導語：如何才能寫好一篇微生物的培養(yǎng)步驟，這就需要搜集整理更多的資料和文獻，歡迎閱讀由公文云整理的十篇范文，供你借鑒。

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關鍵詞 土壤微生物 分解作用 涂布平板法

中圖分類號 G633.91 文獻標識碼 B

“土壤微生物的分解作用”是人教版高中生物必修內容中的探究實驗之一，旨在讓學生通過宏觀的實驗現(xiàn)象了解微觀的實驗原理，明白微生物在生態(tài)系統(tǒng)物質循環(huán)中的重要作用。然而由于實驗周期長，實驗現(xiàn)象較不明顯，開展該實驗的學校寥寥無幾。

1 教材分析與實驗條件選擇

在人教版“土壤微生物分解作用”的實驗中，教材提出了2個參考案例。第一個案例，使用落葉為實驗對象，設置滅菌土壤為對照組，對比得出土壤微生物具有分解作用;第二個案例：使用淀粉為實驗對象，通過斐林試劑和碘液的顯色反應，得出土壤微生物具有分解作用。對比發(fā)現(xiàn)，第二個案例實驗時間適中，實驗現(xiàn)象較為明顯;同時復習了斐林試劑的使用方法，較適合開展實驗教學。因此，筆者選用第二個案例（土壤微生物對淀粉的分解作用），對“土壤微生物的分解作用”進行實驗研究。

溫度、淀粉糊濃度和反應時間是影響土壤微生物分解作用的主要因素。筆者選取了15°C、20°C、25°C、30°C和室溫等5個溫度，2%、4%、6%和8%等4個淀粉糊濃度以及5 d、7 d和9 d等3個反應時間，探究它們對土壤微生物分解作用的影響。

特定土壤的pH是確定值，而pH的變化會影響土壤微生物的分解作用。在確定適宜的溫度、淀粉糊濃度和反應時間之后，以pH為變量，繼續(xù)探究pH對土壤微生物分解作用的影響。

為了使實驗結果更具科學性，需要設置對照組。筆者在教材的基礎上增加了滅菌土壤浸出液作為第二對照組，排除了土壤浸出液中其他非生物因素的干擾，增加了實驗的嚴謹性。

在教學研究中，有學者使用不同種類的土壤進行實驗，以確定哪種土壤微生物的分解能力最強。土壤微生物分解能力的強弱，主要受微生物種類和數(shù)量的影響。因此，為了揭示土壤微生物數(shù)量對分解作用的影響，筆者根據(jù)《微生物實驗》的相關內容，采用涂布平板法，對實驗的土壤微生物進行計數(shù)，初步確定土壤微生物的分解能力。

綜上所述，“土壤微生物的分解作用”實驗可劃分為三個小實驗，分別是：（1） 土壤微生物對淀粉分解作用實驗;（2） pH對土壤微生物分解作用的影響實驗;（3） 土壤微生物計數(shù)實驗。其中第一個小實驗為主實驗，第二、第三個小實驗為擴展實驗。

2 實驗設計

2.1 實驗器材

實驗器具：小燒杯、試管、三角瓶、玻璃棒、pH計、恒溫光照培養(yǎng)箱、牛皮紙、紗布。

材料和試劑：土壤、淀粉、斐林試劑、碘液、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂、NaCl、稀HCl、稀NaOH、無菌水。

2.2 實驗步驟

2.2.1 土壤微生物對淀粉的分解作用

（1） 土壤浸出液的制備：按照課本介紹的方法制備。

（2） 淀粉糊的制作：分別稱取10 g、20 g、30 g和40 g淀粉，溶于500 mL開水中，充分攪拌，制成糊狀，得到濃度分別為2%、4%、6%和8%的淀粉糊。

（3） 滅菌：將蒸餾水、部分土壤浸出液、各濃度淀粉糊、實驗所用的燒杯和試管等器皿放入滅菌鍋中滅菌。

（4） 加樣培養(yǎng)：按照課本介紹的方法，在無菌環(huán)境中操作加樣，并將實驗溶液分別放入15°C、20°C、25°C和30°C的培養(yǎng)箱及室溫中培養(yǎng)

（5） 顯色反應：按照課本介紹的方法取出實驗溶液進行顯色反應。

2.2.2 pH對土壤微生物分解作用的影響

（1） 土壤浸出液pH的測定和調節(jié)：使用北京哈納HI8424NEW型pH計測出土壤浸出液的原始pH值為8.12;使用稀HCl和稀NaOH溶液，將土壤浸出液的pH上下各調節(jié)1.5和3.0個pH單位，選擇5.12、6.62、8.12、9.62和11.12等5個pH作為實驗pH。

（2） 制作淀粉糊、滅菌、加樣、培養(yǎng)與顯色反應操作同2.2.1。

2.2.3 土壤微生物的計數(shù)（涂布平板法）

計數(shù)實驗包括配制細菌培養(yǎng)基、倒平板、制備土壤稀釋液、涂布和培養(yǎng)等五個步驟，具體操作同《微生物實驗》教材。

3 實驗結果

3.1 土壤微生物對淀粉的分解作用

實驗結果表明，土壤微生物對淀粉的分解作用與溫度、淀粉糊濃度和分解作用的時間有關。30°C下，土壤微生物的分解作用最強烈，室溫（25°C～30°C）下次之，25°C、20°C和15°C下的分解作用依次減弱。土壤微生物對4%淀粉糊的分解作用最強，其次是2%、6%和8%。隨著時間的推移，土壤微生物對淀粉的分解作用逐漸增強;培養(yǎng)的第5 d，已有顯色現(xiàn)象;第7 d顯色現(xiàn)象顯著;第9 d和第7 d的實驗現(xiàn)象相差無幾。從顯色劑的顯色效果看，加入斐林試劑的實驗現(xiàn)象更直觀明顯。淀粉被分解后，產(chǎn)生的葡萄糖與斐林試劑作用，生成很明顯的磚紅色沉淀;加入碘液后，實驗溶液依舊變藍，只是顏色較對照組淺。這說明，一方面斐林試劑的顯色效果較顯著;另一方面，短時間里淀粉不能被分解殆盡。

3.2 pH對土壤微生物分解作用的影響

pH為8.12的原始土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果最明顯，出現(xiàn)最多的磚紅色沉淀;弱酸（pH6.62）和弱堿（pH9.62）性的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果出現(xiàn)較多的磚紅色沉淀，但均少于原始pH的土壤浸出液;強堿性（pH11.12）的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果產(chǎn)生較少的磚紅色沉淀;強酸性（pH5.12）的土壤浸出液中，微生物對淀粉糊的分解作用結果產(chǎn)生最少的磚紅色沉淀。碘液的顯色反應結果并沒有明顯的差別，說明只有部分淀粉被分解。

3.3 土壤微生物的計數(shù)

涂布平板結果顯示，土壤浸出液中微生物的含量約為668 889個/mL;根據(jù)之前的實驗步驟得知，實驗土壤浸出液濃度為0.1 g/mL，因此土壤中微生物的含量約為6 688 890個/g（表1）。有教學條件的學?？稍O計該實驗，分析不同土壤微生物具有不同分解作用的原因，讓學生更深入地理解和掌握知識，培養(yǎng)學生的科學素養(yǎng)和探究精神。

4 討論

“土壤微生物的分解作用”實驗中，材料易得，操作簡單，可以在教學活動中順利實施。許多學校由于實驗時間較長，影響教學安排，而很少開展這一探究活動。但筆者發(fā)現(xiàn)，該實驗不但可以在短時間內完成，而且能開發(fā)出與之相關的教學實驗，如pH對土壤微生物分解作用的影響、土壤微生物計數(shù)等，這對學生創(chuàng)新思維的培養(yǎng)大有裨益。如果學校教學條件有限，無法順利開展該實驗，可由教師演示或者播放實驗錄像，以取得一定的教學效果。

在本實驗中，筆者并未以土壤類型為實驗變量，探究不同土壤中微生物分解作用和微生物數(shù)量的異同。但學校在安排教學活動時，可以將學生分組，不同小組以不同的土壤為研究對象開展實驗。這樣既節(jié)約了時間，又可以達到很好的實驗效果。

本研究確定的適宜實驗條件，可以為廣大師生提供參考。各學校也可以借鑒筆者的思路，開展類似實驗，并安排不同學生完成不同條件下的實驗，最后匯總結果，探討比較。這不僅能幫助學生培養(yǎng)團隊合作精神和創(chuàng)新實踐能力，也能激發(fā)學生對生物學實驗的熱情，進一步培養(yǎng)學生對生物學科的興趣。

參考文獻：

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關鍵詞:微生物檢驗;質量控制;培養(yǎng)基

引言

當前，隨著食品安全問題關注度的不斷提高，很多食品制造企業(yè)日益重視檢驗食品微生物，以此來對食品生產(chǎn)進行監(jiān)測，盡早檢測出食品所受微生物的污染狀況，這樣企業(yè)就可采取有效措施最大限度降低微生物的危害，盡可能地保障食品的安全性。在有關食品衛(wèi)生的微生物檢驗方法及檢驗步驟等方面，國家相關部門雖然已作了很詳細的說明，但在實際操作中還存在很多對檢驗結果帶來偏差的復雜因素，由于對這些因素的不夠重視，致使檢驗結果不夠準確，從而無法對食品的衛(wèi)生狀況進行正確評價，也就未能對產(chǎn)品生產(chǎn)進行有效監(jiān)督和指導?；诖?，對食品微生物檢驗中的質量控制問題，進行一些分析和探討。

