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篇1

關(guān)鍵詞：化學(xué)發(fā)光分析；植物激素；應(yīng)用進(jìn)展

0 引言

化學(xué)發(fā)光分析法是一種高靈敏的微量及痕量分析法，具有儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、靈敏度高、操作方便、易與其他技術(shù)聯(lián)用和實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化顯著等優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析、食品分析環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域的應(yīng)用日益廣泛。植物激素作為內(nèi)源性植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，在植物的生長(zhǎng)發(fā)展中具有重要研究意義，其測(cè)定方法受到國(guó)內(nèi)外廣大研究者的關(guān)注?；瘜W(xué)發(fā)光分析法以高靈敏痕量分析優(yōu)勢(shì)在植物激素分析測(cè)定中具有重要應(yīng)用。本文介紹了化學(xué)發(fā)光分析的原理，并綜述了化學(xué)發(fā)光分析法植物激素分析中的應(yīng)用進(jìn)展。

1 化學(xué)發(fā)光分析

化學(xué)發(fā)光分析法是依據(jù)某一時(shí)刻化學(xué)發(fā)光反應(yīng)產(chǎn)生的輻射光強(qiáng)來(lái)確定參與反應(yīng)的相應(yīng)組分的含量的分析方法?；瘜W(xué)發(fā)光體系是化學(xué)發(fā)光法的應(yīng)用前提和基礎(chǔ)。高靈敏度、高選擇性的化學(xué)發(fā)光體系的選擇和使用是建立滿意化學(xué)發(fā)光分析方法的關(guān)鍵。隨著化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)的成熟及其與其他技術(shù)的聯(lián)用迅速發(fā)展，人們已發(fā)現(xiàn)了許多新的化學(xué)發(fā)光體系，目前常見(jiàn)的化學(xué)發(fā)光體系有：魯米諾化學(xué)發(fā)光體系、高錳酸鉀發(fā)光體系、Ce（IV） 發(fā)光體系、過(guò)渡金屬超常氧化態(tài)發(fā)光體系等。

2 化學(xué)發(fā)光法在植物激素分析的應(yīng)用

植物激素主要有6類：生長(zhǎng)素、赤霉素、細(xì)胞分裂素、脫落酸、乙烯和油菜素甾醇。植物激素在植物體內(nèi)含量甚微，分離時(shí)易破壞，掌握植物體內(nèi)激素的含量變化規(guī)律，可更好地控制植物的發(fā)育，但其在使用的同時(shí)，對(duì)環(huán)境、以及人類的健康的影響亦日趨嚴(yán)重，已引起了人們廣泛的關(guān)注[1]。化學(xué)發(fā)光分析法具有線性范圍寬、靈敏度高、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單和分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，其在實(shí)際樣品中植物激素的含量檢測(cè)中已有文獻(xiàn)報(bào)道。張韶虹等[2]基于吲哚乙酸（IAA）對(duì) [Ru（phen）32+]-Ce（Ⅳ）化學(xué)發(fā)光體系的發(fā)光增強(qiáng)作用，建立了一種化學(xué)發(fā)光直接檢測(cè)IAA的新方法，該方法實(shí)現(xiàn)了合成樣品中IAA含量的準(zhǔn)確測(cè)定。Xi等[3]采用高效液相-化學(xué)發(fā)光法（[Ru（phen） 32+]-KMnO4體系）實(shí)現(xiàn)了綠豆芽中的吲哚乙酸和脫落酸的含量檢測(cè)，檢出限分別為0.02 μg/mL、0.2 μg/mL。Neves[4]等采用Ce（Ⅳ）-HNO3-β-環(huán)糊精為發(fā)光體系實(shí)現(xiàn)了環(huán)境水樣中IAA的含量測(cè)定，檢出限為0.1mg/L。劉麗珍等[5]利用鐵氰化鉀-魯米諾體系分析測(cè)定了土壤中IAA的含量，方法的檢出限5.8×10-10 mol/L。米娟等[6]采用固相萃取-化學(xué)發(fā)光法測(cè)定Leukamenin E處理前后擬南芥中IAA含量的變化，回收率為90.9～100.9%。馬桂賢等[7]采用鐵氰化鉀化學(xué)發(fā)光體系實(shí)現(xiàn)了土壤和池塘水中IAA的含量測(cè)定，檢出限為3.0×10-8mol/L。Han等[8]采用高錳酸鉀-甲醛體系對(duì)生物樣品和土壤提取液中IAA進(jìn)行了含量測(cè)定，檢出限為1.0 nM。周國(guó)華等[9]發(fā)展了一種簡(jiǎn)化的磁性免疫分析方法，結(jié)合CdSe/ZnS納米粒子放大化學(xué)發(fā)光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了脫落酸的高靈敏檢測(cè)，脫落酸的檢測(cè)范圍為1pM到10 nM。

3 研究展望

隨著化學(xué)發(fā)光分析法的應(yīng)用日益廣泛，化學(xué)發(fā)光分析法與流動(dòng)注射系統(tǒng)、免疫技術(shù)、液相色譜等技術(shù)的聯(lián)用必將拓寬化學(xué)發(fā)光分析法在植物激素分析中的應(yīng)用，從而在農(nóng)業(yè)和工業(yè)生產(chǎn)中起到重要作用。

參考文獻(xiàn)：

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篇2

【關(guān)鍵詞】 克林霉素；魯米諾；化學(xué)發(fā)光；流動(dòng)注射

【Abstract】 Objective A novel assay for the determination of clindamycin was presented.Methods The action was significant in the chemiluminescence system of luminol-hydrogen peroxide with clindamycin as an enhancer. The enhancement of CL intensity was proportional to the concentration of clindamycin.Results The enhanced chemiluminescence intensity was linear with the concentration of clindamycin over the range from 1.0 pg/ml to 1.0 ng/ml (r2 = 0.9996)， the detection limit was 0.3 pg/ml (3σ) with a relative standard deviation of less than 3.0% (n = 5). The proposed method was applied successfully in the assay of clindamycin in capsules， human urine and serum without any pre-treatment procedure.Conclusion The proposed method offers advantages of simplicity， high sensitivity， selectivity and wide linear for the determination of clindamycin.

【Key words】 clindamycin； luminol； flow injection； chemiluminescence

克林霉素為一種抗生素，適用于葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等引起的皮膚軟組織感染、上下呼吸道感染、急慢性骨髓炎等。測(cè)定克林霉素方法很多，主要有配置不同檢測(cè)器的高效液相色譜法（如紫外檢測(cè)器［1］、質(zhì)譜檢測(cè)器［2］、電化學(xué)檢測(cè)器［3］）、膠體電動(dòng)色譜［4］等。采用流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光法測(cè)定克林霉素尚未見(jiàn)報(bào)道?；瘜W(xué)發(fā)光法具有以下優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、線性范圍寬、快速測(cè)定、設(shè)備便宜、操作簡(jiǎn)單。在魯米諾-過(guò)氧化氫體系中，克林霉素能夠顯著加強(qiáng)該體系的發(fā)光強(qiáng)度， 且克林霉素的濃度從1.0pg/ml到1.0ng/ml，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差少于3.0%(n=5)，檢出限為0.3pg/ml (3σ)。當(dāng)流速為2.0ml/min時(shí)，測(cè)定克林霉素能在0.5min內(nèi)完成。該方法被成功地應(yīng)用于克林霉素膠囊、尿樣、血樣的測(cè)定，且回收率為86.2%～108.8%。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑 實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為分析純。魯米諾購(gòu)自Fluka， Biochemika，其貯備液為2.5×10-2mol/L；5×10-5 mol/L過(guò)氧化氫溶液；0.05mol/L氫氧化鈉溶液；克林霉素購(gòu)自陜西省藥物管理所，其標(biāo)準(zhǔn)液為1.988mg/ml； 實(shí)驗(yàn)中所用水均由二次水經(jīng)Milli-Q (Millipore，Bedford， MA， USA)純化。

1.2 實(shí)驗(yàn)操作 開(kāi)動(dòng)蠕動(dòng)泵待記錄儀基線穩(wěn)定后，按圖1所示流動(dòng)注射分析流路，在流速為2ml/min條件下，將魯米諾溶液與過(guò)氧化氫溶液同載液混合后通過(guò)六通閥與克林霉素試液進(jìn)入混合管，在氫氧化鈉存在的條件下在發(fā)光池內(nèi)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。發(fā)光強(qiáng)度用光電倍增管接收，然后用記錄儀記錄發(fā)光強(qiáng)度值。

P：蠕動(dòng)泵；V：流通閥；MT：混合管；FC：流通池；

W：廢液；D：檢測(cè)部；R：記錄儀

2 結(jié)果與討論

2.1 魯米諾-過(guò)氧化氫化學(xué)發(fā)光動(dòng)力學(xué)特性 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)從進(jìn)樣到出現(xiàn)發(fā)光最大強(qiáng)度需3s，在15s后趨于零。

2.2 反應(yīng)條件

2.2.1 魯米諾和過(guò)氧化氫濃度及pH值對(duì)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響 實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)魯米諾和H2O2的濃度分別為1.0×10-7mol/L和1.0×10-5mol/L時(shí)，克林霉素對(duì)該體系有最強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。由于魯米諾的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)是在堿性條件下進(jìn)行的，所以通過(guò)使用氫氧化鈉來(lái)提高該體系的靈敏度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明氫氧化鈉的濃度為0.025mol/L時(shí)，該體系有最強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光信號(hào)。

2.2.2 流路參數(shù) 實(shí)驗(yàn)表明，當(dāng)流速為2.0ml/min，混合管長(zhǎng)度為5.0cm時(shí)，實(shí)驗(yàn)有良好的靈敏度和重現(xiàn)性，發(fā)光信號(hào)具有最大的信噪比。

2.3 克林霉素膠囊的測(cè)定 取克林霉素膠囊10粒，研細(xì)混勻。稱量適量的質(zhì)量，用水溶解，過(guò)濾，定容于250ml的容量瓶中。移取適量該溶液稀釋到工作濃度范圍，用標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.4 人血清和尿液中克林霉素的測(cè)定 本文所提出的方法可初步用于測(cè)定尿液和血清中克林霉素的含量。取志愿者的新鮮尿液加入適量的標(biāo)準(zhǔn)克林霉素溶液并稀釋到工作濃度范圍，標(biāo)準(zhǔn)加入法測(cè)定回收率。血樣來(lái)源于西北大學(xué)附屬醫(yī)院，測(cè)定方法同上述，結(jié)果見(jiàn)表2。 注：a：尿液；b：血清

1 Batzias GC， Delis GA， Koutsoviti-Papadopoulou M. A new HPLC/UV method for the determination of clindamycin in dog blood serum. J Pharmaceut Biomed Anal， 2004， 35 (3)： 545-554.

