本處理
造模13周后,大鼠處死前禁食12 h,稱重后經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉并固定。在肝右葉取約0.5 g肝組織,在低溫條件下剪碎,放入勻漿器中,再加入9倍體積的冷生理鹽水,研磨成勻漿后,倒入離心管中,低溫高速離心機(jī)3 000 r/min,離心15 min,取上清裝入Eppendorf管中,保存于-20℃冰箱,按試劑盒說明書測(cè)定MDA的含量和SOD的活性。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,經(jīng)SPSS 13.0軟件處理,采用單因素方差分析,組間比較采用LSD-t檢驗(yàn),以P
2 結(jié)果
2.1大鼠肝臟病理學(xué)變化
造模結(jié)束時(shí),模型組、復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組和二氫楊梅素低、中、高劑量組大鼠分別死亡5、2、3、4、2只,正常組無死亡。HE染色(圖1)顯示,正常組肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,無變性、壞死;模型組可見肝細(xì)胞脂肪變性、水腫,肝索排列紊亂,匯管區(qū)及肝小葉內(nèi)可見明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),纖維組織增生明顯,形成假小葉,證明造模成功。Masson染色(圖2)顯示,正常組大鼠僅在匯管區(qū)見少量膠原纖維;模型組可見較粗的纖維間隔;復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組和二氫楊梅素各劑量組可見稍細(xì)的纖維間隔。
圖1 肝組織的HE染色(×200)
(A:正常組;B:模型組;C:復(fù)方鱉甲陽性對(duì)照組;D:二氫楊梅素低劑量組;E:二氫楊梅素中劑量組;F:二氫楊梅素高劑量組)
2.2 二氫楊梅素對(duì)肝組織勻漿MDA含量和SOD活性的影響
與正常組比較,模型組大鼠肝組織中MDA含量明顯升高,SOD活性明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P
表1 各組大鼠肝組織勻漿MDA含量、SOD活性比較(x±s)
與正常組比較,#P
3討論
肝纖維化是多種致病因素作用于肝細(xì)胞引起肝細(xì)胞變性、壞死后的共同病理基礎(chǔ),是肝臟纖維組織過度沉積的過程,表現(xiàn)為細(xì)胞外基質(zhì)的合成大于降解[8]。CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化模型是研究肝纖維化的經(jīng)典模型[9]。CCl4進(jìn)入機(jī)體后,可直接溶解肝細(xì)胞膜,且在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中經(jīng)肝微粒體內(nèi)依賴于細(xì)胞色素P450的混合功能氧化酶的代謝后,生成有活性的三氯甲基自由基和氯甲基自由基,它們與肝細(xì)胞內(nèi)的大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合,也可攻擊膜不飽和脂質(zhì),引發(fā)活性氧自由基的產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化,損傷肝細(xì)胞,促使肝臟纖維化形成。MDA是氧自由基與細(xì)胞膜表面不飽和脂肪酸脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的終末產(chǎn)物,SOD是細(xì)胞內(nèi)天然的氧自由基清除劑。研究表明,肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展與氧自由基損傷、脂質(zhì)過氧化有關(guān),肝組織中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量明顯增加,SOD活性不同程度地降低[10-12]。本研究中,在采用CCl4誘導(dǎo)制備大鼠肝纖維化模型的同時(shí),給予不同濃度的二氫楊梅素干預(yù),從組織切片發(fā)現(xiàn)3個(gè)不同劑量組的大鼠肝臟纖維組織增生、脂肪變性、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均低于模型組,肝纖維化病理改變明顯得到改善,說明二氫楊梅素對(duì)CCl4誘導(dǎo)的大鼠肝纖維化有較好的預(yù)防、保護(hù)作用。同時(shí),隨著劑量的增大,二氫楊梅素低、中、高劑量組升高的MDA有不同程度的降低,降低的SOD有不同程度的升高,說明二氫楊梅素能提高肝組織的抗氧化酶活性,抑制自由基的產(chǎn)生及其引起的脂質(zhì)過氧化反應(yīng),并清除氧自由基,使大鼠肝纖維化程度減輕,提示抗脂質(zhì)過氧化損傷作用可能是二氫楊梅素抗肝纖維化的作用機(jī)制之一,為進(jìn)一步研究和開發(fā)藤茶提供基礎(chǔ)。
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篇10
【關(guān)鍵詞】實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)中醫(yī)藥院校教學(xué)改革