1做好培養(yǎng)基的制備

1.1配制培養(yǎng)基

要嚴格依據(jù)處方來進行培養(yǎng)基配制，且應做好仔細記錄。在培養(yǎng)基處方中，其成分多數(shù)為生物制品，不同廠家所生產(chǎn)的產(chǎn)品質量會存在一些差異，故應做好配方中不同原理成分的質量控制。此外，所用到的各成分的所有特征應及時做好記錄，對于自制培養(yǎng)基各成分，應按順序分別進行添加，在分裝滅菌之前應確保各成分完全均勻。

1.2應用干粉培養(yǎng)基

當前已有一系列專業(yè)化干燥培養(yǎng)基用于微生物實驗行業(yè)中，這些干燥培養(yǎng)基不僅使用高效，而且使用便利，故被廣泛應用于微生物實驗行業(yè)中。通常那些專業(yè)培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家都有一套規(guī)范的生產(chǎn)工藝，可嚴格控制好原材料及產(chǎn)品，以此來確保產(chǎn)品質量穩(wěn)定。微生物檢驗所用的那些藥品、干燥培養(yǎng)基或試劑，一定要滿足以下條件:①專業(yè)廠家所生產(chǎn)的質量符合相關標準的產(chǎn)品。②具有生產(chǎn)商所提供的編號、名稱、批號及各組成成分。③具有生產(chǎn)商所提供的培養(yǎng)基使用前的pH值、有效期及儲存資料。這樣就可讓使用者及時記錄產(chǎn)品和比較產(chǎn)品。

2做好培養(yǎng)基的水化

2.1選擇好培養(yǎng)基水化的容器

為避免離子進入培養(yǎng)基，不得把鐵鍋或銅鍋等容器用于培養(yǎng)基的水化中，以此來確保微生物的正常生長。此外，為不改變培養(yǎng)基的pH值，在加熱過程中盡可能地避免新玻璃瓶釋放出堿性物質。為避免加熱溶解過程中溢出培養(yǎng)基，所用容器大小應不小于兩倍的復水后培養(yǎng)基總體積。

2.2選擇好培養(yǎng)基水化的用水

所用的水，一定不得含有可影響微生物生長的物質，最好是蒸餾水，特別不得用那些受到污染的去離子水，因為這些水即使通過過濾也還是含有一些抑制微生物生長的東西。由于自來水含有諸如氯等抗菌物質，故一般不用這類水。在水化培養(yǎng)基時，應按步驟不斷把適量的水加入，首先在容器中加入三分之一的水量并予以一定的震蕩，然后再把剩下的三分之二水量加滿，并把容器壁上的那些培養(yǎng)基粉順勢沖下。

2.3稱量培養(yǎng)基

為預防交叉污染而對實驗結果帶來影響，在稱量過程中一定要使用專用的角匙，并確保在這一過程中盡可能地不吸入諸如選擇性培養(yǎng)基等粉末，盡可能地避免在濕度高的房間稱取培養(yǎng)基，這樣可有效防止因培養(yǎng)基吸潮二酸化培養(yǎng)基等結果的產(chǎn)生。對于干粉培養(yǎng)基，一定要基于生產(chǎn)商所提供的相關說明來完成配制。

3做好培養(yǎng)基的物理學和生物學的質量控制

3.1關于培養(yǎng)基的物理學質控

商品化的干燥培養(yǎng)基，為能獲得長期保存培養(yǎng)基的光敏感性成分的活性劑干燥性，其包裝一定要充分密封，所制備的培養(yǎng)基平板一定要具備相應的顏色，例如，血平板通常就制作為血紅色。正常情況下，所制備的培養(yǎng)基一定是沒有沉淀、沒有渾濁。不管是在實施培養(yǎng)基的溶解、還是凝固，都必須做好其適宜溫度的檢測，例如，就傾注平板的培養(yǎng)基而言，為便于低溫傾注平板，其凝固溫度一般應低于40℃，這樣可最大限度避免樣品中的微生物受到熱損傷。

3.2關于培養(yǎng)基的生物學質控

在完成培養(yǎng)基滅菌之后，為檢驗和獲得所需滅菌的效果，一定要進行無菌實驗的操作，具體可選用培養(yǎng)基目標菌生長率和非目標菌的選擇因子進行測試。此外，對于菌落大小以及相應的生理生化特性也必須進行檢測。對于不同批次的產(chǎn)品，都要使用與其相對應的標準菌株進行檢定，而且對于每1次的實驗結果，都要加以詳細地記錄。

4結語

做好微生物實驗室檢測工作的重要前提就是要控制好培養(yǎng)基的質量，這直接關系到整個檢驗工作的可靠性及準確性，這個環(huán)節(jié)在整個微生物實驗室檢測工作中處于極為重要的地位。因此，在實際生產(chǎn)過程中，就食品微生物檢驗中培養(yǎng)基的質量控制這個問題進行深入分析和探討，這對于培養(yǎng)基質量控制水平的不斷提高并不斷為微生物實驗室檢測提供質量可靠的培養(yǎng)基，均具有極為重要的意義。

參考文獻:

［1］許陽．論食品微生物檢驗中培養(yǎng)基的質量控制［J］．疾病監(jiān)測與控制，2015(5)．

［2］杜偉．微生物檢測用培養(yǎng)基、試劑質量控制方法研究［J］．中國微生物雜志，2013(5)．

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臨床微生物學是檢驗醫(yī)學中重要亞專業(yè)之一,對感染性疾病進行診斷,密切結合臨床提出及時有效的治療方案。目前,快速診斷是微生物檢驗的發(fā)展方向大綱,雖然經(jīng)多年的研究和改進,檢驗的微量化和自動化已普及,自動鑒定檢測項目已基本涵蓋臨床常見病原菌的檢測需要,但仍不能滿足臨床要求;具體要在改進細菌檢驗的工作模式中解決,需重視原始標本的涂片、染色、藥敏等基礎檢查,因此,為適應醫(yī)院的發(fā)展,提高微生物實驗課學生的基礎技能很重要。

1 重視基礎技能實驗課

微生物學是一門臨床聯(lián)系密切、實踐性強的學科,微生物學基礎實驗為深入學習微生物學及相關學科奠定了基礎。實驗教學是教學活動中培養(yǎng)學生觀察、實驗操作、分析問題、實驗設計等能力的重要環(huán)節(jié),是提高學生實驗技能的重要學習過程[1]。實驗教師對于實驗教學的意義和重要性都有很深的體會,搞好實驗教學不是件容易的事,微生物學基礎實驗課的教學,目的是讓學生加強對課堂教學理論內容的理解與體會,掌握微生物學的基礎實驗操作技能,運用所學知識分析問題、解決問題,為今后從事微生物學的相關工作和科研打下良好的基礎。實驗教學除了能使學生獲得感性知識和驗證相關規(guī)律外,還能使學生的實驗技能得到提高,從而激發(fā)學生的興趣,沒有微生物學基礎實驗課也就沒有良好的現(xiàn)代醫(yī)學微生物學的教學。

2 提高學生的動手操作能力M改變以教師示教為主的教學方法

實驗課教學一般由帶教老師準備材料,并提供實驗步驟,學生對實驗認識不深。因此,必須為學生提供充分動手、思考和創(chuàng)新的機會,變“被動式”實驗為“主動式”實驗,將從傳統(tǒng)的“以教師為主”的模式轉變?yōu)椤皩W生為主”的模式,充分發(fā)揮學生的主動性和積極性 ;因此,帶教老師要注意學生實踐能力的培養(yǎng),引導學生積極參與,盡量保證每位學生都有動手操作的機會。同時,實驗教學里教師先示范操作的過程中,可將整個操作分解成若干個小單元,并明確告訴學生每個操作的“關鍵點”所在,強調實驗要觀察的重點,并且采用隨時抽查學生進行考核,這部分作為平時成績的依據(jù)。

3 結合實際,充實實驗課內容,提高教學質量

微生物學基礎實驗教學注重基礎知識的介紹,使學生牢固掌握微生物學研究的基本方法 與實驗技術,同時引導學生從簡單的驗證性實驗向綜合性實驗發(fā)展,提高學生觀察、思考、分析和解決問題的能力。為進一步加強微生物學的實驗操作技術的訓練,應根據(jù)實際情況,調整和增加實驗內容,如飲用水的細菌學培養(yǎng)、常見化膿性細菌的檢驗等一些實驗。同時,還應注意跟蹤學科前沿發(fā)展動態(tài),結合實際,及時、準確地吸收最新的知識增長點,安排相關的實驗,如引起非典流行的一種病毒,而這種新病毒以前沒有在人體或動物體內發(fā)現(xiàn)過,是引起呼吸道感染的一種病原體;它主要侵犯呼吸系統(tǒng),標本可經(jīng)通過用細胞培養(yǎng)分離、熒光定量PCR方法檢測進行鑒別。介紹這些內容,容易引起學生學習相關知識的興趣,增強學生對這些疾病的了解,又能夠激發(fā)他們解決醫(yī)學難題的迫切愿望。