2 Cherlet M， Croubels S， de Backer P. Determination of clindamycin in animal plasma by high-performance liquid chromatography combined with electrospray-ionization mass spectrometry. J Mass Spectrom， 2002， 37(8)： 848-853.

篇3

[關(guān)鍵詞] 電化學(xué)發(fā)光法；放射免疫法；甲狀腺激素

[中圖分類號(hào)] R446.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2012）03-0071-02

Comparing of measurement of thyroid hormones by ECLIA and RIA

ZHANG Yuping

Deparment of Clinical Laboratory, the Affiliated Hospital of Xinyang Vocational and Technical College, Xinyang 464000, China

[Abstract] Objective To compare which one is superiority in result of reliability and methodology of convenience between ECLIA and RIA measurement. Methods The thyroid hormones were measured by ECLIA and RIA. The measurements were compared of precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range and others. Results Precision, sensitivity, coefficient of recovery, linear range of ECLIA have had an advantage over RIA. Conclusion ECLIA is an outstanding method applied in clinical laboratory.

[Key words] ECLI; RIA; Thyroid hormones

放射免疫法（RIA）檢測(cè)成本低，但具有報(bào)告時(shí)間長(zhǎng)、結(jié)果不穩(wěn)定、同位素污染等缺點(diǎn)，漸趨于淘汰。近年來(lái)隨著檢測(cè)分析技術(shù)的發(fā)展，電化學(xué)發(fā)光（ECLI）分析法日益受到關(guān)注，本文分別采用2種方法對(duì)甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和20份患者血清甲狀腺激素進(jìn)行測(cè)定并對(duì)其評(píng)價(jià)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

20份血清標(biāo)本取自門診患者，均為甲狀腺疾病，血標(biāo)本無(wú)脂血和溶血。標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品均為羅氏公司提供。

1.2 儀器與試劑

電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀為美國(guó)羅氏公司生產(chǎn)的2010型；美國(guó)產(chǎn)全自動(dòng)γ計(jì)數(shù)儀。電化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑購(gòu)于羅氏公司，放射免疫分析試劑購(gòu)于天津九鼎公司。

1.3 方法

1.3.1 精密度 用兩種方法分別對(duì)中、高值質(zhì)控品進(jìn)行測(cè)定，每份樣品連測(cè)20次，計(jì)算批內(nèi)CV值。每日測(cè)定1次，連續(xù)20次，計(jì)算批間CV值。

1.3.2 線性范圍 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol/L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）及中、高值質(zhì)控品按不同比例關(guān)系混合制成評(píng)價(jià)樣品，重復(fù)測(cè)定5次。坐標(biāo)圖上預(yù)期值與實(shí)測(cè)值的直線所達(dá)的限值即為線性范圍。

1.3.3 靈敏度 分別對(duì)空白零標(biāo)準(zhǔn)做批內(nèi)20次檢測(cè)，分別記錄放射強(qiáng)度和發(fā)光強(qiáng)度并做統(tǒng)計(jì)，再計(jì)算檢測(cè)低限（LLD）[1]。公式：LLD=均值BIK+2SBLK。

1.3.4 回收實(shí)驗(yàn) 將甲狀腺激素標(biāo)準(zhǔn)品（FT3 40 pmol／L，F(xiàn)T4 45 pmol/L，TSH 100 mIU/L）作為基質(zhì)，在其中分別加入中、高值質(zhì)控品作為樣品1和2 ，然后分別進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算均值并進(jìn)行比較。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P ＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度

觀察兩種方法測(cè)定甲狀腺激素的批內(nèi)和批間CV結(jié)果可見(jiàn)，兩種方法均達(dá)到了臨床檢驗(yàn)的質(zhì)量要求，但電化學(xué)發(fā)光法的精密度更高。見(jiàn)表1、2。

2.2 線性范圍

2種方法檢測(cè)FT3、FT4、TSH的可報(bào)告范圍：電化學(xué)發(fā)光免疫法（0.26～115） pmol/L、（0.12～116） pmol/L、（0.08～90）mIU/L。放射免疫法為（1.14～65）pmol/L、（1.69～82） pmol/L、（0.23～58）m/L。

2.3 靈敏度

兩種方法檢測(cè)FT3、FT4、TSH的低限，電化學(xué)發(fā)光免疫法為0.12pmol/L、0.16pmol/L、0.09mIU/L；放射免疫法為1.11pmol/L、1.77pmol/L、0.24mIU/L。

2.4 回收實(shí)驗(yàn)

檢測(cè)結(jié)果平均回收率見(jiàn)表。均有較好的回收率，比較后發(fā)現(xiàn)電化學(xué)發(fā)光免疫法優(yōu)于放射免疫法（P ＜ 0.05）。

3 討論

放射免疫分析始于20世紀(jì)60年代，其敏感度、特異性均較好，發(fā)生交叉反應(yīng)少，準(zhǔn)確性好、重復(fù)性好、批內(nèi)批間誤差低，但容易發(fā)生放射性污染，不能形成自動(dòng)化，不能快速地檢測(cè)、出報(bào)告[1]。電化學(xué)發(fā)光免疫法是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的新一代標(biāo)記免疫技術(shù)，近年來(lái)在國(guó)內(nèi)一部分臨床實(shí)驗(yàn)室相繼應(yīng)用。電化學(xué)發(fā)光免疫法不僅可用于檢測(cè)激素類、腫瘤標(biāo)志物類，還可用于傳染病、血藥濃度的監(jiān)測(cè)，預(yù)計(jì)將來(lái)臨床應(yīng)用會(huì)更加廣泛。電化學(xué)發(fā)光免疫法自動(dòng)化強(qiáng)，可以24小時(shí)開(kāi)機(jī)，能夠隨時(shí)滿足現(xiàn)代醫(yī)院的節(jié)奏和病人對(duì)醫(yī)院的更高要求，如一些急診項(xiàng)目；絨毛膜促性腺激素、肌紅蛋白、肌鈣蛋白等，隨時(shí)檢測(cè)，具有更大的臨床應(yīng)用價(jià)值[2]。

本組試驗(yàn)表明兩種方法檢測(cè)血清FT3、FT4、TSH的結(jié)果在精密度、線性范圍、靈敏度、回收率等幾方面均有顯著性差異，顯示電化學(xué)發(fā)光免疫法明顯優(yōu)于放射免疫法。電化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)血清FT3、FT4、TSH時(shí)，被測(cè)抗原與抗體全部參與反應(yīng)；而放射免疫法是競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，被測(cè)物和標(biāo)準(zhǔn)物都不能全部參與反應(yīng)，最大結(jié)合時(shí)一般在50%左右，亦即抗體結(jié)合位點(diǎn)與標(biāo)記抗原結(jié)合一半[3]。試驗(yàn)結(jié)果顯示了電化學(xué)發(fā)光免疫法在可測(cè)定范圍上要遠(yuǎn)勝于放射免疫法。

電化學(xué)發(fā)光可以最大程度消除樣本底的干擾及對(duì)位量的散射，可以獲得較高的靈敏度。另外電化學(xué)發(fā)光免疫法可以全自化，能夠最大限度減少系統(tǒng)和隨機(jī)誤差。而且電化學(xué)發(fā)光免疫法試劑有效期長(zhǎng)，檢測(cè)快速準(zhǔn)確，且安全無(wú)毒，不會(huì)出現(xiàn)同位素輻射污染的問(wèn)題[4]。

因此，電化學(xué)發(fā)光將會(huì)成為微量法檢測(cè)的發(fā)展和普及方向，可以替代放免法，使實(shí)驗(yàn)室的服務(wù)具有競(jìng)爭(zhēng)力。

[參考文獻(xiàn)]

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篇4

【關(guān)鍵詞】 酶聯(lián)免疫法；電化學(xué)發(fā)光法；甲胎蛋白；結(jié)果對(duì)比

甲胎蛋白（AFP）是胚胎發(fā)育前期一類血清蛋白， 健康者血清內(nèi)AFP含量保持在2～8 ng/ml， 通常均

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2011年1月～2012年12月120例血清標(biāo)本， 其中男64例， 女56例， 年齡35.8～68.4歲。血清標(biāo)本中， 66例檢測(cè)結(jié)果表明甲胎蛋白含量正常， 54例非正?；?/p>

1. 2 方法 患者均予以酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。酶聯(lián)免疫法：選取合理試劑盒檢查， 且根據(jù)試劑盒操作說(shuō)明， 應(yīng)用酶標(biāo)儀， 實(shí)施甲胎蛋白含量測(cè)定。

電化學(xué)發(fā)光法：選取羅氏Cobase-411電化學(xué)發(fā)光自動(dòng)分析儀， 測(cè)定甲胎蛋白含量。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)均應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理， 計(jì)量資料以（ x-±s）表示， P

2 結(jié)果

應(yīng)用最小二乘法擬合直線方式， 對(duì)比分析酶聯(lián)免疫法（Y）與電化學(xué)發(fā)光法（X）測(cè)定結(jié)果， 查看是否存在相關(guān)性， 結(jié)果顯示酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法存在線性關(guān)系， 且存在較高相關(guān)性。將兩種檢測(cè)方法所得到的甲胎蛋白檢測(cè)值， 予以正態(tài)分布分析， 測(cè)定結(jié)果表明其正態(tài)分布相符合， 以t檢驗(yàn)其均值， 結(jié)果表明在95%可信區(qū)間， 雙尾檢驗(yàn)（P>0.05）， 由此可知酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