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)是一門研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的綜合性新興學(xué)科,它融合了生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)學(xué)、遺傳學(xué)等諸多學(xué)科的知識(shí),具有很強(qiáng)的綜合性和交叉性,同時(shí)它的發(fā)展又推動(dòng)了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、預(yù)防醫(yī)學(xué)和中醫(yī)藥學(xué)的發(fā)展,對(duì)科學(xué)研究尤其是生命科學(xué)研究起著越來越重要的作用,因而受到了相關(guān)部門的高度重視,也逐步步入了高等醫(yī)學(xué)院校的課堂,是中醫(yī)藥院校多數(shù)專業(yè)研究生必修的一門基礎(chǔ)課,也是部分中醫(yī)、中藥、藥學(xué)、生物工程、中西醫(yī)結(jié)合專業(yè)本科生的選修課程[1]。我院在研究生和本科生中開設(shè)這門課程也有近十年的歷史,這對(duì)于我院普及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的有關(guān)知識(shí)和提高學(xué)生的動(dòng)手能力起到了一定的推動(dòng)作用。但由于教師隊(duì)伍的不專業(yè)(多為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的工作人員或病理、生理教研室的教師),加之教學(xué)大綱及教學(xué)內(nèi)容的不統(tǒng)一、考核辦法的過時(shí)以及該課程是選修課的緣故,使得教學(xué)效果不好,流于形式化,達(dá)不到預(yù)期的目的,對(duì)學(xué)生動(dòng)手能力的培養(yǎng)也就無從談起[2]。為此,筆者在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物教學(xué)實(shí)踐中大膽進(jìn)行教學(xué)改革,更新教學(xué)觀念,改革教學(xué)模式,改進(jìn)教學(xué)方法與考試考核辦法,在我院中西醫(yī)結(jié)合專業(yè)研究生及中醫(yī)、中藥、藥學(xué)等本科班教學(xué)中取得了較好的效果。
1更新教育觀念,確立了理論與實(shí)踐并重的指導(dǎo)思想
在以前的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)過程中,我們基本上以講授實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的基本理論為主,忽視了實(shí)驗(yàn)操作和動(dòng)手能力的培養(yǎng),學(xué)完后即進(jìn)行理論考試,與當(dāng)時(shí)開設(shè)這門課程主要為提高學(xué)生綜合素質(zhì)和科研能力的初衷不符。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)是一門實(shí)踐性較強(qiáng)的學(xué)科,單純講授理論對(duì)于以往很少接觸實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的學(xué)生來說,往往非常抽象,效果也不好。因此,在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)過程中,有必要更新教學(xué)觀念,確立以理論與實(shí)踐并重的指導(dǎo)思想,改過去的以理論學(xué)習(xí)為主為現(xiàn)在的以理論與實(shí)踐相結(jié)合為重點(diǎn),改過去僅重視課堂學(xué)習(xí)為現(xiàn)在還重視實(shí)踐操作,采用更加行之有效的教學(xué)方法逐步提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的教學(xué)水平和教學(xué)質(zhì)量,為學(xué)生進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室和走上社會(huì)工作崗位打下良好的基礎(chǔ)。在具體實(shí)施過程中,要緊緊圍繞提高學(xué)生動(dòng)手能力為目的這個(gè)中心,制訂切實(shí)可行的教學(xué)計(jì)劃,適當(dāng)減少理論課時(shí)數(shù),增加實(shí)驗(yàn)課時(shí)數(shù),使實(shí)驗(yàn)課時(shí)占到總課時(shí)的40%左右。同時(shí)豐富教學(xué)內(nèi)容,使實(shí)驗(yàn)教學(xué)不單純停留在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿、保定、麻醉、采血、給藥等基本操作上,而是把科學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)、選擇合適動(dòng)物復(fù)制中醫(yī)證候動(dòng)物模型進(jìn)行相關(guān)的中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)等綜合項(xiàng)目放在學(xué)生的實(shí)驗(yàn)課上,確保學(xué)生動(dòng)手能力的提高。
2豐富教學(xué)內(nèi)容和改革教學(xué)方法,探索適合本學(xué)科特點(diǎn)的新的教學(xué)模式
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的主要內(nèi)容包括如何培養(yǎng)出高質(zhì)量的符合各種實(shí)驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以及如何利用這些符合要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合理地設(shè)計(jì)、開展動(dòng)物實(shí)驗(yàn)并獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。對(duì)于中醫(yī)藥院校的畢業(yè)生,他們未來大多是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用者。因此,對(duì)如何培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的內(nèi)容可略講,而對(duì)如何利用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容要詳講。在教學(xué)內(nèi)容的選擇上根據(jù)學(xué)生的具體情況要有所側(cè)重。