4 提高學生分析問題的綜合能力

很多實驗的操作過程簡單,但若不認真準備,容易出現(xiàn)錯誤結果,因此,可組織學生討論,分析出現(xiàn)問題的原因,并找出解決問題的方法;另外,可給出一份模擬標本,讓學生自己依據(jù)已學理論知識,設計簡單的實驗方案,從準備培養(yǎng)基開始,進行各項鑒定實驗。要求學生記錄好每個實驗步驟及結果,最后寫出綜合性實驗報告。學生收到標本后,按“培養(yǎng)基準備細菌涂片、染色、鏡檢初步鑒定結果分離純細菌鑒定細菌(生化鑒定、血清學鑒定、藥敏試驗)報告結果”等臨床常規(guī)步驟進行獨立操作,完成各個項目。老師應在學生操作過程中要對每個環(huán)節(jié)進行檢查,并隨時提問題。學生在操作中若遇問題可討論、查詢相關資料及文獻或與老師交流等,此時老師只能引導,不作解答。整個實驗基本上在課內完成,但時間較有彈性。因為有時需要課前作些準備、課后看結果等。由于實驗從準備到結束都由學生獨立完成,在操作過程中遇到的所有問題,均需自己設法解決,有時沒有得到滿意的結果,但加深了對實驗理解和印象,有利于培養(yǎng)學生獨立工作的能力,增強學生的責任感,調動學生的學習積極性和主動性,培養(yǎng)學生分析和解決問題的能力,同時提高學生的綜合素質[2-3]。

參考文獻

[1] 宋波,趙丹,蔣麗艷等.微生物學基礎實驗教學改革中的幾點體會[J].醫(yī)學教育,2009,38(2):114-115

[2] 卜寧,陶思源.實施“三高”教學,創(chuàng)建“微生物實驗”課程新體系[J].微生物通報,2006,33 (1):169-170

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【關鍵詞】臨床醫(yī)學；微生物檢驗；質量控制；措施

【中圖分類號】R446.1【文獻標識碼】B【文章編號】1004-4949（2012）11-0024-02

隨著分子生物技術的不斷發(fā)展，微生物檢驗在臨床醫(yī)學診斷中的作用越來越大。在臨床醫(yī)學中，高質量的微生物檢測結果能夠幫助臨床醫(yī)生對病人做出更準確的診斷，同時給出合理的治療方案?；诖?，臨床微生物檢驗是一門實踐性較強的學科，其對檢驗人員的理論知識和臨床經(jīng)驗有較高的要求，不斷提高臨床微生物檢驗技術的準確性和靈敏度，提高檢驗質量，是臨床醫(yī)學的要求。

1微生物檢驗質量控制概述

科技進步為臨床醫(yī)學的發(fā)展鋪平了道路，醫(yī)學臨床檢驗擁有了更多更為精密的儀器，進一步提升了微生物檢測結果的可信性。但是，臨床微生物檢驗的質量控制仍然是檢驗工作的重要組成部分。

微生物的臨床檢驗涉及到多門學科，如：分析化學、生物學、生理學、統(tǒng)計科學、病理學等等?？偟膩碚f，微生物檢驗為臨床醫(yī)學提供了重要的醫(yī)學質變，是檢驗醫(yī)學的基礎分值。目前的微生物檢驗標本多指患者的血液樣品、分泌物樣本、體液樣本和各類排泄物等，檢驗人員根據(jù)檢驗樣本的性質區(qū)別和需要的指標不同，運用不同的儀器對樣品進行檢測，通過對檢驗各個環(huán)節(jié)的操作進行質量控制，確保檢驗結果的可信性。

臨床檢驗質量管理主要包括兩個方面的工作。首先，做好分析過程的質量控制管理；其次，做好分析前后的質量管理工作。質量管理工作的一般程序如下：第一，微生物檢驗人員與臨床醫(yī)生做好溝通工作，明確影響樣品檢驗的多方面因素，保證檢驗結果的可信性；第二，采樣程序規(guī)范化，盡量減少樣品采集過程中的污染；第三，微生物檢驗結束后，出具檢測報告。以上步驟共同組成了微生物檢測質量控制的全過程，缺一不可，任何步驟失誤都可能致使檢驗工作可信性降低。

2微生物檢驗質量控制與臨床醫(yī)學的關系

檢驗工作為臨床醫(yī)學服務，臨床醫(yī)學以檢驗工作為基礎，檢驗技術的不斷進步推動臨床醫(yī)學的發(fā)展，而臨床醫(yī)學的發(fā)展又反過來要求檢驗工作的日益精細化，微生物質量檢驗的結果關系到臨床醫(yī)生的對患者的癥狀進行診斷和健康狀況評估，因此，此二者密不可分，相輔相成。

首先，檢驗人員應當與臨床醫(yī)生加強合作與交流。當檢驗人員認為樣本結果異常時，應當與臨床醫(yī)生結合病人的實際情況討論檢驗結果，以確定檢驗結果是否可信，從而對患者進行診斷，防止對病人出現(xiàn)誤診情況，排除其他因素的干擾。

其次，檢驗人員與臨床醫(yī)生合作制度化。隨著檢驗技術的不斷發(fā)展，檢驗人員通過測定多項指標，從不同側面反映患者的身體狀況，越來越多新的指標開始發(fā)揮作用。當檢驗部門需要更新檢驗指標時，檢驗部門應當就新添檢驗項目的標本采集特征、特異性等詳細信息出具報告，向臨床醫(yī)生解釋如何正確理解檢驗結果，并規(guī)范此流程，使其制度化。醫(yī)生應當按照流程填寫檢驗項目申請單，樣品采集量和患者基本信息，確保診斷結果的正確性。

3微生物檢驗質量控制措施

在了解了微生物質量控制的概念及其與臨床醫(yī)學的關系之后，我們怎樣才能做好微生物檢測的質量控制工作？提高微生物檢驗的規(guī)范性？筆者結合自己的實際工作經(jīng)驗，給出了微生物檢驗質量控制的幾點措施。

3.1實驗室內控制

3.1.1樣品采集規(guī)范化： 樣品采集標準化是臨床微生物檢驗質量控制的先決條件。影響樣品采集過程的因素有很多，例如樣品的采集方法是否規(guī)范，樣品的保存是否規(guī)范等等，任何步驟的紕漏都可能造成樣品質量檢驗的不合格。目前，臨床微生物檢驗的樣品采集方式有兩種，一種是由患者自主采集，送往醫(yī)院檢查，例如尿液等，而有些樣本的采集技巧特殊，病人往往需要在醫(yī)生的協(xié)助下進行采集，例如進行痰液采集時，需要采集咽喉和口腔部位的痰液，這部分痰液的微生物較多，一般能夠滿足檢測要求，若是誤取為下呼吸道的痰液，由于此部位的微生物較少，導致微生物檢測出現(xiàn)誤差。樣本的保存同樣也會影響微生物檢驗，不規(guī)范的樣品保存和運送方法可能會造成樣品的損失和損壞。因此，實驗室內控制微生物檢測質量首先要從樣本質量抓起，使得樣本滿足微生物檢驗的基本要求。

3.1.2提高檢驗人員專業(yè)知識： 檢驗人員的專業(yè)知識時保證微生物檢驗質量的基礎。檢驗人員首先應當具備一定的理論知識作為基礎，同時應當擁有豐富的工作經(jīng)驗和出色的判斷能力。要做到以上三點，首先，醫(yī)院應當定期組織檢驗人員進行理論學習，同時鼓勵檢驗人員外出實習培訓，增加實踐經(jīng)驗，另外，醫(yī)院還可以組織工作技能大賽、定期考核等，促使檢驗人員不斷提升自己的專業(yè)知識，更好地為臨床醫(yī)學服務。

3.1.2加強分析過程質量控制： 分析過程質量控制是保證微生物檢驗質量的關鍵。在微生物檢驗過程中，各個分析環(huán)節(jié)都應當嚴格遵守操作要求。例如，培養(yǎng)基配置過程需謹慎，首先應當標明日期和編號，避免造成樣品混淆，接種應當在無菌條件下進行操作，控制好培養(yǎng)基的pH值，并隨時對培養(yǎng)基的狀態(tài)進行觀察記錄等。因此，無菌環(huán)境、涂片、接種等環(huán)節(jié)都應當進行嚴格的質量控制，保證樣品檢驗質量。

3.2實驗室間控制： 除了做好實驗室內部的控制工作，實驗室間控制也是微生物質量控制的重要環(huán)節(jié)。在較好的實驗室內部質量控制工作的基礎上，做好實驗室間控制為質量控制增加了一層保障。有關的檢驗質量控制部門應當定期對各個醫(yī)院檢驗部門的檢測水平進行考核，考核項目一般包括：實驗室的無菌條件，是否按時進行消毒和清潔，實驗室各類檢測儀器的性能，實驗室檢測人員的專業(yè)知識水平等等。相關部門做好評估報告，督促各個實驗室做好質量控制工作。

3.3加強管理工作，完善制度建設： 做好質量控制工作需要相應的規(guī)章制度作為保障。醫(yī)院微生物檢驗部門應當制定嚴格的工作制度，并要求檢驗人員嚴格遵守。首先，應當明確檢驗人員的職責分配，要求檢驗人員熟練掌握檢驗技術，同時，認真做好工作記錄，保管原始數(shù)據(jù)；最后，加強對儀器和藥品的管理，保證實驗室正常運轉。

4總結

綜上所述，微生物檢驗工作質量關系到臨床診斷的正確性，要做好微生物檢驗的質量控制工作，必須從規(guī)章制度、實驗室內外控制三方面入手。

參考文獻

［1］王偉民.淺談護理工作對檢驗分析前質量的影響及對策［J］.臨床檢驗雜志，20　07　，25?。??。?6.