甲胎蛋白（AFP）是胚胎血清內(nèi)一種腫瘤相關(guān)抗蛋白原， 主要源自于胎肝合成， 在新生兒出生后會(huì)快速減少， 新生兒出生后幾個(gè)月到1年內(nèi)會(huì)下降到正常，

化學(xué)發(fā)光法源自于上世紀(jì)90年代， 還屬于一種較為新興的技術(shù)， 是一種新型標(biāo)記免疫分析措施， 應(yīng)用電化學(xué)發(fā)光與免疫檢測(cè)相互結(jié)合， 予以甲胎蛋白水平測(cè)定。予以化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)可以較為快速、結(jié)果具有較高準(zhǔn)確性、檢測(cè)范圍廣泛、且不會(huì)產(chǎn)生放射性污染， 且存在較高自動(dòng)化等特點(diǎn)， 在臨床檢測(cè)中逐漸得到廣泛應(yīng)用， 此檢測(cè)方法所應(yīng)用設(shè)備與對(duì)相試劑具有較為昂貴的價(jià)格， 一定程度上造成其臨床應(yīng)用局限性。酶聯(lián)免疫法（ELISA）在應(yīng)用中操作比較簡(jiǎn)單、所需成本較低， 因此能夠廣泛應(yīng)用到甲胎蛋白臨床檢測(cè)中， 特別在基層醫(yī)院有利于患者篩查， 但是此方法并無(wú)較高檢測(cè)敏感性， 而且無(wú)較高準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性， 導(dǎo)致其檢測(cè)結(jié)果無(wú)法達(dá)到理想程度。因此， 本文所選取兩種檢測(cè)方法均存在自身優(yōu)點(diǎn)， 也具有一定局限性， 經(jīng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)出現(xiàn)假陽(yáng)性或陽(yáng)性狀態(tài)時(shí)， 可予以電化學(xué)發(fā)光法完成確診。

在本文研究中， 應(yīng)用最小二乘法擬合直線方式， 對(duì)比分析酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法所測(cè)定結(jié)果， 觀察兩組是否存在一定相關(guān)性， 經(jīng)檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法存在一定線性關(guān)系， 其相關(guān)性較為顯著。兩種測(cè)定方法對(duì)甲胎蛋白進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果， 予以正態(tài)分布分析， 發(fā)現(xiàn)其結(jié)果與正態(tài)分布相符合， 統(tǒng)計(jì)均值， 應(yīng)用t檢驗(yàn)， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)95%可信區(qū)間內(nèi)（P>0.05）， 所以酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法對(duì)結(jié)果測(cè)定并無(wú)較高差異性。有資料顯示， ECLIA法批內(nèi)變異系數(shù)及批間變異系數(shù)與ELISA法相比較均明顯降低， 存在較高重復(fù)性與穩(wěn)定性；在AFP400 μg/L狀態(tài)下， ECLIA法相比較ELISA法具有更高敏感性， 且P

總之， 酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法均可以反應(yīng)甲胎蛋白具體含量， 且其準(zhǔn)確性較高， 腫瘤在診斷治療過(guò)程中， 兩組方法所得到結(jié)果均能夠作為嚴(yán)重依據(jù)應(yīng)用， 且以此判定預(yù)后， 準(zhǔn)確率較高。不同檢測(cè)方法對(duì)患者樣品進(jìn)行測(cè)定時(shí)， 所得結(jié)果往往均存在一定可比性， 所以在選取檢測(cè)方法時(shí)一定要根據(jù)患者情況， 不能過(guò)于盲目與輕視。在對(duì)患者進(jìn)行檢測(cè)過(guò)程中， 同一患者同項(xiàng)目的檢驗(yàn)結(jié)果需存在一定可比性。酶聯(lián)免疫法與電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)AFP腫瘤標(biāo)志物效果明顯， 應(yīng)用價(jià)值較高。

參考文獻(xiàn)

[1] 黃延平.電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）檢測(cè)甲胎蛋白（AFP）對(duì)原發(fā)性肝癌的臨床診斷.中國(guó)民康醫(yī)學(xué)， 2010，22（9）：1127.

篇5

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)激動(dòng)素對(duì)固定于碳納米管/nafion復(fù)合膜修飾電極上的吡啶釕弱電化學(xué)發(fā)光信號(hào)有強(qiáng)的增敏作用，基于此建立了一種高靈敏的電化學(xué)發(fā)光直接測(cè)定激動(dòng)素的新方法。在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，本方法測(cè)定激動(dòng)素的線性范圍為5.0×10－8～4.0×10－5g/l；檢出限為2.0×10－8 g/l；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd）為5.8% (n=11, c=5×10－6 g/l)；方法操作簡(jiǎn)單方便，靈敏度高。

【關(guān)鍵詞】 激動(dòng)素 電化學(xué)發(fā)光 修飾電極 吡啶釕

1 引言

植物激素是一類對(duì)植物生長(zhǎng)有顯著作用的微量有機(jī)分子。它們雖然分子量較小，結(jié)構(gòu)較簡(jiǎn)單，但其生理效應(yīng)卻復(fù)雜多樣。從影響細(xì)胞的分裂、伸長(zhǎng)、分化到影響植物的發(fā)芽、生根、開(kāi)花、結(jié)果、性別決定、休眠和脫落等[1]。所以，植物激素對(duì)植物的生長(zhǎng)發(fā)育有重要的調(diào)控作用。目前植物激素主要包括九類[2]，分別是生長(zhǎng)素、赤霉素、細(xì)胞分裂素、脫落酸、乙烯、油菜素內(nèi)酯、茉莉酸類、水楊酸及多胺類。這些激素各自有著獨(dú)特的生理效應(yīng)，或協(xié)調(diào)植物的生長(zhǎng)發(fā)育，或調(diào)控植物應(yīng)對(duì)各種逆境，而且九類激素還可以通過(guò)增效或拮抗的方式組成復(fù)雜的調(diào)控體系，使得對(duì)于植物生長(zhǎng)發(fā)育或者應(yīng)對(duì)外界環(huán)境的調(diào)控機(jī)制更加復(fù)雜和精細(xì)。激動(dòng)素(又叫動(dòng)力精)，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞分裂素[3]。WWw.133229.CoM在20世紀(jì)50年代初期，很多科學(xué)家開(kāi)始從生物組織中獲取化學(xué)物質(zhì)并研究其各種性質(zhì)。1954年，米勒發(fā)現(xiàn)青魚(yú)dna中有一種微量物質(zhì)，可以促進(jìn)細(xì)胞漿的移動(dòng)[4]，這種物質(zhì)被稱為激動(dòng)素。1955年，人們確定這種物質(zhì)為6呋喃甲基腺嘌呤(分子式為c10h9n5o)。盡管激動(dòng)素不是一種天然的細(xì)胞分裂素，但后來(lái)人們發(fā)現(xiàn)它和天然的細(xì)胞分裂素有類似的結(jié)構(gòu)[5]，即在c6位置都有一個(gè)取代的嘌呤環(huán)，改變?cè)摻Y(jié)構(gòu)可以減弱或消除其細(xì)胞動(dòng)力學(xué)活性。激動(dòng)素的主要作用是促進(jìn)細(xì)胞分裂，同時(shí) 還具有延緩離體葉片衰老、誘導(dǎo)花芽分化和增加氣孔開(kāi)度等作用[1,6]。此外，激動(dòng)素對(duì)離體小麥葉片中蛋白質(zhì)含量的下降有延緩作用[7]；對(duì)的花期具有延遲作用[8]；對(duì)鼠的實(shí)驗(yàn)表明，它具有逆轉(zhuǎn)肝纖維化的作用[9]。由此可見(jiàn)，激動(dòng)素在農(nóng)業(yè)及生物研究方面具有廣闊的應(yīng)用前景。目前，已報(bào)道的測(cè)定激動(dòng)素的方法主要有離子交換法[10]、高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜法[11]、熒光[12]、電化學(xué)[13～15]等方法。這些方法存在一些不足，如儀器昂貴、操作復(fù)雜、靈敏度較低等。

電化學(xué)發(fā)光(ecl)是指通過(guò)電化學(xué)的方法在電極表面產(chǎn)生一些特殊的物質(zhì)，這些物質(zhì)之間或與體系中其它組分之間通過(guò)電子傳遞形成激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)返回到基態(tài)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，是電化學(xué)與化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合的產(chǎn)物。用光電倍增管等光學(xué)儀器測(cè)量電化學(xué)發(fā)光過(guò)程中發(fā)光光譜和強(qiáng)度，從而對(duì)痕量物質(zhì)進(jìn)行分析 [16]。該分析方法具有靈敏度高、線性范圍寬、發(fā)光信號(hào)易于檢測(cè)、易于控制和裝置簡(jiǎn)單等特點(diǎn)。吡啶釕[ru(bpy)3]2+是發(fā)光效率較高的電化學(xué)發(fā)光活性物質(zhì)，近年來(lái)它被廣泛應(yīng)用于有機(jī)酸，氨基酸和藥物的測(cè)定[17]。但由于吡啶釕用于溶液相電化學(xué)發(fā)光體系時(shí)，昂貴試劑吡啶釕的不斷消耗帶來(lái)成本高、環(huán)境污染和實(shí)驗(yàn)裝置復(fù)雜等問(wèn)題，使它的應(yīng)用受到限制。基于電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中[ru(bpy)3]2+在電極表面循環(huán)使用的特點(diǎn)，把[ru(bpy)3]2+固定在電極表面不僅可以克服上述問(wèn)題，還可以提高電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度[18]。 因此，人們提出了許多方法和材料，以將吡啶釕固定在電極表面。在所有的固定化方法中，nafion 是最常用的一種材料，基于nafion的離子交換特性，[ru(bpy)3]2+ 可以通過(guò)離子交換作用被固定于純的nafion膜中[19]。而將[ru(bpy)3]2+固定在碳納米管/nafion復(fù)合物膜修飾電極表面可以使[ru(bpy)3]2+在nafion膜上的電化學(xué)發(fā)光特性有較大的改善[20]。在這種固定化方法中，nafion充當(dāng)膜材料、離子交換劑和碳納米管的溶劑；而碳納米管在nafion膜中起到吸附吡啶釕、改善膜結(jié)構(gòu)及作為膜中的導(dǎo)電通道等作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，激動(dòng)素對(duì)碳納米管/nafion[ru(bpy)3]2+修飾電極的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)有強(qiáng)的增敏作用，基于此建立了一種高靈敏度測(cè)定激動(dòng)素的電化學(xué)發(fā)光新方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器和試劑

rec100型電化學(xué)分析工作站，rfl1型超微弱化學(xué)發(fā)光/生物發(fā)光檢測(cè)儀，iffsa型多功能化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器(以上儀器均為西安瑞邁分析儀器有限公司生產(chǎn))；采用三電極體系：碳納米管/nafion修飾的石墨電極為工作電極，纏繞鉑絲為對(duì)電極，ag/agcl電極作參比電極。