對(duì)研究生來說,重點(diǎn)要講授實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇和應(yīng)用、動(dòng)物模型的復(fù)制技術(shù)、影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)效果的因素及其控制、相關(guān)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法、最新的法規(guī)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展,增加學(xué)生實(shí)驗(yàn)動(dòng)手的機(jī)會(huì),提高實(shí)驗(yàn)課程的深度和難度;對(duì)本科生來說,重點(diǎn)要提高學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣,著重講述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的新技術(shù)、新進(jìn)展(轉(zhuǎn)基因技術(shù)、克隆技術(shù)、基因敲除技術(shù))、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一般操作技術(shù)等。堅(jiān)持以基礎(chǔ)知識(shí)為根本,側(cè)重相關(guān)知識(shí)、前沿知識(shí)的原則,通過對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí),使學(xué)生對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的教學(xué)內(nèi)容和方法,對(duì)其歷史、現(xiàn)狀、前沿等方面的知識(shí)有整體的了解。在教學(xué)過程中根據(jù)不同的教學(xué)內(nèi)容采用不同的教學(xué)方法。除傳統(tǒng)的教學(xué)方法以外,還采用演示法、參觀法、實(shí)驗(yàn)法等[3],以提高教學(xué)效果。
2.1演示法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的內(nèi)容十分豐富,在信息化的今天,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)課堂教學(xué)就不能再停留在單純的黑板加粉筆上,而應(yīng)該充分利用現(xiàn)代化的教學(xué)輔助手段,不然的話會(huì)造成教師努力講,學(xué)生認(rèn)真聽,但收效不大的現(xiàn)象,為此,教師在講授這門課程時(shí),不能一味地采用講授、描述等傳統(tǒng)方法幫助學(xué)生理解和記憶,還應(yīng)靈活運(yùn)用各種現(xiàn)代化的教學(xué)輔助手段,如投影、幻燈、多媒體課件等,把要講的內(nèi)容形象化,視、聽并用,以增強(qiáng)學(xué)生的感性認(rèn)識(shí),同時(shí)又有助于調(diào)動(dòng)學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性。如介紹實(shí)驗(yàn)小鼠的常用品種、品系時(shí),可以將KM小鼠、DBA小鼠、C57BL/6小鼠、615小鼠的圖片通過多媒體展示出來,并結(jié)合圖片介紹它們的生物學(xué)特性及在生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用,使學(xué)生能形象、直觀地理解和記憶,加深對(duì)不同品種、品系小鼠的認(rèn)識(shí),改變過去認(rèn)為實(shí)驗(yàn)小鼠就只有單純白色,而沒有黑色、野生色、灰色等的錯(cuò)誤觀念;再如介紹該學(xué)科較前沿的轉(zhuǎn)基因和克隆技術(shù)時(shí),也可以通過多媒體向?qū)W生展示嵌合體小鼠、綠色熒光小鼠、移植技術(shù)使身上能長(zhǎng)出人耳朵的裸鼠及動(dòng)物無性繁殖(即克隆)的動(dòng)物,激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)本課程的興趣。
2.2參觀法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的環(huán)境控制是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)一個(gè)十分重要的內(nèi)容,但在講授屏障環(huán)境時(shí),涉及到屏障環(huán)境的溫、濕度調(diào)節(jié)系統(tǒng)、通風(fēng)凈化系統(tǒng)、消毒隔離系統(tǒng)以及屏障環(huán)境系統(tǒng)內(nèi)要做到人流、物流、動(dòng)物流“三流”分開時(shí),在課堂上講,教師往往難以講清楚,學(xué)生也難以聽懂。如能根據(jù)教學(xué)目的,組織學(xué)生到實(shí)地參觀并講解,那么效果將十分好。屏障系統(tǒng)除感染性實(shí)驗(yàn)室以外,一般多為正壓,學(xué)生通過實(shí)地參觀進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室時(shí)開啟每一扇門迎面吹來的氣流就可以切身感受到屏障環(huán)境內(nèi)不同區(qū)域存在著的壓差;通過實(shí)地參觀,可以更好地理解屏障環(huán)境要進(jìn)行人、物及動(dòng)物分流的重要性,了解消毒隔離系統(tǒng)的操作規(guī)程。為今后走上工作崗位,進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作掌握第一手感性資料。