篇5

[論文摘要]：針對食品微生物學課程教學，文章從教學內容、教學手段、教學方法和成績考核標準等幾個方面進行了探討，為食品微生物教學改革提供了新的思路。

食品微生物學是一門研究與食品有關的微生物的科學，通過對微生物的基本知識、基礎理論和基本實驗技能的教學，使學生能辨別有益的、腐敗的和病原的微生物，從而在食品制造、保藏過程中，充分利用有益微生物，控制有害微生物的活動，以防止食品的變質[1]。該課程內容多，涉及面廣，技術性實用性強，是食品專業(yè)的專業(yè)基礎課程。在教學中，除重視基礎理論知識、基本操作技能的傳授外，也注重了培養(yǎng)學生分析問題、解決問題的能力，做法和體會如下：

一、變學生被動為主動，變換教學立場

教師的備課不是簡單的“背課”[2]，是在對教學內容熟悉的基礎上，優(yōu)化內容，根據(jù)食品微生物學知識體系的要求合理分配教學時間，增加學生在課堂上的參與和主動，啟發(fā)引導學生完成學習任務，充分發(fā)揮教為主導，學為主體的作用。要改以往課堂以教師講為主，學生被強迫坐于課堂，不能也不敢出聲的傳統(tǒng)教學模式，做到讓學生“動”起來，讓學生自身主動地進入到學習狀態(tài)，增加學習興趣，提高學習效果。

如“食品微生物學”與“生物化學”等課程相互滲透、相互聯(lián)系，在授課時間上有前有后，為了避免相近課程某些內容重復，我們進行了授課內容的優(yōu)化。對于先修課程生物化學，已講過“物質代謝”內容，則以學生為主角，讓學生課下查閱資料豐富相關知識尤其是一些科研論文（這樣可以啟發(fā)學生發(fā)現(xiàn)更多問題），然后課堂向教師提問的方式來完成這部分教學內容。教師要根據(jù)學生提問的難易做到由淺及深地回答，幫助學生回顧已忘或還未掌握的內容。學生在提問時，允許學生充分發(fā)揮想象；老師答疑時要盡可能多聯(lián)系一些日常生活的實例和本學科當前研究的最新進展，用簡練、幽默、易懂的語言回答相關問題，這樣既豐富了學生知識，又調動了學生積極性和趣味性，讓學生在課堂上能夠感覺到自己是課堂主角，要發(fā)揮主角作用。

二、善于利用多媒體教學資源

傳統(tǒng)的板書加掛圖的食品微生物教學模式已遠遠不能滿足當今學生的信息量。計算機輔助教學成為當今教育科學及教學手段的重要組成部分[3]。多媒體技術應用于食品微生物教學中，使教學效果前所未有的提高。首先，多媒體技術使直觀教學成為可能。將微觀世界在課堂上生動再現(xiàn)，其效果勝過任何語言的描述。其次，多媒體提供的信息量遠遠大于傳統(tǒng)教學模式。課堂上學生可以觀看多幅圖片，閱讀多篇教學材料，這個數(shù)量可以是傳統(tǒng)教學的幾倍。第三，多媒體將多種教學資源進行了整合，提供了多種教學方法，如課件、動畫、相關網(wǎng)絡聲像資料及新聞報道等。

食品微生物學，不僅內容豐富，涉及面廣，發(fā)展迅速，而且個體微小，學生對它的認識遠不如對宏觀事物，再加上其營養(yǎng)方式、遺傳類型多種多樣、代謝機制錯綜復雜，學生往往感覺其知識繁瑣、抽象和難以理解。針對這種情況，將多媒體技術應用到微生物學課程的教學，受到了學生的普遍歡迎。通過flash動畫、PPT課件、高清晰顯微照片、動態(tài)顯微錄像等CAI教學軟件，使微觀世界宏觀化、教學內容形象化[4]。例如，把細菌、真菌、病毒的顯微世界以色彩豐富、直觀清晰、生動形象的三維畫面或科教電影形式展示給學生，以動畫的形式表現(xiàn)出細菌鞭毛的運動、T偶噬菌體的增殖、主動吸收的方式、細胞的分裂過程等內容。不僅激發(fā)了學生的學習興趣，有助于學生的理解與接受，而且可突破教學中的難點，加大教學的信息量，提高講課的效率。

三、采取形象化教學形式

在實際教學過程中要注重知識的邏輯性和系統(tǒng)性，強化抽象理論與具體實例結合，增加學生對抽象理論的感性認識和接受能力。食品微生物學主要講解了微生物在食品生產(chǎn)、貯運及銷售過程的利害影響，但由于微生物的自身特性，我們很難就只有顯微條件下才能觀察到的細小生物讓其形象化，宏觀化。雖然多媒體已經(jīng)在此方面有了很大改善，但要做到與具體實例聯(lián)系更加緊密，更加強化學生的感性認識，我們必須借助實際生產(chǎn)、生活中的例子來實現(xiàn)形象化教學。如，上課時我們將一些常見的白酒、紅酒、酸乳、面包、醬類等發(fā)酵食品帶入課堂來講授微生物在發(fā)酵食品中的應用，并且通過與實驗緊密結合，開展發(fā)酵酸乳來增強學生對微生物利用的認知，讓學生自已親自動手制作酸乳，品評自已的勞動成果，便于理解和掌握教學內容重點。再如講到微生物對食品的危害時，我們選用了一些發(fā)霉的糧食、發(fā)霉的馬鈴薯以及發(fā)臭的肉和罐頭等進入課堂，這樣在理論講解時有現(xiàn)實的例子，無論從教師的講授還是學生掌握都因有了宏觀感性認識而變得輕松容易。

四、調動學生興趣，培養(yǎng)創(chuàng)新能力

興趣是學習的動力，也是創(chuàng)新的動力，創(chuàng)新的過程需要興趣來維持。教育學家烏申斯基說：“沒有絲毫興趣的強制學習，將會扼殺學生探求真理的欲望。”[5]食品微生物課堂教學中要注重培養(yǎng)學生的學習興趣，養(yǎng)成學生良好的學習習慣，為學生創(chuàng)造性學習奠定基礎。那么如何在微生物教學過程中做到調動學生興趣，培養(yǎng)創(chuàng)新能力呢?我們主要從三方面來做起。第一，因材施教。學生的個性差異和智力發(fā)展情況各不相同，因材施教，對不同層次的學生實施不同程度的思維能力和創(chuàng)造能力，對不同層次的學生要有不同的評價標準和不同的目標要求。第二，以“新”為軸，調動學生學習興趣。教學中突出“新”的理念（即運用新思想，聯(lián)系新理論，列舉新課題等），在激發(fā)學生的學習熱情，培養(yǎng)提出問題，解決問題的能力，積極參加各種學術討論會，大膽提問等方面都無疑會起重要作用，同時還賦予學生寶貴的創(chuàng)新思維。第三，多樣化傳授知識。改傳統(tǒng)課堂教學模式，引入食品中微生物變化的課外觀察，自行了解微生物的生長變化；鼓勵學生課堂提問，學生課外查閱資料課堂以報告會形式進行教學內容討論；積極開展相關實驗，引入校園河水中微生物檢測實驗，培養(yǎng)學生自行設計安排和完成實驗的能力。

五、強化實驗教學，重視動手能力

食品微生物學是一門實驗性、技能性很強的專業(yè)基礎課，這一學科的在校大學生踏上工作崗位前，普遍存在動手能力較差、實驗技能欠缺的問題。充分利用現(xiàn)有的力所能及的各種條件，加強實驗技能培訓，是最快捷有效的彌補方法。

（一）課堂實驗

食品微生物實驗課開始時，講明實驗目的、要求、步驟和注意事項，努力使實驗成功的要求變成學生頭腦中的指令，使每位同學都全神貫注地投入到實驗當中去。從最基本的操作技術做起，抓住實驗課上一切可以利用的機會，采取多種形式強化基本技能。具體如下：

最初，教師進行實驗目的、要求、步驟和注意事項的詳細講解。

其次，以多媒體的形式將預先錄制的實驗過程向學生播放。這樣既可以回顧理論教學內容加深實驗印象，又可使學生初步了解實驗過程、實驗步驟及實驗中的關鍵操作，幫助掌握實驗技能。

再次，教師與學生同時進行實驗操作。這樣進行實驗，學生在觀看了錄像后對部分仍不明白或是記憶不清楚的地方可以通過教師演示與他們實驗的同步，進行實驗信息交換，從而讓學生能夠最短最及時最迅速地掌握正確的實驗技能。

最后，進行實驗總結，認真完成實驗報告的寫作和批閱，從中找出問題并進行集中答疑，進一步修正學生實驗中的錯誤。

（二）課外實驗

不定期安排學生在課外做些簡單實驗或集中安排學生課外進行實驗技能訓練。如在講微生物腐敗變質時安排學生課外取一空礦泉水瓶內裝入校園河流中比較清澈的水，然后進行封口存放，直至水質變化產(chǎn)生腥臭。讓學生通過這種現(xiàn)象來強化課堂所學內容，起到了良好教學效果。再如集中學生利用課余時間進行校園河水中微生物檢測實驗，讓學生以小組為單位獨立完成從實驗設計到完成檢測報告一系列工作，并且最后進行結果評比。這樣不但豐富了學生課余生活，而且還調動了學生的學習積極性，提高了學生的實際動手和綜合運用知識的能力。