1.0 g/l的激動(dòng)素儲(chǔ)備液：稱取激動(dòng)素(北京鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司)25 mg，用0.1mol/l naoh溶解并用二次蒸餾水定容至25 ml棕色容量瓶中，于冰箱中4 ℃避光保存；吡啶釕(sigma 公司)儲(chǔ)備溶液（濃度約為1.0×10－3mol/l）： 量取適量吡啶釕，用二次蒸餾水溶解后，儲(chǔ)于棕色瓶中避光保存；nafion(aldrich公司)，用乙醇稀釋成5.0g/l備用；多壁碳納米管(深圳納米技術(shù)進(jìn)出口有限責(zé)任公司)；水為二次蒸餾水，其余試劑均為分析純?cè)噭?/p>

2.2 修飾電極的制備方法

將適量碳納米管粉末超聲分散在一定濃度的nafion溶液中，形成較穩(wěn)定的懸濁液。移取10 μl上述懸濁液均勻滴涂在處理過(guò)的洗凈石墨電極表面，在室溫環(huán)境中放置電極至溶劑蒸發(fā)電極表面干燥，然后把該電極浸在1.0×10－4 mol/l吡啶釕溶液中約0．5 h，電極取出后用蒸餾水充分沖洗其表面，再在0.1 mol/l磷酸鹽緩沖溶液中循環(huán)伏安掃描至電流穩(wěn)定。

以上述準(zhǔn)備好的修飾電極為工作電極進(jìn)行相關(guān)電化學(xué)及電化學(xué)發(fā)光測(cè)試。

3 結(jié)果與討論

3.1 吡啶釕的固定化

采用循環(huán)伏安法研究了固定在碳納米管/nafion復(fù)合物膜修飾電極表面的吡啶釕的電化學(xué)行為。分別測(cè)定了裸石墨電極、純nafion修飾電極和碳納米管/nafion復(fù)合物膜修飾電極在含有1.0×10－4mol/l吡啶釕的磷酸鹽緩沖溶液中的循環(huán)伏安行為。實(shí)驗(yàn)表明，吡啶釕在此3種電極上的循環(huán)伏安響應(yīng)在形狀上相似，這說(shuō)明通過(guò)簡(jiǎn)單的復(fù)合物膜修飾電極浸入吡啶釕溶液中可以有效固定吡啶釕，并且固定在電極上的吡啶釕能保持其良好的電化學(xué)行為。但吡啶釕在此3種電極上的氧化還原峰電流值明顯不同，裸電極上的電流強(qiáng)度最小，純nafion修飾電極次之，復(fù)合物修飾電極的電流強(qiáng)度最大。另外，固定吡啶釕的修飾電極在磷酸鹽緩沖溶液中連續(xù)多次掃描對(duì)吡啶釕的氧化還原電流值沒(méi)有明顯的影響，此結(jié)果表明，此修飾電極具有較高的穩(wěn)定性。這些結(jié)果和文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致。

3.2 激動(dòng)素的電化學(xué)行為

實(shí)驗(yàn)時(shí)，把裸石墨電極先后分別放入ph=9.0的磷酸鹽緩沖溶液和含有一定濃度激動(dòng)素的相同ph的磷酸鹽緩沖溶液中，其循環(huán)伏安曲線如圖1所示。結(jié)果說(shuō)明，在不含激動(dòng)素的緩沖溶液中得到的循環(huán)伏安圖（a）上沒(méi)有出現(xiàn)氧化還原峰，而含有激動(dòng)素時(shí)所得的循環(huán)伏安圖（b）在0.8～0.9 v位置處出現(xiàn)了明顯的氧化峰。這表明在適當(dāng)條件下激動(dòng)素可以發(fā)生電化學(xué)氧化反應(yīng)。同時(shí)，激動(dòng)素的循環(huán)伏安圖上只有氧化峰而無(wú)相應(yīng)的還原峰，這說(shuō)明激動(dòng)素在石墨電極上的氧化反應(yīng)為不可逆反應(yīng)。此結(jié)果與文獻(xiàn)[15]報(bào)道類似。

3.3 激動(dòng)素對(duì)吡啶釕氧化過(guò)程的催化作用

實(shí)驗(yàn)考察了激動(dòng)素對(duì)固定于碳納米管/nafion復(fù)合物膜中的吡啶釕電化學(xué)行為的催化作用。圖2表示碳納米管/nafion吡啶釕修飾電極分別在0.1 mol/l磷酸鹽緩沖溶液（ph=9）中的循環(huán)伏安曲線（b）和在含有一定濃度激動(dòng)素的0.1 mol/l磷酸鹽緩沖溶液（ph=9）中的循環(huán)伏安曲線（a）。由圖2可以看出：加入激動(dòng)素后所得的循環(huán)伏安曲線與沒(méi)加激動(dòng)素所得曲線相比，吡啶釕的氧化峰電流大大增強(qiáng)，而還原峰電流明顯減小。這表明吡啶釕對(duì)激動(dòng)素的電化學(xué)氧化反應(yīng)有催化作用。此現(xiàn)象與三丙胺對(duì)吡啶釕電化學(xué)行為的催化作用類似，由此可知激動(dòng)素對(duì)吡啶釕的電化學(xué)發(fā)光增敏作用與三丙胺一致。

圖1 裸石墨電極分別在ph=9的磷酸鹽緩沖溶液(a)和含有激動(dòng)素的ph=9的磷酸鹽緩沖溶液（b）中的循環(huán)伏安曲線.(掃速為0.05 v/s)（略）

fig.1 cyclic voltammograms of bare graphite electrode in phosphate buffer solution (ph=9) with (b) and without kinetin（a）(scan rate: 0.05 v/s)

圖2 碳納米管/nafion吡啶釕修飾電極在含有激動(dòng)素的磷酸鹽緩沖溶液(a)和空白緩沖溶液(b)中的循環(huán)伏安曲線(ph=9)（略）

fig.2 cyclic voltammograms of carbon nanotube/nafionru(bpy)2＋3 in phosphate buffer solution with (a) and without kinetin (b)(ph=9)

3.4 激動(dòng)素對(duì)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光的增敏作用

實(shí)驗(yàn)分別測(cè)定了吡啶釕修飾電極在ph=9的磷酸鹽緩沖溶液和含有5×10－6g/l激動(dòng)素的相同磷酸鹽緩沖溶液中的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)。結(jié)果表明：激動(dòng)素的加入使吡啶釕弱的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)大大增強(qiáng)，而且隨著激動(dòng)素加入量的增加，電化學(xué)發(fā)光信號(hào)持續(xù)增大，說(shuō)明了激動(dòng)素對(duì)吡啶釕的弱電化學(xué)發(fā)光具有明顯的增敏作用。

3.5 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化

3.5.1 ph的選擇 本實(shí)驗(yàn)以0.1 mol/l k2hpo4/nah2po4緩沖溶液為介質(zhì)，分別用裸石墨電極和固定有吡啶釕的修飾石墨電極考查了在各種ph時(shí)激動(dòng)素自身的電化學(xué)行為、激動(dòng)素對(duì)吡啶釕的電化學(xué)反應(yīng)的催化程度、以及對(duì)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光增敏程度的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在酸性介質(zhì)中時(shí)，幾乎看不出激動(dòng)素的氧化峰，而在偏堿性介質(zhì)中時(shí)，激動(dòng)素有明顯的氧化峰(圖3)。這表明激動(dòng)素在堿性介質(zhì)中才易于被氧化，這與文獻(xiàn) [15]報(bào)道一致。而此時(shí)吡啶釕的氧化峰電位也比酸性介質(zhì)中的偏負(fù)，峰電流比酸性介質(zhì)中大(圖4)，即堿性介質(zhì)中激動(dòng)素對(duì)吡啶釕的催化效果也更好。

圖3 裸石墨電極在含相同濃度激動(dòng)素的不同ph的磷酸鹽緩沖溶液中的循環(huán)伏安曲線（略）

fig.3 cyclic voltammograms of kinetin at bare graphite electrode in phosphate buffer solutions with different ph

掃速（scan rate）: 0.05 v/s。

實(shí)驗(yàn)中同時(shí)考察了不同ph的介質(zhì)對(duì)激動(dòng)素增敏的吡啶釕電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)ph較小時(shí)，隨著ph的增大，增敏的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)逐漸增大；當(dāng)ph＝9.2時(shí)，激動(dòng)素增敏的吡啶釕電化學(xué)發(fā)光信號(hào)達(dá)到最大；而隨后隨著ph的增大增敏的電化學(xué)信號(hào)開(kāi)始下降(圖5)。上述實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象說(shuō)明激動(dòng)素對(duì)吡啶釕的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的增敏作用與其脫質(zhì)子過(guò)程有關(guān)，這與文獻(xiàn)[21]報(bào)道的三丙胺和吲哚乙酸對(duì)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光信號(hào)的增敏作用類似。本實(shí)驗(yàn)選擇ph 9.2的0.1 mol/l k2hpo4/nah2po4緩沖溶液為介質(zhì)。

圖4 碳納米管/nafion吡啶釕修飾的石墨電極在含相同濃度激動(dòng)素的不同ph的磷酸鹽緩沖溶液中的循環(huán)伏安曲線（略）

fig.4 cyclic voltammograms of kinetin at carbon nanotube/nafion ru(bpy)2＋3 modified graphite electrode in phosphate buffer solution with different ph

掃速（scan rate）: 0.05 v/s. 1. ph 9.1; 2. ph 8.7; 3. ph 6.7; 4. ph 4.7.