2.3實(shí)驗(yàn)法在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的實(shí)驗(yàn)教學(xué)中,教師應(yīng)盡量以學(xué)生為主體,自己僅充當(dāng)指導(dǎo)與協(xié)作者,讓學(xué)生多動(dòng)手、動(dòng)腦,以激發(fā)學(xué)生的興趣,培養(yǎng)其知難而進(jìn)的勇氣。讓其獨(dú)立完成實(shí)驗(yàn)的各個(gè)步驟,從而提高學(xué)生學(xué)習(xí)這門課程的積極性和動(dòng)手能力。對(duì)于諸如捉拿、保定、麻醉、采血、給藥等基本操作技術(shù),在進(jìn)行示范之后,要讓學(xué)生親手操作,對(duì)于學(xué)生因?qū)?dòng)物抓得太緊引起動(dòng)物窒息死亡和灌胃灌到氣管里導(dǎo)致動(dòng)物死亡等的錯(cuò)誤操作要及時(shí)予以糾正;對(duì)于不同動(dòng)物為何要采取某種采血和給藥的方式。如小鼠采血為什么多采用尾靜脈和摘眼球采血而不用心臟采血,主要原因是因?yàn)閯?dòng)物小,心率太快,無法進(jìn)行心臟采血,讓學(xué)生在實(shí)踐中找答案。這樣在教師指導(dǎo)下,既能讓學(xué)生熟練掌握實(shí)驗(yàn)技術(shù),培養(yǎng)實(shí)際操作技能,又能對(duì)一些實(shí)驗(yàn)方法有更深的了解。
當(dāng)然,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)除了以上方法以外,還可以采用討論或問題式教學(xué)方法。倡導(dǎo)以教師為主導(dǎo)、學(xué)生為主體、形式多樣、生動(dòng)活潑的師生雙向交流、教學(xué)相長(zhǎng)的教學(xué)模式,積極營(yíng)造“平等、和諧、求知、創(chuàng)新”的課堂教學(xué)氛圍,充分調(diào)動(dòng)教與學(xué)的積極性[4]。如對(duì)某抗腫瘤藥物的實(shí)驗(yàn)研究可以同學(xué)生一起討論為什么要選擇這種動(dòng)物(如裸鼠)而不選擇別的動(dòng)物,同時(shí)還可以對(duì)造模接種的部位、給藥的方式及藥效的評(píng)價(jià)等進(jìn)行探討,讓學(xué)生對(duì)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)研究從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)開始到實(shí)驗(yàn)結(jié)束全過程有一個(gè)全面的認(rèn)識(shí),為全面提高學(xué)生素質(zhì)打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
3加強(qiáng)考試考核改革,培養(yǎng)“高分高能型”的科技人才
多年來,在我國(guó)人才培養(yǎng)中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)學(xué)習(xí)成績(jī)很好,畢業(yè)后工作能力一般的所謂“高分低能型”人才現(xiàn)象,造成這種“高分低能”現(xiàn)象的主要原因是考試考核重理論輕實(shí)踐、重分?jǐn)?shù)輕能力的結(jié)果。對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)同樣存在這種情況,學(xué)生通過該課程的學(xué)習(xí)是否對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的基本知識(shí)有比較系統(tǒng)的了解,能否應(yīng)用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)的基本知識(shí)去分析和解決問題,能否熟練地開展有關(guān)動(dòng)物實(shí)驗(yàn),能否對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格的控制和科學(xué)的處理,既能反映學(xué)生“學(xué)”的效果,也能反映教師“教”的水平。以前多是通過理論考試,根據(jù)學(xué)生的分?jǐn)?shù)來評(píng)定學(xué)生“學(xué)”的效果和教師“教”的水平。不可否認(rèn),這樣的評(píng)價(jià)方法有一定的科學(xué)性、合理性和可操作性,但對(duì)像實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)這樣一門實(shí)踐性較強(qiáng)的學(xué)科就有一定的局限性。為了避免出現(xiàn)“高分低能”現(xiàn)象,培養(yǎng)“高分高能”人才,在本學(xué)科的教學(xué)改革過程中,加強(qiáng)了考核辦法的改革,對(duì)理論考試的基本概念部分可通過問答、思考、判斷題等形式考查;對(duì)綜合應(yīng)用部分可提出某個(gè)科研設(shè)想,由學(xué)生自行設(shè)計(jì),并根據(jù)其設(shè)計(jì)方案評(píng)分,同時(shí)加強(qiáng)實(shí)踐基本操作考核,將實(shí)驗(yàn)成績(jī)單列,并將實(shí)踐動(dòng)手能力考核成績(jī)提高到該門課程總成績(jī)的40%。綜合評(píng)定學(xué)生的學(xué)習(xí)效果。
盡管在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)改革方面做了一些工作,但仍存在許多亟待探索和解決的課題,如本課程內(nèi)容及相關(guān)基礎(chǔ)課(生理、病理、藥理實(shí)驗(yàn)課)合并的改革;編寫全國(guó)中醫(yī)藥院校統(tǒng)一的教科書;建立專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)教學(xué)隊(duì)伍;開設(shè)教師進(jìn)修培訓(xùn)基地,加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)科建設(shè)等。我們期望中醫(yī)藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物教學(xué)工作能夠得到教育行政管理部門及廣大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技工作者的高度關(guān)注。
【參考文獻(xiàn)】
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