六、建立適合當代大學生的考核機制[6]，正確評定學生成績

實行理論和實驗考試分離，突出實驗，綜合評定的考試模式。改以往教師授課內容為藍本，學生考前背，考后忘的非正常態(tài)考試模式。將理論考查內容面放寬加大，強調與實際食品生產(chǎn)的聯(lián)系，將知識點以命題形式溶入現(xiàn)實生活，做到“學以致用”。實驗考試采用筆試和操作各占一半的命題形式，做到實驗理論和實驗操作并行，要求學生在規(guī)定時間內完成兩部分命題，達到理論、操作都掌握的目的。實驗筆試以實驗基本原理和關鍵操作步驟為主要命題范圍，實驗操作以抽簽形式定，內容均為食品微生物必須掌握的實驗內容，如顯微鏡觀察、細菌染色、細菌計數(shù)等。最后學生成績由理論和實驗兩部成績再結合平時的課堂提問及實驗情況進行綜合評定，給出學生一個公平公正科學的考核成績。通過這種模式考試既要求學生掌握了食品微生物的相關理論知識，又培養(yǎng)了學生的實驗操作技能，為以后的實際工作打下了堅實基礎。

實踐證明，我們進行的食品微生物課程教學改革的大膽嘗試是成功的。教學內容的豐富更新、教學手段的現(xiàn)代化，考核機制的客觀化，不僅提高了教學質量和教學效果，而且激發(fā)了學生的學習興趣，拓寬了學生的知識面，增強了學生的動手能力，適應了現(xiàn)代社會對人才培養(yǎng)的要求。

參考文獻

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[2]朱宏飛，微生物教學中激發(fā)學生興趣的幾點探索[J]，微生物學通報，2007，34(1)173~175

[3]梁峙，微生物教學中的CAI[J]，彭城職業(yè)大學學報，2001，3(16)，76~79

[4]李平、杜先鋒、蔣軍，運用多媒體課件好食品微生物學的嘗試[J]，高等農(nóng)業(yè)教育，2002，10，42~44

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【關鍵詞】微生物實驗教學實驗興趣應用型

【中圖分類號】G64 【文獻標識碼】A 【文章編號】2095-3089（2014）05-0186-02

微生物學是生物技術、生物技術及應用、食品科學與工程、生物工程、制藥工程、環(huán)境工程等專業(yè)的專業(yè)基礎課程，既有系統(tǒng)的理論，又有系統(tǒng)的實踐應用。微生物學實驗課程教學作為微生物學重要組成部分，既是對學生課堂理論知識的檢驗，又是學生實踐能力的培養(yǎng)和提高的重要環(huán)節(jié)，對培養(yǎng)高質量的應用型人才具有重要作用。因此，如何利用微生物實驗教學培養(yǎng)學生實踐應用能力的培養(yǎng)，是擺在我們面前的重要課題，而學習興趣是學生學習的最好動力，只有充分激發(fā)學生的學習興趣，才能最大限度地發(fā)揮學生學習的主動性。因此，培養(yǎng)學生對微生物實驗的興趣，對于開展微生物實驗具有非常積極的作用。在教學工作中，經(jīng)過不斷的探索和嘗試，總結了以下幾點經(jīng)驗和方法。

1.教材選用的實用性

獨立院校作為一個在本世紀初出現(xiàn)的新型的辦學模式，培養(yǎng)學生的目標較為明確即培養(yǎng)應用型人才。發(fā)展十幾年來，社會也逐漸對獨立學院的學生有所認可，教學出現(xiàn)了一些較其他本科院校不同的情況。于是針對獨立院校的學生特點和教學特點，出現(xiàn)了一些適用的教材，如經(jīng)濟科學出版社的“普通高校應用型人才培養(yǎng)規(guī)劃教材”系列。但是目前對于微生物學實驗還沒有相對應的教材，因此在在教材的選用上就需要和授課對象的專業(yè)方向相一致，基礎實驗簡單化，但是操作要點要明確，并且有一定的和行業(yè)實踐相結合的實驗項目，這樣的教材才適合應用型人才的培養(yǎng)。可根據(jù)自身的需要，編寫一部可行的教學教案。

2.實驗內容的合理安排

目前高校微生物實驗課程的安排多與理論知識同步，即微生物觀察方法―微生物接種、分離、培養(yǎng)和無菌操作―培養(yǎng)基的配制―微生物顯微計數(shù)和平板菌落計數(shù)―生理生化反應―檢測實驗[1]。這種安排使學生仍然禁錮在理論教學的套路上，無法對操作的連貫性和實驗的真正目的掌握清楚，因此對于這樣的現(xiàn)象將實驗內容的順序做調整讓學生知其然而且知其所以然，具體的安排可如下：無菌概念和培養(yǎng)基的配制-微生物的分離和培養(yǎng)―菌落計數(shù)和顯微計數(shù)―微生物個體的觀察方法―生理生化反應―檢測實驗。這樣使同學們能夠明白整個實驗的流程，也方便學生獨立完成某項微生物檢測任務，而且能夠讓學生有逐步深入、由宏觀到微觀、由整體到個體的一個認識過程。另外在每堂課最后應該提前告知下次實驗的內容和要求，要求學生做預習。

3.實驗項目的實用性

在微生物實驗教學中，應盡量安排學生感興趣的微生物學日常現(xiàn)象和理論，可將學生遇到的一些問題同微生物學知識理論緊密結合起來，這樣就能保障學生能夠充分掌握微生物學的各種方法和步驟。如，在進行環(huán)境條件對微生物的影響的項目中可選擇生活中用的酒精、碘酒、洗手液或洗衣粉等時間進行檢測，在微生物形態(tài)觀察中可選擇生活中發(fā)霉變質的食物進行培養(yǎng)并觀察，從而能夠使學生更加直觀的認識到人類與微生物之間的緊密關系。另外根據(jù)實驗課時安排可確定幾個和生活相關的自選試驗，讓學生自己選擇作為綜合實驗，并以學生為主題，教師為輔，進行實驗資料的收集和準備，制定可行的實驗步驟，這樣學生的主動性就逐漸的調動起來，興趣自然而然的就提高了[2]。

4.實驗考核的嚴格性

獨立學院學生在學習習慣上有所欠缺，但是學習能力還是比較強，但是自律性或主動性較弱，因此才實驗課程教學中，教師要把握實驗課上的紀律性，并且嚴格考核，有條件的可以安排期末實驗測試，對一學期的實驗操作進行檢驗，在課程進行過程中對于無菌操作技術可進行小測，嚴格規(guī)范整個實驗的操作，從試劑的取用，玻璃儀器的清洗，滅菌物品的包扎等各個環(huán)節(jié)進行規(guī)范養(yǎng)成良好的實驗習慣和素養(yǎng)。另外對成績的核定不能僅僅依靠最后的考核，日常的考勤和實驗中的表現(xiàn)應該占有一定的比例，可采用考勤20%（包括值日考勤）、實驗表現(xiàn)30%、實驗報告30%、考核20%[3]。

5.教學手段的多樣性

在教學手段上，不能僅僅是板書和簡單的講解，可以利用多媒體教學系統(tǒng)使文本、圖像、圖形、聲音、動畫、視頻等有效地結合，突出實驗的難點和重點，并且對實驗中出現(xiàn)的問題能夠更直觀的顯現(xiàn)出來[4]，比學生抽象的想象要更加容易理解。另外實驗的演示也是至關重要的，盡管有圖片和展示，但是實實在在的演示能讓同學們更加清晰的了解實驗操作，從而也能明白操作的關鍵要點。

6.及時總結與反饋

每次實驗完成教師應及時的總結在課堂結束或第二實驗開始時，對學生在實驗過程出現(xiàn)的問題和整個實驗完成情況進行總結，了解學生對本次實驗的收獲或疑問，及時解決、及時反饋。這樣才能加深學生對實驗的理解和鞏固，改變錯誤的操作方法或方式。也可以幫助教師了解教學進度和學生的需求，在下次教學中可以有針對性的講解和演示。

實驗本身就是提高學生實際操作的重要環(huán)節(jié)，隨著社會對“應用型”人才的重視，對學生的動手能力要求也越來越高越來越嚴格，在今后的教學過程中要不斷總結教學經(jīng)驗，探索實驗教學方法，提高學生的實踐操作能力，為社會培養(yǎng)出更多優(yōu)秀的應用型人才。

參考文獻：

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[2]宋波.高校微生物學實驗教學存在的問題及改革對策.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011, 15:38-39.

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Abstract： More and more researches are focused on viable but non-culturable bacteria in medical microbiology， epidemiology， general microbial ecology and sanitation quarantine since it was put forward in 1982. Although the VBNC is discussed in the above several aspects， the insufficient place is bacterial species are limited， especially the research only applies to pathogens. The recent researches concerning VBNC bacteria are reviewed， the formation mechanism， change and types of VBNC bacteria and the meanings of the studies are discussed.