圖5 緩沖溶液質(zhì)ph對(duì)電化學(xué)發(fā)光信噪比的影響(激動(dòng)素: 5 ×10－6 g/l)（略）

fig.5 effect of ph on ecl signal/noise (kinetin: 5 ×10－6 g/l)

3.5.2 電解方式的選擇 電化學(xué)發(fā)光的分析特性與激發(fā)信號(hào)的施加方式關(guān)系極為密切，其主要原因是電化學(xué)發(fā)光物質(zhì)的產(chǎn)生速度在擴(kuò)散層中的動(dòng)態(tài)分布以及電化學(xué)反應(yīng)與電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)相匹配的程度等步驟受電化學(xué)激發(fā)方式的調(diào)控[22]。本實(shí)驗(yàn)主要考察了循環(huán)伏安、線性掃描、恒電位和階躍脈沖等電解方式對(duì)激動(dòng)素增敏的吡啶釕電化學(xué)發(fā)光行為，結(jié)果發(fā)現(xiàn)循環(huán)伏安法呈現(xiàn)出更好的電化學(xué)發(fā)光分析特性，穩(wěn)定性好，且信噪比較高，所以實(shí)驗(yàn)中采用循環(huán)伏安作為最佳電化學(xué)激發(fā)信號(hào)。

3.5.3 掃描速度的選擇及電極反應(yīng)過(guò)程 將碳納米管/nafion吡啶釕修飾電極放入含5.0×10－6 g/l激動(dòng)素的磷酸鹽緩沖溶液(ph=9.2)中，記錄不同掃描速率時(shí)的循環(huán)伏安曲線(圖6a)。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，隨著掃描速率的增加，吡啶釕峰電位正移，峰電流增大，并且峰電流與掃描速率的平方根成正比。這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：吡啶釕體系的電極反應(yīng)為擴(kuò)散控制過(guò)程。實(shí)驗(yàn)同時(shí)考察了掃描速率分別為0.25、0.16、0.1、0.05和0.025 v/s時(shí)的電化學(xué)發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定性及信噪比(圖6b)，發(fā)現(xiàn)掃描速率較小時(shí)電化學(xué)發(fā)光信號(hào)更穩(wěn)定，信噪比也更高。所以本實(shí)驗(yàn)選擇的掃描速率為0.05 v/s。

圖6 掃描速度對(duì)循環(huán)伏安曲線(a)和電化學(xué)發(fā)光信噪比(b)的影響（略）

fig.6 effect of scan rate on cyclic voltammograms at carbon nanotube/nafionru(bpy)2+3 (a) and signal/noise of ecl(b)

1. 0.09 v/s; 2. 0.04 v/s.

3.6 分析特性

在上述的最佳實(shí)驗(yàn)條件下，激動(dòng)素增敏的吡啶釕電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度值與激動(dòng)素的濃度在5.0×10－8～4.0×10－5 g/l范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，線性回歸方程為i=28+0.142c(10－8 g/l)，相關(guān)系數(shù)為0.9992，檢出限為2.0×10－8 g/l，對(duì)5.0 ×10－6 g/l的激動(dòng)素平行測(cè)定11次，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差rsd為5.8 %。此結(jié)果說(shuō)明：本實(shí)驗(yàn)所建立的電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定激動(dòng)素的方法具有高的靈敏度和穩(wěn)定性。

3.7 干擾實(shí)驗(yàn)

在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，考察了一些易與激動(dòng)素共存的植物激素對(duì)激動(dòng)素檢測(cè)的干擾。以1.0×10－6g/l激動(dòng)素溶液為空白溶液，與加有不同濃度的可能干擾物 (如赤霉素，吲哚乙酸等)的溶液進(jìn)行對(duì)比測(cè)定，記錄相應(yīng)的發(fā)光信號(hào)和數(shù)據(jù)。如果加入某濃度干擾物質(zhì)后，溶液的發(fā)光信號(hào)的改變程度大于或等于這種方法所允許的誤差（5%），就認(rèn)為所加入的物質(zhì)已經(jīng)產(chǎn)生了干擾。

相關(guān)數(shù)據(jù)如表1所示。實(shí)驗(yàn)表明：對(duì)于1.0×10－6 g/l激動(dòng)素，10倍的吲哚乙酸，100倍的6芐基腺嘌和等量的赤霉素，均不干擾其測(cè)定。結(jié)果表明，所建立的方法測(cè)定激動(dòng)素有較高的選擇性。本方法靈敏度高，線性范圍寬，操作簡(jiǎn)便，有望幫助進(jìn)一步了解激動(dòng)素等植物激素在植物體內(nèi)各個(gè)部分的作用方式，進(jìn)而更好地利用它們。

表1 干擾實(shí)驗(yàn)（略）

table 1 reference experiments

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篇6

[摘要] 目的 討論采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)3型糖尿病患者胰島素與血清C肽水平。 方法 選取150例2型糖尿病患者，患者于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下取坐位，靜脈抽取手肘部位血液5 mL，用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)其血清中胰島素和C肽的含量，設(shè)置同樣150例健康人作為對(duì)照，都經(jīng)電解質(zhì)、血脂、血壓、血糖、心肌酶、肝腎功能等檢查無(wú)異常，且家族無(wú)糖尿病病史。兩組在年齡、性別、病情等方面均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。 結(jié)果 對(duì)照組患者的胰島素和C肽含量為（16.25±4.02）U/L、（1.42±0.08）ng/L，觀察組患者分別為（10.34±3.19）U/L、（1.03±0.10）ng/L，觀察組患者胰島素和C肽水平都明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2型糖尿病患者胰島素與血清C肽水平操作簡(jiǎn)便，重復(fù)性好，無(wú)污染，患者依從性也高，在臨床上值得應(yīng)用推廣。[關(guān)鍵詞] 2型糖尿?。灰葝u素；C肽；化學(xué)發(fā)光法；價(jià)值分析[中圖分類號(hào)] R587.1

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A

[文章編號(hào)] 1672-4062（2016）03（a）-0074-02Analysis of the Value of Insulin and Serum C Peptide Level in Patients with Type 2 Diabetes by ChemiluminescenceFU RongHubei Provincial Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine（Hubei Xinhua Hospital）， Wuhan，Hubei Province， 430015 China[Abstract] Objective To investigate the detection of insulin and serum C peptide levels in patients with type. Methods 150 cases of patients with type 2 diabetes， patients in the fasting state take seat， vein extraction elbow blood 5ml， chemical luminescence method testing the serum insulin and C-peptide levels， set the same 150 cases of healthy people as control， the electrolyte， blood lipids， blood pressure， blood glucose， myocardial enzymes， liver and kidney function examination no abnormalities and family had a history of diabetes. There were no significant differences in age， sex， disease and other aspects between the two groups， which were comparable （P>0.05）. Results In the control group， the insulin and C peptide in（16.25±4.02）U/L，（1.42±0.08）ng/L. Patients in the observation group were（10.34±3.19） U/L，（1.03±0.10）ng/L. Observation group， the serum insulin and C-peptide levels were significantly lower than those of the control group， with significant difference. Conclusion This paper discusses the method of using chemiluminescence to detect insulin and serum C peptide level in patients with type 2 diabetes mellitus is simple， good repeatability， no pollution， patient compliance is high， and it is worthy of application in clinical practice.[Key words] 2 type Key diabetes mellitus； Insulin； C peptide； Chemiluminescence； Value analysis糖尿病是一種由于胰島素分泌缺陷或生物功能受損引起的表現(xiàn)為高血糖的代謝性疾病，血糖長(zhǎng)期處于高水平會(huì)導(dǎo)致各組織器官，特別是腎、心臟、血管、神經(jīng)系統(tǒng)的功能性損傷。糖尿病的臨床突出表現(xiàn)為“三多一少”，即多飲多尿多食、消瘦，多見(jiàn)于1型糖尿病，而2型糖尿病則表現(xiàn)為肥胖，乏力，不及時(shí)治療才會(huì)發(fā)生體重下降等特征。糖尿病分為兩種類型，1型和2型，前者患者多小于30歲，發(fā)病突然，血糖水平高，并伴有上述的“三多一少”癥狀，口服降糖藥無(wú)效，需用胰島素治療；后者多見(jiàn)于中老年人，肥胖患者發(fā)病率較高，常伴有高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病，發(fā)病不明顯，早期血清胰島素水平早期不定，晚期較低，且C肽水平也明顯降低，該研究即通過(guò)檢測(cè)2型糖尿病患者胰島素與血清C肽水平來(lái)進(jìn)行分析患者病情。糖尿病中C肽的水平直接反應(yīng)了糖尿病患者胰島中β細(xì)胞的功能以及糖尿病的分型，1型和2型的糖尿病患者初期時(shí)C肽水平和胰島素水平都能判斷β細(xì)胞的功能，但由于外周血液中C肽細(xì)胞攝取更少，對(duì)于β細(xì)胞分泌初始的濃度更為相似，而且其清除率較穩(wěn)定，沒(méi)有其他明顯因素影響，所以C肽的釋放曲線更優(yōu)于胰島素釋放曲線，對(duì)于胰島β細(xì)胞的功能反應(yīng)更具有代表性，此外，外源性胰島素的使用與C肽無(wú)交叉，即使胰島素抗體也不會(huì)干擾C肽水平，所以C肽對(duì)于其判定胰島B細(xì)胞的功能情況，指導(dǎo)糖尿病的治療更加有效，所以該研究選取了2013年3月―2015年3月就診的2型糖尿病患者150例，采用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)2型糖尿病患者胰島素與血清C肽水平，現(xiàn)報(bào)道如下。1 資料與方法1.1 一般資料該次選擇在該院就診的2型糖尿病患者150例，排除有其他并發(fā)癥的患者，所有患者都了解治療方案并簽訂知情書(shū)，在治療前所有患者中男性78例，女性72例，年齡為25～79歲，平均年齡（51.6±3.5）歲，病程為1～3年，平均病程為（1.6±0.2）年，通過(guò)飲食結(jié)構(gòu)、合理運(yùn)動(dòng)、藥物治療等方式，其糖尿病都得到有效控制。另設(shè)150例健康患者作為對(duì)照組，都經(jīng)電解質(zhì)、血脂、血壓、血糖、心肌酶、肝腎功能等檢查無(wú)異常，且家族無(wú)糖尿病病史。兩組在年齡、性別、病情等方面均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P>0.05）。1.2 治療方法采用東曹株式會(huì)社生產(chǎn)的“AIA-2000”型分析測(cè)試儀對(duì)所有患者進(jìn)行血清中胰島素和C肽的含量測(cè)定，患者于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下取坐位，靜脈抽取手肘部位血液5 mL，化學(xué)發(fā)光法檢驗(yàn)兩種物質(zhì)的水平，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作規(guī)程進(jìn)行。1.3 統(tǒng)計(jì)方法統(tǒng)計(jì)學(xué)的處理使用SPASS17.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

