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摘要：目的研究大黃中5種羥基蒽醌對金黃色葡萄球菌的抑菌作用。方法采用pH梯度萃取法從大黃中提取出蒽醌成分，采用體外實(shí)驗(yàn)及二分法測定各成分的抑菌效果。結(jié)果大黃中大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸有抑菌作用，大黃酚與大黃素甲醚無抑菌作用。抑菌效果大黃素最好，蘆薈大黃素次之，大黃酸最差。結(jié)論大黃具有抑菌作用。

關(guān)鍵詞：大黃；金黃色葡萄球菌；二分法

現(xiàn)代藥理研究證明，大黃具有抗菌、抗腫瘤、降低血壓、健胃、利膽、保肝、強(qiáng)心、延緩衰老、調(diào)節(jié)免疫功能等作用。大黃中含有的最主要的5種羥基蒽醌是：大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚、大黃素甲醚。本實(shí)驗(yàn)主要通過對這5種羥基蒽醌的提取、分離及對金黃色葡萄球菌的抑菌效果進(jìn)行比較，旨在為大黃在抗菌方面的應(yīng)用提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

大黃購于沈陽中街新藥特藥，金黃色葡萄球菌Staphy-lococcusaureus209P購于遼寧省藥品檢驗(yàn)所。

2方法與結(jié)果

2.1大黃總蒽醌的提取[1]

稱取25g的大黃粗粉，置于圓底燒瓶中，先加入50mL的20%硫酸，再加入125mL的氯仿，75℃回流4h。

2.2游離蒽醌的分離[2]

本實(shí)驗(yàn)采用pH梯度萃取法進(jìn)行分離。氯仿總提取液50mL，加pH8的緩沖液17mL，振搖，靜置，緩沖液層加鹽酸酸化至pH3，靜置，沉淀，抽濾得大黃酸，用冰醋酸重結(jié)晶得大黃酸精品。剩余氯仿層加pH9.9的緩沖液30.5mL，振搖，靜置，緩沖液層加鹽酸酸化至pH3，靜置，沉淀，抽濾得大黃素，用冰醋酸重結(jié)晶得大黃素精品。剩余氯仿層加pH13的緩沖液60mL，振搖，靜置，緩沖液層加鹽酸酸化至pH3，靜置，沉淀，抽濾得蘆薈大黃素，用冰醋酸重結(jié)晶得蘆薈大黃素精品。剩余氯仿層回收氯仿，得大黃酚與大黃素甲醚混合物。

2.3提取物溶液的配制

將各提取物用其相應(yīng)的緩沖液配制成濃度6mg/mL的溶液。

2.4大黃中5種游離蒽醌抑菌作用的檢驗(yàn)

2.4.1培養(yǎng)基的制備

牛肉浸膏0.15%，酵母浸膏0.6%，蛋白胨0.6%，葡萄糖0.1%，瓊脂1.8%，pH6.9～7.1，常水配制。

2.4.2操作過程

制備50mL培養(yǎng)基，滅菌30min。在超凈工作臺上，先倒出30mL至培養(yǎng)皿中，再于50℃左右向另外20mL培養(yǎng)基中迅速加入0.6mL菌懸液，混勻，倒入同一個(gè)培養(yǎng)皿中。待培養(yǎng)基凝固后，分別點(diǎn)上5μL、濃度為6mg/mL的各提取物溶液。在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10h，然后進(jìn)行美藍(lán)染色。量取100mL95%乙醇，加濃鹽酸1滴，即為酸性乙醇。量取100mL95%乙醇，加氫氧化鈉2g，振搖，待溶解后即為堿性乙醇。取美藍(lán)溶液20mL倒入平板中，用三角耙涂勻，2min后傾去，倒入酸性乙醇20mL，2min后傾去，倒入堿性乙醇20mL，2min后傾去。細(xì)流自來水沖洗3min，傾去并吸干浮水，快速貼上濾紙1張，用三角耙趕走氣泡，10min后揭下濾紙，晾干。5種游離蒽醌抑菌圈直徑：大黃酸為5mm，大黃素為9mm，蘆薈大黃素為3mm，大黃酚與大黃素甲醚混合物為0mm。

2.4.3二分法測定各提取物對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度[3]

準(zhǔn)備16支試管，其中1支作為空白對照組，其余15支平均分成3組，分別代表3種不同的成分，每組分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ號，并用記號筆標(biāo)明。然后用相應(yīng)的緩沖液配制成不同濃度的提取物溶液，向試管中加入培養(yǎng)基(配方與2.4.1相同，但不加瓊脂)，將培養(yǎng)基與提取物溶液充分混合后，滅菌。最后在超凈工作臺上分別向3組試管中(除空白對照組)分別加入金黃色葡萄球菌菌懸液。具體加入量見表1～表3。培養(yǎng)24h酸的Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ號試管全部長菌，只有Ⅰ號試管沒有長菌；蘆薈大黃素的情況與大黃酸一樣，只有Ⅰ號試管沒有長菌。大黃素的抑菌作用最好，Ⅰ、Ⅱ管都沒有長菌，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ號試管全部長菌表1大黃酸不同濃度溶液的抑菌作用（略）表2大黃素不同濃度溶液的抑菌作用（略）表3蘆薈大黃素不同濃度溶液的抑菌作用（略）。

3討論

二分法具有簡便、準(zhǔn)確、省時(shí)等特點(diǎn)。將待測成分按其前一個(gè)的一半濃度稀釋，首先在數(shù)值計(jì)算上很方便，不用大量的計(jì)算；其次在配溶液時(shí)不容易弄亂出錯(cuò)，只進(jìn)行稀釋半倍即可；第三是在做出結(jié)果后，直接用肉眼就可以觀察結(jié)果，方便快捷，無須動(dòng)用其他儀器，節(jié)省時(shí)間。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大黃中大黃素、蘆薈大黃素、大黃酸有抑菌作用，大黃酚與大黃素甲醚無抑菌作用。抑菌效果大黃素最好，蘆薈大黃素次之，大黃酸最差。

參考文獻(xiàn)：

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[3]鄭鈞鏞.藥品微生物學(xué)及檢驗(yàn)技術(shù)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1989.149.