關鍵詞： 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌;生物學特性;微生物資源

Key words： VBNC bacteria;biological characteristics;microbial resources

0 引言

細菌的VBNC狀態(tài)是指細菌處于不良環(huán)境條件下，采用普通的方式不能促使其自然的生長繁殖，那是因為菌體當中的有很多內部特質發(fā)生了改變。其中細胞質密度、蛋白質、核糖體、DNA的改變會引起菌體收小，細胞壁和細胞膜的進一步改變。雖然如此，但是菌體還是能夠進行新陳代謝。

1 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌

1.1 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌的特點

1.1.1 菌體在形狀上會有所改變 許多進入VBNC狀態(tài)的細菌會發(fā)生改變的方面集中體現(xiàn)在體積、形態(tài)和排列上。其中，有兩種細菌菌體體積變化非常明顯，那就是桿菌和弧菌。有時，圓球形的菌可能是由桿狀的菌變來的，也有可能弧狀菌的衍生而來的。有時，有些菌還可以通過交聯(lián)的方式來組成長連狀排列。

1.1.2 喪失了在普通培養(yǎng)基上生長繁殖能力 微生物菌體進入活的不可培養(yǎng)狀態(tài)之后，其增值能力大大降低，在普通培養(yǎng)基上基本不增值，或者其菌落極小不易觀察，不會繼續(xù)生長。

1.1.3 病原菌可保留毒力和致病性 通常情況下，保持在VBNC狀態(tài)的細菌在某種特定的情況下會產(chǎn)生致病性和感染性。姜熒安等發(fā)現(xiàn)了溶藻弧菌及其不可培養(yǎng)狀態(tài)復蘇后并不能解決斑馬魚的致病性，研究顯示溶藻弧菌在對外界的相關刺激幾乎沒有抵抗力。那是因為當細菌保持在VBNC狀態(tài)的時間太久，其相關的結構就會失去原來的模樣，進而導致致病性和感染性也會逐漸消失。

1.1.4 VBNC狀態(tài)菌的壽命是1-2年。

1.1.5 當各方面條件都合適時，VBNC狀態(tài)菌會重新回到可培養(yǎng)狀態(tài)。一部分不可培養(yǎng)狀態(tài)微生物在適宜的條件下或者經(jīng)過一些誘導因子的作用，會進入可培養(yǎng)狀態(tài)，恢復可培養(yǎng)狀態(tài)下的生物活性，開始新的新陳代謝。

1.2 VBNC狀態(tài)菌的三種類型

1.2.1 微生物本身具備生長繁殖的潛力，但是現(xiàn)有的相關條件并不能促使其自由生長。一旦掌握相關的培養(yǎng)技術，這類微生物完全可以開發(fā)出來。

1.2.2 微生物的分裂能力在某些特定的情況下可以得到重新的應用，即使是其在無法繁殖的狀態(tài)下。通常，微生物從一個可適應環(huán)境進入另一個不能適應的環(huán)境時，其系統(tǒng)內部會發(fā)生改變，這樣會導致其進入一個不可培養(yǎng)的狀態(tài)。但其生命力非常強大，只需要再進入可適應的環(huán)境，它就可以正常地進行生長代謝。

1.2.3 任何條件都不能使其重新生長代謝。

2 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌的形成

常見誘導微生物進入VBNC狀態(tài)的因素：

①物理因素。

溫度、氧氣濃度、光照強度、濕度都會導致微生物的新陳代謝受到阻礙。多數(shù)文獻顯示溫度是使微生物進入不可培養(yǎng)狀態(tài)的主要因素，并且多和寡養(yǎng)條件相結合。

②化學因素。

當細菌出現(xiàn)有害化學物質、營養(yǎng)成分缺乏這些情況時，細菌就會長期處于饑餓狀態(tài)，就沒有能力進行新陳代謝，接著就會進入VBNC狀態(tài)。

③生物因素。

水生細菌在條件合適的時候，可以重新進行新陳代謝;一旦處于不適合其生存的條件時，其便可以附著在生物體的體外進入VBNC狀態(tài)。

3 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌的復蘇

復蘇是指細菌從VBNC狀態(tài)進入可培養(yǎng)狀態(tài)的這一系列過程。VBNC細菌的主要特點就集中在復蘇這方面。但是，許許多多的實驗證明，復蘇絕不是簡簡單單的一個過程，而是涉獵很多方面的相當復雜的一個過程，這也就意味著復蘇的挑選非常嚴格。

通過直接逆轉不良環(huán)境條件這種方式，在不良環(huán)境條件下，通過直接逆轉的方式，實現(xiàn)VBNC細菌復蘇。有的研究表明VBNC細菌轉入宿主體內孵育，可以使其得到復蘇。

4 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌的幾種研究方法

4.1 VBNC研究中的熒光顯微鏡檢測技術

吉林農(nóng)業(yè)大學的李影等人，在前人熒光染色顯微技術的基礎上，經(jīng)過大量的實驗改進了實驗用品及方法，用在不可培養(yǎng)狀態(tài)菌的研究上取得了很好的效果。其過程大概如下：

①菌體的前處理。

控制菌液濃度在1×106個/mL，用滅菌生理鹽水充分洗滌菌體，離心皆為8000r/min，離心2min。以盡可能的除盡培養(yǎng)液，以免培養(yǎng)液產(chǎn)生自發(fā)熒光干擾結果。

②微孔濾膜的前處理。

主要是微孔濾膜的疏水性檢查。

③微孔濾膜的染色與烘烤。

將處理過的微孔濾膜光面朝上，在濾膜圓心處滴一滴黑色鋼筆墨水，讓其自行侵染擴散并浸透整個濾膜，然后60℃烤膜20min。

④VBNC細菌樣本可以將其染成熒光色。

將VBNC菌體沉淀溶于50μL滅菌生理鹽水中，貼壁加入工作濃度的SYTO-9和PI各25μL至離心管中，瞬間離心，吹吸混勻，室溫避光染色15min。

⑤制備VBNC細菌熒光標本。

首先將微孔濾膜先染成黑色，其次將染好的濾膜完整的放在載玻片的中間，再將染好的VBNC菌液滴入10μL，再通過手動壓片方式除盡濾膜和蓋玻片之間的空氣夾層。

最后，將無自發(fā)光的油滴一滴在蓋玻片上，將蓋玻片放于落射熒光顯微鏡上，放于暗室中細心觀察，并計算活菌數(shù)量。在視野中，發(fā)出綠色熒光的即為活菌，而發(fā)出紅色熒光的為死菌。

4.2 VBNC研究中的宏基因組學技術

采用宏基因組學技術研究活的不可培養(yǎng)的微生物主要有圖1幾個步驟。

在圖1步驟中樣品的提取方法是一個重要的步驟，主要有兩種，一種是原位提取法，另一種是異位提取法。

采用化學方法、酶降解方法、物理方法，使得微生物當中的DNA進行釋放和純化，這種純化方式是在微生物環(huán)境中，破壞微生物細胞實現(xiàn)的，這就是原位提取法。這種方法所獲得的DNA可以保存完好，便于研究探索。但是由于較大的剪切力的存在，會使所提取的DN段較小（1kb-50kb），這樣當構建載體時，可以選用質粒載體或者λ噬菌體，然后以大腸桿菌作為宿主細胞。

異位提取法，采用離心介質等方式首先讓微生物從環(huán)境樣品中脫離出來，再利用處理純培養(yǎng)細胞的方式，使微生物細胞得以分裂和降解，并提取DNA。這種方法的優(yōu)點很多，純凈度較好，DNA保存完好，對于學者的研究很有幫助和啟迪。一般選用細菌人工載體或者柯斯質粒作載體。

在轉化子的挑選上也是一個很重要的步驟，一般分為三個水平的挑選：

①生物活性水平的篩選。

運用相關的活性檢測設備，采用先進的活性檢測手段對活性克隆子進行選擇，利用重組克隆產(chǎn)生的新活性進行檢驗，從而得出最優(yōu)的效果。

②挑選具備最好的化合物結構的細菌。

采用色譜圖的檢測手段，通過比對特定的峰值對應特定的物質的結構，判斷出宿主細胞或發(fā)酵液抽提出的最優(yōu)結構的克隆子。

③DNA序列水平的篩選。

運用序列相似性原理，可以判斷出相同的基因序列的的幾種酶很有可能就是同一種酶。根據(jù)這個相似原理，可以將相關功能基團的序列通過某種特定的方式增加并挑選陽性克隆子。

4.3 VBNC研究中的其他技術

梯度凝膠電泳技術是用來分離DN段的，主要運用的是梯度變性膠在不同變性劑不同DNA條件下的解離程度的特點，適用于突變分析。在電泳時，具有解鏈的DNA的速度比不具備解鏈的較大，這樣就可以使得具有不同解鏈效果的DNA得到很好的分離結果。其他一些常規(guī)技術還有核酸雜交技術、PCR技術等，其中PCR技術經(jīng)過長期的發(fā)展，更延伸了不同的PCR技術。

5 活的不可培養(yǎng)狀態(tài)菌研究的重要意義

在醫(yī)學研究中的重要性：病原VBNC菌具有的致病性、抗原性以及黏附性與耐藥性，并且一些VBNC菌在某些條件下能夠轉化成正常的細菌體，恢復正常的致病力。這是對衛(wèi)生及醫(yī)學檢驗方法提出新的挑戰(zhàn)。

土壤生態(tài)研究中的意義：由于自然樣品中只有極小一部分活的微生物可以用實驗室方法培養(yǎng)出來，所以傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法是不能表現(xiàn)出自然界中微生物的多樣性。VBNC狀態(tài)菌的發(fā)現(xiàn)大大擴充了土壤微生物的多樣性，以此更有效地尋找新類型微生物及其有應用價值的產(chǎn)物。

參考文獻：

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[2]李影，段銳，錢愛東，等.“活的非可培養(yǎng)狀態(tài)”細菌熒光觀察方法[J].生物技術，2010，20（3）：66-69.