觀察組和對(duì)照組胰島素、C肽水平（x±s）3 討論化學(xué)發(fā)光法的引入改變了我國(guó)傳統(tǒng)非同位素檢測(cè)方法的現(xiàn)狀?；瘜W(xué)發(fā)光就是通過(guò)化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中分子吸收化學(xué)能產(chǎn)生光的輻射，化學(xué)發(fā)光法即利用了這一點(diǎn)能定量測(cè)定發(fā)光反應(yīng)中的反應(yīng)物、催化劑、激動(dòng)劑、抑制劑，以及偶合反應(yīng)中的反應(yīng)物、催化劑、激動(dòng)劑。與傳統(tǒng)放射免疫方法相比，化學(xué)發(fā)光法無(wú)污染，標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制無(wú)需多次，且測(cè)定時(shí)間更短，重復(fù)性好，對(duì)于病人來(lái)說(shuō)，無(wú)需受到較大傷害，所以具有良好的患者依從性，此外，此方法的靈敏度和特異性均較高，在臨床上診斷治療糖尿病具有不可估量的價(jià)值。胰島素和C肽在人體內(nèi)都是通過(guò)胰島素原分裂而來(lái)的，每分子胰島素原能夠在β細(xì)胞的作用下分裂成一分子的胰島素和一分子的C肽。C肽水平區(qū)別于1型和2型糖尿病，2型糖尿病，可輔助判斷藥物治療種類。而胰島素在循環(huán)過(guò)程中經(jīng)肝時(shí)部分被吸收，且容易受外源性胰島素的影響，而C肽則全部入血，受影響效果不明顯，所以有專家認(rèn)為C肽能更好的反映出內(nèi)源性胰島素分泌作用，為判斷患者胰島細(xì)胞功能提供參考依據(jù)。該研究結(jié)果顯示2型糖尿病患者的胰島素和C肽水平都明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P

篇7

【摘要】化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光輻射強(qiáng)度確定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法，這種技術(shù)日益得到重視，它靈敏度高，線性范圍寬，不需要外來(lái)光源，儀器設(shè)備簡(jiǎn)單，操作方便，分析快速快，易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，價(jià)格便宜，選擇性強(qiáng)。常用的化學(xué)發(fā)光技術(shù)有電化學(xué)發(fā)光、化學(xué)發(fā)光免疫分析、微粒子化學(xué)發(fā)光等。本文主要探析此技術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】化學(xué)發(fā)光 分類 臨床應(yīng)用

化學(xué)發(fā)光(chemiluminescence，CL)早在19世紀(jì)80年代就得到證實(shí)，即在化學(xué)反應(yīng)過(guò)程中瞬間以釋放光子的形式放出能量?；瘜W(xué)發(fā)光法因其靈敏度高、線性范圍寬和分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，已在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到廣泛地應(yīng)用。

一 化學(xué)發(fā)光的基本內(nèi)涵

化學(xué)發(fā)光分析法是近30年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種高靈敏的微量及痕量分析法，化學(xué)發(fā)光分析具有靈敏度高、線性范圍寬、不需要外來(lái)光源、分析速度快、儀器設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單、便宜等優(yōu)點(diǎn)。化學(xué)發(fā)光分析測(cè)定物質(zhì)的方式可分為直接法和間接法?；瘜W(xué)發(fā)光分析反應(yīng)類型可分為酶促反應(yīng)和非酶促反應(yīng)兩類。此外化學(xué)發(fā)光分析法可以與其他分析技術(shù)聯(lián)用，如流動(dòng)注射分析、電化學(xué)分析、免疫分析、固定化試劑技術(shù)、傳感器技術(shù)等分析技術(shù)相結(jié)合。

二 常用的化學(xué)發(fā)光技術(shù)

首先，電化學(xué)發(fā)光。該技術(shù)是通過(guò)對(duì)電極施加一定的電壓進(jìn)行電化學(xué)反應(yīng)而發(fā)光，通過(guò)測(cè)量化學(xué)發(fā)光光譜和強(qiáng)度來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它將電分析化學(xué)手段和化學(xué)發(fā)光方法相結(jié)合，具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，如重現(xiàn)性和靈敏度進(jìn)一步提高，在多種組份同時(shí)存在時(shí)，可施加不同波形、不同電壓的信號(hào)進(jìn)行選擇性測(cè)量等，是潛在的分析手段之一。

第二， 化學(xué)發(fā)光免疫分析是以標(biāo)記發(fā)光劑為示蹤物信號(hào)建立起來(lái)的一種非放射標(biāo)記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、分析速度快和容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過(guò)氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學(xué)發(fā)光免疫分析中使用最多的標(biāo)記物。

第三，微粒子化學(xué)發(fā)光是化學(xué)發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學(xué)發(fā)光劑為底物的酶免疫技術(shù)，同時(shí)應(yīng)用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體最大限度的結(jié)合。微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù)所需標(biāo)本量極少，孵育時(shí)間大大縮減，同時(shí)因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，并減少污染。

第四，化學(xué)發(fā)光生物傳感器是通過(guò)非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)地檢測(cè)生物體內(nèi)的某一種或幾種物質(zhì)濃度的技術(shù)。特別是化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識(shí)別作用的抗原或抗體以適當(dāng)?shù)姆绞焦潭ɑ瞥?，它結(jié)合了化學(xué)發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結(jié)合的高度專一性以及無(wú)污染等特點(diǎn)，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。

三 化學(xué)發(fā)光分析在臨床實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用

第一，化學(xué)發(fā)光法與血液系統(tǒng)疾病，化學(xué)發(fā)光免疫分析在測(cè)定G一CSF上是敏感的，可用于測(cè)定正常人或疑有G一CSF減少疾病的患者血清G一CSF，對(duì)于預(yù)測(cè)免疫抑制劑治療再障的效果有一定的作用。例如，慢性骨髓增生性疾病，如慢性髓性白血病和真性紅細(xì)胞增多癥(Pv)是與中性白細(xì)胞功能失常有關(guān)的。Pv的PMN在用趨化膚(fMLP)刺激后化學(xué)發(fā)光值及丁量減少.這與磷醋酶D活性受損有關(guān)。而沒(méi)有或用PMA刺激的化學(xué)發(fā)光值及了量是正常的。慢性髓性白血病患者也可觀察到這個(gè)現(xiàn)象，但程度更小。

第二，化學(xué)發(fā)光法與消化系統(tǒng)疾病。幽門螺桿菌(HP)在慢性胃炎和消化性潰瘍的發(fā)病中起著重要作用。病理組織學(xué)研究顯示已感染HP的胃粘膜具有吸引中性白細(xì)胞積聚的特點(diǎn)。在魯米諾增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)土表現(xiàn)為增強(qiáng)；潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)腸粘膜面雖然有中性白細(xì)胞浸潤(rùn).但有人發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎患者和正常人相比，在發(fā)光的峰值、峰時(shí)、斜率方面無(wú)明顯差異。僅27%具有活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎患者刺激物有增高的化學(xué)發(fā)光?？赡艿脑蚴窃谶@些患者中性白細(xì)泡不起主要作用或者不呈高活動(dòng)性。慢性肝病(特別是肝癌時(shí))0:的產(chǎn)生和HZOZ一MPO一CL一系統(tǒng)是抑制的。依賴Cypridina蟲(chóng)熒光素類的化學(xué)發(fā)光及依賴魯米諾的化學(xué)發(fā)光均是降低的。但是慢性肝炎由于體內(nèi)免疫復(fù)合物含量的增高而誘導(dǎo)發(fā)光增強(qiáng)，與正常組相比基礎(chǔ)化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)。急性肝炎由于體內(nèi)免疫復(fù)合物增加不明顯，吞噬細(xì)胞應(yīng)答能力及血清調(diào)理活性均未明顯受損。因此，急性肝炎的基礎(chǔ)發(fā)光、峰時(shí)、斜率與正常人相比變化不明顯，但單位PMN峰值低于正常，說(shuō)明急性肝炎中性粒細(xì)胞的吞噬功能也降低；

第三，化學(xué)發(fā)光法可以準(zhǔn)確檢測(cè)心血管疾病。例如，急性心肌梗時(shí)，中性粒細(xì)胞的化學(xué)發(fā)光值逐漸升高且與CK山條高度相關(guān)。因此，可通過(guò)患者PMN一CL的變化估計(jì)病情。冠心病心絞痛時(shí)化學(xué)發(fā)光值是升高的。

第四，化學(xué)發(fā)光法與內(nèi)分泌疾病。首先，甲狀腺疾病。甲狀腺激素是臨床許多疾病(尤其是甲狀腺疾病)診斷常用的指標(biāo)。甲狀腺激素(TH)具有抗氧化作用，這種作用可能是由于中性白細(xì)胞特異的受體一配體相互作用引起的。TH的抗氧化作用可通過(guò)魯米諾增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光法測(cè)定，化學(xué)發(fā)光值表現(xiàn)為抑制。第二，糖尿病。患者由于可溶性或顆粒性因素激活多形核白細(xì)胞(PMN)膜上的NADPH氧化酶產(chǎn)生超氧陰離子自由基，然后轉(zhuǎn)變?yōu)檫^(guò)氧化氫和輕自由基。糖尿病患者分離的PMN的基礎(chǔ)化學(xué)發(fā)光值與正常人相比明顯升高。但當(dāng)NADPH氧化酶被抑制或磷酸己糖旁路被阻斷，則糖尿病組及正常組的化學(xué)發(fā)光值均受到不同程度的抑制。NO可用多種方法測(cè)定，但化學(xué)發(fā)光法是其中最為理想的一種。NO本身不產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，當(dāng)它與超氧陰離子反應(yīng)時(shí)可產(chǎn)生很強(qiáng)的光，外源的精氨酸加入反應(yīng)系統(tǒng)中，化學(xué)發(fā)光值會(huì)更顯著地提高。糖尿病患者的化學(xué)發(fā)光值還可體現(xiàn)循環(huán)免疫復(fù)合物的水平。具有高循環(huán)免疫復(fù)合物的患者，化學(xué)發(fā)光值也高。

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篇8

人絨毛膜促性腺激素（HCG）作為一種生殖內(nèi)分泌激素，其對(duì)于妊娠或急腹癥的輔助診斷及隨訪都有重要作用。檢測(cè)血清或尿液中的人絨毛膜促性腺激素β亞單位（β-HCG）已成為正常早孕、異位妊娠、滋養(yǎng)細(xì)胞腫瘤、肝癌等疾病診斷與鑒別診斷的重要方法。目前檢測(cè)β-HCG的方法很多，化學(xué)發(fā)光法是較新而優(yōu)秀的實(shí)驗(yàn)室免疫學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)，其以極高的特異性、精確度、穩(wěn)定性和良好的隨機(jī)操作性成為免疫實(shí)驗(yàn)室的主要檢驗(yàn)手段，但其成本高，成為推廣應(yīng)用的障礙。而且高濃度的β-HCG 經(jīng)常會(huì)超出儀器定標(biāo)曲線的線性范圍而無(wú)法得到測(cè)定值，須稀釋標(biāo)本重新測(cè)定，這樣就會(huì)造成檢測(cè)時(shí)間的延誤及試劑的浪費(fèi)[1]。在實(shí)踐中先用膠體金早早孕檢測(cè)試紙進(jìn)行初篩，以便盡可能一次定量檢測(cè)成功并向臨床及時(shí)報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。

1.材料與方法

1.1 1737例標(biāo)本為本院2016年3月至2016年10月的婦科門診及住院的患者血清。年齡17-58歲

1.2 方法

采用ADVIA Centaur XP全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀，及原廠化學(xué)發(fā)光試劑。嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行檢測(cè)。定性測(cè)定為艾博生物早早孕快速診斷試紙條（膠體金大）嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。對(duì)每例定量測(cè)定血清HCG的標(biāo)本，均先用早早孕試紙條進(jìn)行定性測(cè)定。

1.3 結(jié)果判定

HCG試紙條插入血清后，根據(jù)以下結(jié)果進(jìn)行判定。檢測(cè)帶T帶，質(zhì)控帶C帶。

1.3.1 T帶不出現(xiàn)，C帶出現(xiàn)。血清HCG定性試驗(yàn)（-），說(shuō)明HCG含量為零或極低，直接測(cè)定。

1.3.2 T帶出現(xiàn)且顏色很淺。說(shuō)明HCG 含量較低，定義為（+），直接測(cè)定。

1.3.3 T帶出現(xiàn)，顏色略淺于C帶或與C帶深淺相當(dāng)。說(shuō)明HCG含量較高，定義為（2+），選擇稀釋50倍后測(cè)定。

1.3.4 T帶出現(xiàn)，顏色比C帶稍深。說(shuō)明此類標(biāo)本血HCG含量高，定義為（3+），選擇稀100倍后測(cè)定。

1.3.5 T帶出現(xiàn)，顏色明顯比C帶深。說(shuō)明此類標(biāo)本血HCG含量極高，定義為（4+），應(yīng)選擇稀釋200倍后定量測(cè)定（儀器最高稀釋倍數(shù)為200倍）

2.結(jié)果

試紙條陽(yáng)性（+）300例，陰性（-）340例，化學(xué)發(fā)光法一次完成626例（小于1000）。試紙條陽(yáng)性（2+）412例，化學(xué)發(fā)光一次完成389例（大于1000或小于10000）。試紙條陽(yáng)性（3+）389例，化學(xué)發(fā)光法一次完成370例（大于10000或小于100000）。試紙條陽(yáng)性（4+）266例，化學(xué)發(fā)光一次完成檢出259例（大于100000）。另有30例HCG大于200000需手工2倍稀釋后再儀器200倍稀釋完成（定義為非一次性完成）。

3.討論

血清β-HCG測(cè)定臨床上常采用化學(xué)發(fā)光免疫法，該方法具有快速、簡(jiǎn)單和結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn)，但該方法的試劑成本高，線性范圍均小于1000 ，而患者的實(shí)際測(cè)定值往往大于1000。在工作中往往直接分離血清上儀器測(cè)定，當(dāng)測(cè)定結(jié)果大于儀器的線性范圍時(shí)，儀器檢測(cè)不能得到具體的檢測(cè)值，此時(shí)還需在化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上選擇適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)后重新測(cè)定。如果事先未做定性檢測(cè)，很難選擇適當(dāng)稀釋倍數(shù)，有的實(shí)驗(yàn)室盲目地選擇稀釋倍數(shù)。假如選擇稀釋倍數(shù)過(guò)小，必然要試著增加稀釋倍數(shù)后重新測(cè)定，有時(shí)還需要稀釋很多次才能檢測(cè)出具體結(jié)果；如果選擇稀釋倍數(shù)過(guò)大則造成了過(guò)度稀釋，過(guò)度稀釋后的標(biāo)本中β-HCG含量極少而測(cè)不出，或者不在儀器的線性范圍內(nèi)會(huì)造成很大的誤差，這樣就會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性造成比較大的影響，這是在工作中需要盡量避免的問(wèn)題。盲目上機(jī)檢測(cè)不僅增加了重復(fù)檢驗(yàn)的成本，耽誤患者的及時(shí)治療[2-3]。

本文通過(guò)用膠體金早早孕試紙條來(lái)篩選待檢血清標(biāo)本，在對(duì)1737例標(biāo)本中篩選出定性為（2+）及以上的高值標(biāo)本，用化學(xué)發(fā)光免疫分析儀直接選擇適當(dāng)稀釋倍數(shù)檢測(cè)一次性成功率達(dá)92.7%，通過(guò)早早孕試紙條簡(jiǎn)單快捷的篩查作用，最大程度地避免重復(fù)稀釋檢測(cè)造成的時(shí)間延誤和試劑浪費(fèi)，提高了工作效率。同時(shí)也可以通過(guò)金標(biāo)紙條的結(jié)果同儀器測(cè)定結(jié)果對(duì)比，可以避免一些隨機(jī)誤差的產(chǎn)生。

參考文獻(xiàn)

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篇9

關(guān)鍵詞 ：DNA生物傳感器；切刻內(nèi)切酶；量子點(diǎn)；電致化學(xué)發(fā)光；信號(hào)放大

1 引 言

近年來(lái)，隨著生命科學(xué)的不斷發(fā)展，低濃度特定DNA序列的超靈敏檢測(cè)在臨床診斷、基因突變檢測(cè)等生物學(xué)研究中顯示出越來(lái)越重要的作用和意義[1～4]。與熒光法[5]、石英晶體微天平法[6]、比色法[7]等眾多的DNA檢測(cè)方法相比，電化學(xué)發(fā)光法因其方法簡(jiǎn)單、響應(yīng)速度快、靈敏度高和選擇性好而得到了廣泛應(yīng)用[8～10]。

目標(biāo)放大和信號(hào)放大是提高DNA檢測(cè)靈敏度的兩種常用方法。傳統(tǒng)的目標(biāo)放大方法如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）[11]、依賴核酸序列的擴(kuò)增技術(shù)（NASBA）[12]等因高的放大效率、靈敏的檢測(cè)效果而被廣泛應(yīng)用[13]。然而這些方法一般都需要特殊的設(shè)備或昂貴的檢測(cè)儀器，存在耗時(shí)、易污染、成本高、操作不便等缺點(diǎn)[14]。相比之下，通過(guò)目標(biāo)物提高檢測(cè)靈敏度的信號(hào)放大技術(shù)，快速、簡(jiǎn)便，已成為超靈敏檢測(cè)DNA的研究熱點(diǎn)之一[15～18]。切刻內(nèi)切酶信號(hào)放大是近年來(lái)逐漸采用的低濃度核酸的檢測(cè)方法[19]。探針DNA與目標(biāo)DNA結(jié)合成雙鏈時(shí)，形成切刻內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)，內(nèi)切酶對(duì)探針DNA進(jìn)行剪切，使得目標(biāo)DNA被釋放出來(lái)，并進(jìn)行循環(huán)利用，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)信號(hào)的放大[20～24]。

電化學(xué)發(fā)光法不僅具有化學(xué)發(fā)光分析的靈敏度高、線性范圍寬和儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，而且電化學(xué)分析控制性強(qiáng)，選擇性好[25]。量子點(diǎn)作為一種新興的納米材料，因其獨(dú)特的光學(xué)性質(zhì)，如高穩(wěn)定性、不易分解、熒光壽命長(zhǎng)等[26]，已被作為生物傳感器的標(biāo)記物和信號(hào)探針[27]。近年來(lái)，利用量子點(diǎn)高效及穩(wěn)定的電化學(xué)發(fā)光性能研制的電化學(xué)發(fā)光生物傳感器備受關(guān)注[28～31]。然而，將量子點(diǎn)優(yōu)異的電化學(xué)發(fā)光性能與切刻內(nèi)切酶的特異性相結(jié)合，進(jìn)行目標(biāo)物測(cè)定的研究至今未見(jiàn)報(bào)道。