篇8

關鍵詞：食品微生物 教學改革 多媒體課件 實驗與實習

中圖分類號：R37 文獻標識碼：A 文章編號：1005-0515（2013）5-006-01

食品微生物學是一門研究與食品有關的科學，是食品專業(yè)的專業(yè)基礎課程。通過對微生物的基本知識、基礎理論和基本實驗技能的教學，使學生能辨別有益的、腐敗的和病原的微生物，從而在食品制造、保藏過程中，充分利用有益微生物，控制有害微生物的活動，以防止食品的變質。該課程內容多，涉及面廣，技術性實用性強，在教學中，除重視基礎理論知識、基本操作技能的傳授外，也注重了培養(yǎng)學生分析問題、解決問題的能力。

一、從不同的方面進行教學模式改革

1、教師備課

教學方法的改變首先要求教師在備課形式上有所改變。目前，微生物學因科學技術的發(fā)展而突飛猛進，日新月異。因此，在備課時要求教師除了以教材為藍本，還要增添新知識、新技術、新方法等內容，并將相應的內容總結、整合貫通后成為其授課資料。這樣可以極大的提高教師主動學習新知識、了解本學科新動向的積極性，同時，也拓展了學生的知識面。

2、改革理論教學方法

在對教學內容熟悉的基礎上，優(yōu)化內容，根據(jù)食品微生物學知識體系的要求合理分配教學時間，增加學生在課堂上的參與和主動，啟發(fā)引導學生完成學習任務，充分發(fā)揮教為主導，學為主體的作用。要改以往課堂以教師講為主，學生被強迫坐于課堂，不能也不敢出聲的傳統(tǒng)教學模式，做到讓學生“動”起來，讓學生自身主動地進入到學習狀態(tài)，增加學習興趣，提高學習效果。

3、調動學生興趣，培養(yǎng)創(chuàng)新能力

興趣是學習的動力，也是創(chuàng)新的動力，創(chuàng)新的過程需要興趣來維持。食品微生物課堂教學中要注重培養(yǎng)學生的學習興趣，養(yǎng)成學生良好的學習習慣，為學生創(chuàng)造性學習奠定基礎。那么如何在微生物教學過程中做到調動學生興趣，培養(yǎng)創(chuàng)新能力呢？我們主要從三方面來做起。第一，因材施教。學生的個性差異和智力發(fā)展情況各不相同，因材施教，對不同層次的學生實施不同程度的思維能力和創(chuàng)造能力，對不同層次的學生要有不同的評價標準和不同的目標要求。第二，以“新”為軸，調動學生學習興趣。教學中突出“新”的理念即運用新思想，聯(lián)系新理論，列舉新課題等，激發(fā)學生的學習熱情，培養(yǎng)提出問題，解決問題的能力，積極參加各種學術討論會，大膽提問等方面都無疑會起重要作用，同時還賦予學生寶貴的創(chuàng)新思維。

二、根據(jù)教材，制作多媒體課件

多媒體技術應用于食品微生物教學中，使教學效果前所未有的提高。同以往的僅僅教授課本內容的方法比較，多媒體教學的信息量也大大增加。因為，教師在課前做了大量準備，授課時只需輕點鼠標，大量翔實、圖文并茂的幻燈片就會呈現(xiàn)在學生眼前。省出的板書時間，則可講授更多更實用的內容。當然，這對同學們的學習和記筆記就提出了更高的要求。面對來自于教材及互聯(lián)網(wǎng)的海量的信息，學生有可能會不知所措、來不及記筆記、難以分清主次。針對這種局面，教師應有應對措施。如：課前把哪些是應知的、哪些是應會的告知學生，每次課后總結、下次課前提問，反復重復學生需掌握的重點和難點。

三、強化實驗教學，重視動手能力

1.規(guī)范實驗基本操作，培養(yǎng)嚴謹?shù)目蒲袘B(tài)度

微生物學的實驗課在教學中所占的比例較大，實驗教學是全面實施教學大綱和提高教學質量的重要環(huán)節(jié)，是加強實踐教育環(huán)節(jié)的重要內容。實驗教學是理論知識和實驗活動、間接經(jīng)驗與直接經(jīng)驗、抽象思維和形象思維、傳授知識和訓練才能相結合的過程，是科研工作的主體，嚴謹認真是實驗的關鍵。

2、讓學生參與實驗前的準備

以前，每次實驗都是由實驗人員提前準備好了實驗菌和培養(yǎng)基，學生實驗時只管接種已知實驗菌，培養(yǎng)好后再在教師的指導下完成實驗。這樣學生對實驗菌常出現(xiàn)的地方、鑒定程序、基本鑒定依據(jù)等都一無所知，因而極不利于培養(yǎng)學生的動手能力和實踐能力。為了加強學生的實踐操作技能的培養(yǎng)，我們讓學生自己動手準備實驗，如在做細菌接種實驗前，讓學生自己動手制備培養(yǎng)基，熟悉培養(yǎng)基配制的環(huán)節(jié)，并用他們接種培養(yǎng)的細菌進行后續(xù)的實驗。這不僅提高了學生的實驗技能，也培養(yǎng)了學生強烈的工作責任心。

3、強化基本技能：

食品微生物實驗課開始時，講明實驗目的、要求、步驟和注意事項，努力使實驗成功的要求變成學生頭腦中的指令，使每位同學都全神貫注地投入到實驗當中去。從最基本的操作技術做起，抓住實驗課上一切可以利用的機會，采取多種形式強化基本技能。具體如下：

（1）教師進行實驗目的、要求、步驟和注意事項的詳細講解。

（2）以多媒體的形式將預先錄制的實驗過程向學生播放。這樣既可以回顧理論教學內容加深實驗印象，又可使學生初步了解實驗過程、實驗步驟及實驗中的關鍵操作，幫助掌握實驗技能。

（3）進行實驗總結，認真完成實驗報告的寫作和批閱，從中找出問題并進行集中答疑，進一步修正學生實驗中的錯誤。

四、要求學生學寫專題綜述，培養(yǎng)學生獲取知識的方法和能力

微生物學作為一門重要的專業(yè)基礎課，它既是基礎課，又是應用科學，它的理論和應用研究都非?；钴S，科技信息量猛增。由于教師的消化吸收能力有限，時間也有限，不可能在短短的幾十個學時內把本學科的知識、技術百分之百地傳遞給學生。

為了使學生對微生物在其專業(yè)中的應用和研究動態(tài)有較全面的了解，以彌補教材的短缺與滯后，在開始授課時，結合現(xiàn)實的情況，適時提出一些論題，要求學生課后到圖書館檢索，查找文獻資料，然后寫出綜述，在課堂上指定幾名同學講解、然后點評。

篇9

摘要目的：探討六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器在層流手術間空氣檢測中的使用方法。方法：用FA-1型六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器按制定的操作流程對層流手術間進行空氣采樣后計算結果，并評價效果。結果：各層流手術間的空氣中微生物數(shù)量均在GB50333制定的標準內。結論：六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器具有操作簡單、采樣效率高、結果更客觀的優(yōu)點，有助于手術室感染質量監(jiān)控的開展。

關鍵詞 六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器；層流手術間空氣檢測；應用

doi：10.3969/j.issn.1672-9676.2014.02.084

醫(yī)院感染是指患者入院時既不存在也不處于潛伏期而在醫(yī)院內發(fā)生的感染，包括在醫(yī)院內獲得而于出院后發(fā)病的感染。手術室是醫(yī)院感染控制的重點科室。由于層流手術間的廣泛使用，層流手術間的空氣監(jiān)測則是手術室感染質量監(jiān)控的一項重點工作。為此，我手術室引進三臺FA-1型六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器對手術間及輔助區(qū)域進行空氣監(jiān)測，現(xiàn)將方法介紹如下。

1特點

六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器是由6個撞擊器組合成一體，每一級實際是一個單級采樣器，利用六次反復撞擊原理，絕大部分粒子都撞擊下來，因而它采集到的粒子大小范圍較廣，而且有更高的采樣效率。

2工作原理

六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器模擬人體呼吸道的結構及空氣動力學特點，采用撞擊原理將懸浮在空氣中的微生物粒子按大小分別采集在培養(yǎng)皿上，然后做細菌培養(yǎng)，分析結果。

3操作步驟

3.1物品準備準備六級撞擊器，主機，定時器，橡膠管，操作臺， 無菌治療巾2塊，無菌手套，無菌紗布，75%酒精，每個采樣器準備7個培養(yǎng)皿（6個操作組，1個操作對照組），另準備1個制作對照組（由感染辦準備）。