本研究基于切刻內(nèi)切酶的信號(hào)放大和量子點(diǎn)高效的電化學(xué)發(fā)光性能，建立了超靈敏檢測(cè)DNA的方法。通過(guò)自組裝方式將捕獲DNA（cDNA）固定在電極表面，靶DAN分子（tDNA）與其特異性雜交形成雙鏈，利用切刻內(nèi)切酶對(duì)形成的雙鏈中的cDNA進(jìn)行識(shí)別和切割，釋放出tDNA序列，參與下一輪的雜交和酶切。本傳感器制作簡(jiǎn)單，靈敏度高，選擇性好，具有良好的應(yīng)用前景。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

MPIE 型電致化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)（西安瑞邁分析儀器有限公司），采用三電極系統(tǒng)：工作電極為金電極（直徑2 mm），參比電極為Ag/AgCl（飽和KCl）電極，對(duì)電極為鉑絲電極。PGSTAT128N Autolab 電化學(xué)工作站（瑞士萬(wàn)通有限公司）；UV2400PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本島津公司）；F7000 熒光儀（日本日立公司）。

氯化鎘（CdCl2?2.5H2O）、碲粉（Te）、硼氫化鈉（NaBH4）、巰基乙酸（TGA）、巰基乙醇（MCH）、N羥基琥珀酰亞胺（NHS）、1乙基33二甲基氨丙基碳化二亞胺（EDC）購(gòu)于上海Aladdin公司；切刻內(nèi)切酶Nt.BstNBI（New England Biolabs有限公司）；其它試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。DNA序列均購(gòu)自于上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司，使用時(shí)用TE緩沖液（10 mmol/L TrisHCl， 1 mmol/L EDTA， 100 mmol/L NaCl， pH 8.0）進(jìn)行配制和稀釋，堿基序列如表1所示。

2.2 水溶性量子點(diǎn)的制備

CdTe水溶性量子點(diǎn)合成方式參考文獻(xiàn)[32]的方法并稍做改進(jìn)。將250 mL 0.0025 mol/L CdCl2溶液倒入三口燒瓶中，磁力攪拌，通氮?dú)獬?5 min，接著加入100 μL TGA，并用NaOH調(diào)節(jié)至pH≈10，繼續(xù)通氮?dú)?0 min，封口。

量取3 mL二次蒸餾水倒入另一個(gè)50 mL 三口燒瓶中，同樣通氮?dú)獬?。稱取0.36 g NaBH4和0.144 g Te粉加入水中，在65℃水浴和磁力攪拌下反應(yīng)，直到黑色Te粉完全消失，得到紫色透明的NaHTe溶液。將得到的溶液倒入上述含有CdCl2溶液的三口燒瓶中，95℃水浴中攪拌回流2 h，得顏色透明的CdTe水溶性量子點(diǎn)。

2.3 電化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器的制備

將金電極用0.05 μm Al2O3拋光至鏡面，分別置于50% （V/V） HNO3、無(wú)水乙醇、水中超聲清洗后，浸入含有1 μmol/L cDNA溶液中過(guò)夜，cDNA通過(guò)SAu鍵自組裝在電極表面。將修飾電極浸入到巰基乙醇溶液中，避光孵育1 h，封閉其非特異性結(jié)合位點(diǎn)，分別用0.1 mol/L PBS緩沖液和0.5 mol/L NaCl溶液清洗，制得電化學(xué)發(fā)光DNA生物傳感器。

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篇10

【關(guān)鍵詞】 化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法； 梅毒螺旋體特異性抗體； 檢測(cè)

梅毒是一種經(jīng)典的性傳播疾病，近年來(lái)發(fā)病率有升高趨勢(shì)。由于其具有傳染性且危害性大，因此對(duì)梅毒的早期診斷非常重要[1]。目前最常用的是有三種[2]。近年來(lái)化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法是興起的一種新型檢測(cè)方法，我院研究了其檢測(cè)效果，現(xiàn)將研究報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1對(duì)象

選擇本院2011年5月～2012年5月同時(shí)使用TPPA法與CMIA法檢測(cè)梅毒抗體的門診或住院部病人260例，其中男128例，女132例；年齡為0～82歲，平均年齡（45±19）歲。

1.2主要儀器和試劑

日本富士瑞必歐株氏會(huì)社提供的TPPA試驗(yàn)試劑盒；美國(guó)雅培I2000及配套SyphilisTP CMIA診斷試劑。

1.3方法

患者空腹8h以上，常規(guī)皮膚消毒，取靜脈血3ml，37℃溫育30min，4000r/min離心10min，嚴(yán)格按照TPPA、美國(guó)雅培I2000及Syphilis試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)梅毒和判斷結(jié)果。CMIA結(jié)果>1. 00S/CO為陽(yáng)性。

S/CO=標(biāo)本化學(xué)發(fā)光反應(yīng)物的相對(duì)光單位（RLU）/cut off RLU。CMIA 從測(cè)試到結(jié)果判讀均為儀器全自動(dòng)完成，儀器內(nèi)置的判斷標(biāo)準(zhǔn)抗-TP的S/CO≥1. 0，提示有反應(yīng)性。TPPA按試劑說(shuō)明書(shū)肉眼判讀結(jié)果，反應(yīng)孔4 中細(xì)胞沉積在孔中央呈光滑紐扣狀為陰性，反應(yīng)孔4出現(xiàn)凝集呈不規(guī)則沉積為陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS13.0進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，兩種方法率的比較采用χ2 檢驗(yàn)。用以TPPA法為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照試驗(yàn)，評(píng)價(jià)CMIA法計(jì)算陽(yáng)性率、敏感性、特異性、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值及兩方法的符合率。

2結(jié)果

2.1采用CMIA法與TPPA法檢測(cè)260例病人的梅毒陽(yáng)性檢出率

在260例病人中，CMIA法檢測(cè)出42例陽(yáng)性，檢出率為16.2%，而TPPA法檢測(cè)出38例陽(yáng)性，陽(yáng)性率檢出率為14.6%，兩種方法的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1。

表1CMIA法與TPPA法梅毒檢測(cè)結(jié)果方法例數(shù)陽(yáng)性陰性陽(yáng)性率CMIA2604221816.2%TPPA2603822214.6%

2.2以TPPA為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照方法

檢測(cè)CMIA法的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及陰性預(yù)測(cè)值：CMIA（ a/a+c）法敏感性100%，特異性（d/b+d）98.2%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值（a/a+b）90.5%，陰性預(yù)測(cè)值（d/c+d）100%。見(jiàn)表2。

表2CMIA法的幾項(xiàng)預(yù)測(cè)值TPPA法+-CMIA法+38（a）4（b）-0（c）218（d）

2.3以TPPA為對(duì)比方法，評(píng)價(jià)CMIA法

CMIA法與TPPA法對(duì)梅毒檢測(cè)的符合率為98.7%（a+d/a+b+c+d）。

3討論

梅毒是由感染梅毒螺旋體所引起的一種慢性全身性性傳播疾病。早期主要是皮膚黏膜受累，晚期可累及重要器官。梅毒的主要傳染源是人，大部分通過(guò)性接觸傳播，也可通過(guò)胎盤垂直傳播，極少數(shù)人可經(jīng)輸血感染。人感染梅毒螺旋體后，可產(chǎn)生多種抗體，主要有特異性抗螺旋體抗體和非特異性抗體。有相關(guān)研究表明，近年來(lái)我國(guó)梅毒的感染率呈上升趨勢(shì)，且很容易漏診和誤診，因此對(duì)梅毒早期進(jìn)行有效的診斷具有重要意義[3]。當(dāng)人體感染梅毒螺旋體后，大約經(jīng)過(guò)3周的潛伏期，在感染部位發(fā)生硬下疳，之后5～15 d在血清中可檢出梅毒特異性抗體。

目前有研究報(bào)道臨床上常用于檢測(cè)梅毒特異性抗體的方法有：梅毒密螺旋體血凝試驗(yàn)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、梅毒螺旋體抗體吸收試驗(yàn)、膠體金法、梅毒抗體蛋白印記法等[4]。各種方法各有優(yōu)劣，有過(guò)許多相關(guān)研究來(lái)探討不同檢測(cè)方法的優(yōu)良[5，6]。近年來(lái)許多研究已將其所介紹的梅毒診斷方法列為“金標(biāo)準(zhǔn)”，但其結(jié)果仍存在質(zhì)疑，且許多方法不易保存，無(wú)法進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證性措施及批量篩選?；瘜W(xué)發(fā)光免疫分析法順應(yīng)醫(yī)學(xué)的發(fā)展，在大批量篩選試驗(yàn)中脫穎而出，已經(jīng)應(yīng)用于臨床的許多疾病的檢測(cè)中，其中包括梅毒等疾病[7]。同時(shí)也有學(xué)者研究了化學(xué)發(fā)光免疫分析法對(duì)梅毒螺旋體特異性抗體檢測(cè)的應(yīng)用評(píng)價(jià)，認(rèn)為化學(xué)發(fā)光免疫分析法敏感性優(yōu)于臨床常用的TPPA，且具有結(jié)果客觀、易分析、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，但也存在個(gè)別假陽(yáng)性和鉤狀效應(yīng)，因此應(yīng)結(jié)合TPPA及臨床資料來(lái)確診[8]。

化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法用于梅毒螺旋體特異性抗體也在逐步走近臨床上，已有相關(guān)研究報(bào)道了其應(yīng)用評(píng)價(jià)[8]，我院也進(jìn)行了化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法用于梅毒螺旋體特異性抗體的探討研究，評(píng)價(jià)其臨床可實(shí)用性，結(jié)果在260例病人中，CMIA法檢測(cè)出42例陽(yáng)性，檢出率為16.2%，而TPPA法檢測(cè)出38例陽(yáng)性，陽(yáng)性率檢出率為14.6%，兩種方法的陽(yáng)性檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），TPPA為標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照方法，檢測(cè)CMIA法敏感性100%，特異性98.2%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值90.5%，陰性預(yù)測(cè)值100%，CMIA法與TPPA法檢測(cè)梅毒螺旋體抗體的符合率為98.7%。

綜上所述，化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法與梅毒螺旋體膠凝試驗(yàn)的檢出率相當(dāng)，特異性也較高，可以結(jié)合TPPA及臨床資料用于梅毒的確診，在臨床長(zhǎng)期推廣應(yīng)用。

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