3.2環(huán)境準備采樣前提前30 min通知保潔人員進行物體表面清潔，打開層流，關閉房間門，靜置30 min。

3.3操作步驟洗手，戴口罩，戴無菌手套，鋪置無菌操作臺，用無菌紗布蘸75% 酒精擦拭撞擊器（先外后內）、主機、橡膠管，然后放于無菌操作臺上。將橡皮管與主機、撞擊器連接好，30 min后打開房間，將無菌巾鋪于手術床上，再將機器放于手術床上；將培養(yǎng)皿按從上到下的順序放入臺座上，瓊脂面向上，將蓋扣在臺面上。操作對照組的準備：在打開任一操作組培養(yǎng)皿的同時打開對照組培養(yǎng)皿，在蓋上臺座的同時蓋上對照組皿；掛上3個彈簧拉鉤，取下撞擊器的進氣口的上蓋；將記時器設定為30 min，將機器插頭插在計時器上，再將記時器插在電源插座上。按下計時器的“倒計時”鍵，再按“電源開關”，調節(jié)“流量調節(jié)旋鈕”，使流量計轉子穩(wěn)定在28.3 L/min，離開房間；30 min后進入房間，蓋上進氣口上蓋，按從下到上的順序收回培養(yǎng)皿；將培養(yǎng)皿放入清潔容器，及時送至細菌室培養(yǎng)［1，2］；用中性洗滌劑或超聲波清洗撞擊器，如噴孔有堵塞，應用高壓氣流或配備的細針清除。

4培養(yǎng)條件

將采樣后的培養(yǎng)皿倒置于37 ℃恒溫箱中培養(yǎng)48 h。

5結果計算

空氣中微生物數(shù)量計算公式：空氣中微生物數(shù)量(CFU/m3)=所有平皿菌落數(shù)/［采樣時間(min)×28.3(L/min)］×1000

將得出的結果按手術間層流級別與GB50333制定的標準值進行比對，即可得知手術間空氣的質量是否達標。如超標則應對操作環(huán)節(jié)、培養(yǎng)皿、手術間對輔助區(qū)的壓差、層流設備等進行排查，分析原因，進行改進。再按標準流程用撞擊式空氣微生物采樣器進行采樣監(jiān)測。

6小結

隨著現(xiàn)代醫(yī)療技術的飛速發(fā)展，傳統(tǒng)的空氣監(jiān)測方法“沉降法”無法適應實際工作中空氣潔凈度監(jiān)測的需要。而六級篩孔撞擊式空氣微生物采樣器具有操作簡單、采樣效率高、結果更客觀的優(yōu)點，有助于手術室感染質量監(jiān)控的開展，可作為醫(yī)院內空氣細菌學監(jiān)測的常規(guī)方法推廣應用。同時，制定簡單、規(guī)范化的操作流程，對感控監(jiān)測員進行規(guī)范化培訓非常重要。

參考文獻

［1］孫敬，陳會，陳麗霞，等.醫(yī)院內環(huán)境空氣細菌監(jiān)測方法學探討［J］.江西醫(yī)學檢驗，2006，24(5)：390-392.

［2］魏革，劉蘇君主編.手術室護理學［M］.北京：人民軍醫(yī)出版社，2005：190-191.

篇10

關鍵詞：微生物學 實驗室管理 實驗教學 改革

中圖分類號：G642 文獻標識碼：A 文章編號：1673-9795（2013）05（a）-0119-01

微生物學本身的特性決定了它很強的實驗性，而微生物實驗也就順理成章的成為微生物學不可或缺的重要組成部分。微生物學實驗作為生物的基礎實驗課，其實驗的理論和方法對現(xiàn)代生物科學的每個領域都有著重要的影響。特別是對于現(xiàn)代生命科學、食品科學和環(huán)境科學等都有極其重要的影響。因此，要想學生對生命科學基礎知識以及生命科學的發(fā)展動態(tài)有個系統(tǒng)的理解，就必須做好微生物學的研究教學工作。微生物學的教學關鍵還是實驗研究，然而一個實驗室的設備先進與否，更是作為評定高校科研水平的重要體現(xiàn)。作為高等本科院校，高效的實驗室管理以及合理的實驗教學改革對學生創(chuàng)新能力的發(fā)展尤為重要。筆者就多年的教學經(jīng)驗以及近些年我校對于微生物學實驗教學的改革，和對實驗室的管理做出如下總結。

1 增強實驗室管理力度，提升教學質量

我們都知道合理的管理章程可為提升教學成果，培養(yǎng)和提升學生自主動手及創(chuàng)新能力奠定良好的基礎。但是實驗室的所有程序是一個完整系統(tǒng)，必須從細節(jié)做起，才能達到服務于教學、有利于學生學習目的。

1.1 強化實驗室管理，更新健全各項管理制度

有條不紊的實驗室管理制度，才能創(chuàng)造安全有序的實驗環(huán)境，從而是實驗正常進行。具體實施如下：安排特定人員管理實驗室，且制定除院辦公室有備用鑰匙外，和實驗管理人員配帶1把，其他人一律不得攜帶，從而確保了實驗室的設備安全。水災、火災的防控是實驗室管理的基本。高校微生物實驗室也建有“實驗室安全制度”和“實驗人員職責”等制度。便捷的常規(guī)管理不但縮減了工作量，而且還降低了工作難度，使效率在逐步提升中。我們要求學生使用試劑后及時放回原處，便于本組同學或下組同學使用。避免了學生使用后隨處亂放、不能及時清理的壞習慣，使得每次實驗都能夠井然有序的進行。這樣不但確保實驗能毫無差錯地開展，而且加大了實驗室管理的安全性。

1.2 加強儀器管理，確保實驗正常進行

顯微鏡無疑是最常用的實驗儀器，如果管理不當會大大影響實驗的進程。因此，在使用前要向學生多次強調務必要安全使用，其他儀器的使用也會同樣強調，效果非常明顯。為了便于檢修，我們將所有的實驗儀器都進行了編號，并將各儀器配有使用登記本，要求使用者在使用后及時登記使用情況。然后將其掛在有相應編號的顯微鏡上，并將顯微鏡放入相應編號的儲藏柜中，這樣整個實驗室顯得特別整潔有序。學期結束前，我們對所有的顯微鏡實施徹底查看，將需要修理的進行統(tǒng)計，然后將結果提交到秘書辦公室，使其能夠即時得到修理，確保下學期實驗時顯微鏡能夠正常使用。

2 強化實驗教學改革，適應形勢發(fā)展需要

2.1 建立完善的考核制度

以往的生物教學實驗檢測過于看重實驗報告上的最后結果，卻疏忽了在整個過程中培養(yǎng)學生們的實地動手能力。這種實驗導致學生們覺得只要在最后填寫的結論是對的就可以，根本不必實際操作，這種實驗不僅失去的本身的意義，還大大地扼殺了學生參加實驗的興趣。我們該如何應對這種情況？為此我們對實驗核制度做了修改，將考核內容更改為從熟記實驗報告―― 具體操作―― 真實做出實驗報告。通過此次實驗制度的完善相信大幅度提高了學生的實驗積極性。

2.2 加強課堂整體連貫性

生物實驗課是在每學年的第一學期開課，為了使每個實驗達到預期效果。在基礎技能培訓中，我們將實驗步驟按順序分為：基礎實驗、微生物的形態(tài)觀察實驗、微生物數(shù)量的鑒定、細胞大小鑒定和微生物生理生化指標的測定。培養(yǎng)基的制備及高壓滅菌實驗，該實驗中制備的大量培養(yǎng)基可以供后續(xù)實驗使用。通過整個過程，器皿和儀器的使用方法將深入學生大腦，以及是學生對實驗基本理論得到進一步的了解，可在原理上更進一步理解每一步驟的含義，在操作上不斷領會每個細節(jié)的注意事項，這樣熟練整個操作過程，養(yǎng)成較好的實驗操作習性，為以后的深入研究墊下結實的基礎。

2.3 讓學生自主實施實驗

為了鍛煉學生實驗的基本功，強化學生實驗動手能力，需要對《微生物學》課程實驗進行優(yōu)化。驗證性實驗，學生只能學到很多底層的操作技能，卻無法將所學內容與實踐相聯(lián)系起來。讓學生領悟課堂上所學的實驗技能，去進一步制定出新的方案，將不同的實驗技能做到綜合運用。這不光讓學生掌握了實驗理念，更鞏固了實驗技術，而且還提升了學生的積極自主操作技能。

傳統(tǒng)理念中，實驗前期準備都是由教師們進行，學生完全是被動學習知識，實驗課時他們只需要按照實驗步驟做下去即可。為了改變這一局面，學生都是自己著手準備實驗，自己動手的學生不但鞏固了實驗課所學內容，他們的自主動手能力也得到了大大的進步，明顯高于其他同學，保證了整節(jié)課的順利進行。學生參與準備不但減輕了實驗老師的準備工作量，還使學生親身體驗了準備實驗的煩瑣和辛苦，為他們以后做其它方面的實驗和畢業(yè)設計奠定了扎實的地基。

3 結語

總之，一節(jié)實驗課成功的進行和良好的實驗室管理是密不可分的。近幾年，通過我們堅持不懈地強化實驗室的管理與工作方法的改革，收效非常明顯。學生不但對微生物學這門看似枯燥無味的學科有了濃厚的學習興趣，而且進一步調動了教師們對微生物學理論教學和實驗教學的積極性。只要不斷強化自己，勇于創(chuàng)新，堅持將實驗理念和實踐相結合的原則，消除學生的散漫氣氛，實驗教學的質量必定還逐漸得到升級，教學改革也將推向縱深。

參考文獻

[1] 李順鵬.微生物學實驗指導[M].中國農(nóng)業(yè)出版社，2003（3）.